基于SALLE-LC-MS/MS技术的精液中多种内分泌干扰物同步检测新方法及其在男性生殖健康研究中的应用

本研究开发了一种基于盐辅助液液萃取（SALLE）结合液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）的创新分析方法，成功实现了精液中8种全氟烷基酸（PFAS）、2种双酚类、4种对羟基苯甲酸酯及4种二苯甲酮类内分泌干扰物（EDCs）的高灵敏度同步检测。该方法通过化学计量学优化实验条件，具备操作简便、成本低、回收率高（85.5–112.5%）等优势，为男性不育相关EDCs的大规模生物监测提供了可靠技术支撑。

　　

Chemicals and reagents

除非另有说明，所有试剂均为分析纯级别。实验使用了双酚类标准品包括双酚A（BPA）、双酚S（BPS）及氘代双酚A（BPA–D₁₆），对羟基苯甲酸酯类包括甲基paraben（MPB）、乙基paraben（EPB）、丙基paraben（PPB）、丁基paraben（BPB）及其对应的¹³C₆标记类似物（MPB-¹³C₆、EPB-¹³C₆、PPB-¹³C₆、BPB-¹³C₆）。二苯甲酮衍生物包括二苯甲酮-1（BP-1）、二苯甲酮-3（BP-3）、二苯甲酮-8（BP-8）和4-羟基二苯甲酮（4-HBP），以及标记内标BP-3-D₅。全氟烷基酸（PFAS）涵盖全氟丁酸（PFBA）、全氟戊酸（PFPeA）、全氟己酸（PFHxA）、全氟庚酸（PFHpA）、全氟辛酸（PFOA）、全氟壬酸（PFNA）、全氟癸酸（PFDA）和全氟辛烷磺酸（PFOS），并采用¹³C₂-PFHxA、¹³C₄-PFOA、¹³C₅-PFNA、¹³C₂-PFDA和¹³C₄-PFOS作为同位素标记内标。

Diagnosis and optimization of SALLE conditions

研究的四个实验参数包括乙腈（ACN）体积、ACN中甲酸百分比、水体积和氯化钠质量。通过两水平2⁴因子设计（含六个中心点重复）评估这些变量对信号响应强度（以峰面积表示）的影响，实验重复两次以确保稳健性。测试范围及实验域详见表S1。图1展示了标准化效应Pareto图，直观显示了各变量及其交互作用对响应值的显著性影响。

Conclusions

通过SALLE结合LC-MS/MS技术，成功对21名志愿者精液样本中的PFAS和酚类EDCs进行了定量分析。实验参数通过化学计量学方法优化，整个流程经过严格验证。综上所述，该方法具有显著的操作优势，结合简易性、高效性和适应性，为EDCs相关男性生殖健康研究提供了强有力的分析工具。