神经丝轻链（NfL）作为血管炎性神经病外周神经损伤标志物的跨区室相关性研究

本文通过神经活检与血清生物标志物的跨区室分析，首次证实神经丝轻链（NfL）与急性轴突变性（而非慢性轴突丢失）显著相关，为血管炎性神经病的早期诊断和治疗监测提供了重要依据。研究创新性结合组织学定量（CD68+巨噬细胞浸润、变性轴突计数、卵圆体形成比例）与SIMOA技术，排除了年龄和中枢神经系统（CNS）疾病的干扰，凸显NfL在反映外周神经急性损伤中的特异性价值。

　　

1 引言

血管炎性神经病因其临床表现和实验室检查结果的异质性，诊断与监测始终面临重大挑战。神经活检虽是诊断金标准，但存在创口感染、持续性疼痛及感觉功能永久丧失等风险，且高达55%的病例因缺乏血管壁破坏等特征性病理表现而无法确诊。当前治疗监测主要依赖临床随访和炎症标志物如C反应蛋白（CRP），但这些指标仅反映全身炎症而非特异性神经损伤。

神经丝蛋白作为神经元特异性成分，在神经元损伤后释放至血清和脑脊液（CSF），其中神经丝轻链（NfL）因检测技术进步成为研究热点。NfL检测可识别神经降解后暴露的隐藏表位，已在多发性硬化、肌萎缩侧索硬化症等中枢及周围神经系统疾病中作为生物标志物应用。近期研究表明，血管炎性神经病急性期患者血清NfL（sNfL）水平升高，缓解期下降，但其与周围神经组织退变的直接关联尚未明确。本研究通过匹配神经活检样本与血清样本，首次探讨sNfL水平与组织学证实的神经损伤间的相关性。

2 方法

2.1 伦理与患者招募

研究经Charité伦理委员会批准（EA/269/21），基于柏林医院法及患者入院书面同意书使用临床数据和生物样本。通过关键词和诊断检索数据库，纳入35例接受腓肠神经活检且保留匹配生物样本（血清、CSF、神经组织）的患者，样本采集时间范围为活检前后30天。收集临床数据包括年龄、性别、临床与病理诊断、疾病时间进程（急性：<1周；亚急性：1-8周；慢性：>8周）及伴随CNS疾病情况。

2.2 NfL测量

采用单分子阵列（SIMOA）技术检测血清、CSF和神经组织中的NfL水平。神经组织经匀浆离心后，通过BCA法测定总蛋白含量，NfL水平以占总蛋白百分比表示。为控制混杂因素，计算年龄特异性Z评分及sNfL/CSF-NfL比值。4例组织样本和4例CSF样本因荧光值超过检测上限而进行封顶处理，敏感性分析证实结果稳健。

2.3 组织学分析

利用标准诊断制备的切片，通过数字扫描及Qupath、ImageJ等软件进行定量分析。所有自动图像分析均经过盲法半定量验证，手动分析全程盲态进行。主要分析包括：

• •

  慢性轴突丢失：通过NF70染色面积百分比（ImageJ自动分割）和甲基蓝染色髓鞘纤维密度（监督学习形态计量法）评估。

• •

  急性轴突变性：综合三项参数：（1）半薄切片中形态学明确的变性轴突计数；（2） teased纤维制备中卵圆体形成比例；（3）CD68+巨噬细胞浸润面积（横纵切片平均标准化值）。最终构建急性损伤复合评分（%最大值）。

2.4 统计分析

使用GraphPad Prism进行Spearman秩相关分析（非正态分布数据），定义相关系数0.5为中度强相关阈值。假设检验采用双尾分析。

3 结果

3.1 患者特征

队列包括35例患者（男性23例，女性12例），年龄26-82岁，其中10例确诊或疑似血管炎，25例为其他神经病变。血管炎患者中6例为急性/亚急性病程，5例符合白细胞碎裂性血管炎组织学标准。非血管炎患者多表现为轴突神经病变（轻度至重度），无炎症迹象。9例患者存在相关CNS疾病。血清/CSF样本与活检中位时间间隔为4天。

3.2 sNfL与组织学参数的相关性

sNfL水平与慢性轴突丢失参数无显著相关性（NF+面积：r=?0.2, p=0.23；髓鞘纤维密度：r=?0.3, p=0.08）。相反，sNfL与急性轴突变性复合评分呈显著正相关（r=0.5, p=0.002），神经组织NfL水平同样与急性损伤相关（r=0.4, p=0.02）。典型案例如重度急性损伤患者（P2、P3、P7、P9）显示sNfL显著升高。

3.3 调整混杂因素后分析

经sNfL/CSF-NfL比值校正CNS影响后，急性损伤评分与比值仍显著相关（r=0.5, p=0.003），慢性参数无相关性。年龄Z评分调整后，sNfL与急性损伤评分相关性持续（r=0.4, p=0.01），但与慢性参数结果不一致（NF+面积呈负相关：r=?0.4, p=0.04；髓鞘密度无相关性）。剔除CNS疾病患者的次级分析未显示显著相关性，突显CNS混杂效应的重要性。

4 讨论

本研究首次通过组织学验证证实sNfL与急性轴突变性密切相关，而非慢性轴突丢失，支持NfL作为血管炎性神经病急性损伤的动态标志物。结果与既往研究一致：Bischof等报道活动期血管炎神经病患者sNfL升高，缓解期下降，提示缺血损伤后NfL从周围神经快速释放入血。慢性损伤无相关性可能因NfL在缓解期迅速降解，反映其指示活动性病变的特性。

尽管非血管炎特异性（如吉兰-巴雷综合征同样可见sNfL升高），但结合血管损伤标志物（如内皮微粒、vWF）可能提升诊断特异性。本研究优势在于综合组织学定量（手动与自动化结合）及多区室NfL检测，但样本量小、CNS疾病及肾功能等混杂因素需前瞻性研究控制。血-神经屏障完整性、CSF-周围神经直接流动等机制亦需深入探索。

未来方向包括：前瞻性验证队列、联合外周神经特异性标志物（如外周蛋白peripherin）、探索多标志物组合策略。结论支持sNfL作为急性轴突变性标志物用于血管炎神经病诊断与监测，但临床解读需综合考虑CNS病变及其他神经疾病可能性。