基于LAMP技术快速检测桑椹菌核病病原体Scleromitrula shiraiana与Ciboria carunculoides的方法开发及其应用研究

本研究针对桑椹菌核病潜伏期长、早期检测难的问题，开发了基于环介导等温扩增（LAMP）技术的快速检测方法。通过特异性靶向β-tubulin基因（Scleromitrula shiraiana）和calmodulin基因（Ciboria carunculoides）设计引物，结合羟基萘酚蓝显色反应，实现在65℃下45分钟内完成检测。该方法灵敏度高达100 fg/μL（S. shiraiana）和100 pg/μL（C. carunculoides），并成功应用于病圃土壤样本检测，为桑树病害早期防控提供了关键技术支撑。

　　

桑椹菌核病作为一种毁灭性真菌病害，严重威胁桑树产量与果实品质。由于该病害潜伏期较长，开发一种快速、灵敏且可靠的检测方法以实现无症状阶段的早期诊断至关重要。本研究针对病原菌Scleromitrula shiraiana的β-tubulin基因物种特异性区域，以及Ciboria carunculoides的calmodulin基因物种特异性区域，分别设计了环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）引物体系。通过添加羟基萘酚蓝（hydroxynaphthol blue）显色剂，可实现阳性结果的肉眼可视判读（颜色变化）。经条件优化后，确定LAMP反应在65℃下持续45分钟为最佳反应方案。特异性实验表明，该检测方法可准确区分S. shiraiana、C. carunculoides及其他9种亲缘植物病原菌。灵敏度测试显示，对S. shiraiana的检测下限达100 fg/μL，对C. carunculoides则为100 pg/μL。进一步通过实际病圃土壤样本检测，成功验证了该LAMP方法在田间应用的可行性。本研究为桑椹菌核病的快速检测提供了新技术思路与实用工具，对实现病害早期发现、及时防控及产业保护具有重要意义。