日落黄与人类碳酸酐酶II的结合：多光谱研究揭示的结构与功能调控机制及其毒理学意义

本综述通过多光谱技术（荧光、UV-Vis、圆二色性）系统解析了食品着色剂日落黄（SY）与人类碳酸酐酶II（hCA II）的相互作用。研究发现SY通过静态猝灭机制结合hCA II，诱导酶二级/三级结构改变，显著抑制酶活性（IC50=355.73 μM），并影响蛋白表面疏水性（PSH）及热稳定性。该研究为食品添加剂引起的酶功能调控提供了分子毒理学新见解。

　　

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Chemicals

日落黄（SY）、N-溴代琥珀酰亚胺（NBS）和对硝基苯乙酸酯（p-NPA）购自Sigma-Aldrich化学公司（美国密苏里州）。所有其他试剂为默克公司（德国达姆施塔特）分析纯级别。使用hCA II在280 nm处的摩尔消光系数ε=54,000 M^?1 cm^?1估算酶浓度。溶液用双蒸水配制于50 mM Tris-硫酸盐缓冲液（pH 7.75）。圆二色性实验在50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.5）中进行。

Protein purification

SDS-PAGE分析表明酶纯度超过98%（数据未显示）。

Carbonic anhydrase assay

SY对hCA II酶活性的影响如图1所示。该染料在900 μM浓度下完全抑制酶活性（IC₅₀=355.73±6.05 μM）。正如预期，多佐胺（标准抑制剂）对hCA II活性表现出强烈抑制。

Conclusion

日落黄是改善食品外观的常用着色剂。本研究通过多种生物物理技术揭示了hCA II-SY相互作用的机制。动力学结果表明SY可作为hCA II抑制剂，而NBS、PSH和CD实验表明染料诱导了蛋白结构紧凑性增加。

CRediT authorship contribution statement

Zohreh Shariati: 原创写作、方法验证、实验设计

Sirous Ghobadi: 评审编辑、研究监督、方法论

Faezeh Hasrati: 数据可视化、形式分析、实验执行

Declaration of competing interest

作者声明不存在可能影响本研究的已知财务冲突或个人关系。

Data availability

数据可根据要求提供。

Declaration of generative AI

作者未在写作过程中使用生成式AI技术。

Funding sources

本研究得到伊朗克尔曼沙赫拉齐大学研究委员会资助。

Acknowledgements

感谢拉齐大学化学学院Kashanian博士提供CD设备，以及Kheirdoosh博士的技术协助。