HLA-DQ同种异体表位探索新篇章：四个新表位的发现及其跨链表位的验证

《HLA》：The Hunt for HLA-DQ Allogeneic Eplets Is Not Over: Four New Ones, Including a Cross-Chain Eplet

本刊推荐：本研究通过系统分析DQ抗原序列比对，鉴定出未被HLA表位注册库（Epregistry）收录的多态性氨基酸，利用LABScreen和Lifecodes单抗原微珠（LSA）技术结合细胞吸附/洗脱实验，验证了3个DQB1新表位（14M/116V、203I、203V）和1个跨DQA1/DQB1链表位（α76Vβ55PP）。三维分子建模揭示了部分表位残基的可及性存在动态变化，强调了分子柔性对抗体结合的影响。该研究为复杂HLA系统的表位鉴定提供了多策略验证范式，对器官移植排斥（AMR）中供体特异性抗体（DSA）的精准识别具有重要临床意义。

　　

引言

抗HLA抗体针对供体HLA错配可导致抗体介导的排斥（AMR），这些供体特异性抗体（DSA）通过Luminex单抗原（LSA）微珠检测，识别错配HLA分子上的多态性氨基酸构成的表位（epitope）。表位核心区域的一个或数个多态性残基称为eplet，是抗体结合的功能单元。HLA表位注册库（Epregistry）通过氨基酸序列比对已推断超过550个HLA eplet，但尚未全部验证且列表不全。HLA-DQ在体液同种免疫中起主要作用，其α和β链的双多态性增加了免疫原性eplet的复杂性。Epregistry未涵盖潜在的双链（α/β）eplet，且大多数eplet缺乏实验验证。

材料与方法

通过IPD-IMG/HLA数据库（v3.56）和HLA-EMMA网站对LABScreen LSA试剂盒中的DQA1和DQB1抗原进行序列比对和表面可及性分析，筛选未被Epregistry收录的候选eplet。从303,638份LSA检测数据库中筛选MFI≥1000且针对其他DQ微珠MFI<500的血清。使用LABScreen和Lifecodes LSA试剂盒及互补DQpanel进行检测，血清经EDTA预处理。采用人脾单个核细胞（SMC）和HLA-DQ转染鼠细胞克隆进行抗体吸附/洗脱实验，通过百分比吸附（%ads）和洗脱（%elu）评估特异性。利用AlphaFold v3生成DQA1/DQB1抗原的三维结构模型，统计分析采用GraphPad软件ANOVA检验。

结果

候选DQ表位

序列比对发现8个候选多态性残基（DQA1: 26T/187A、52R、54F、215F；DQB1: 14M/116V、126Q、203I、203V），其中26T/187A和14M/116V为同一抗原上的远距离残基对。数据库筛选获得针对14M/116V、203I、203V和215F的血清各2、2、2、1份，MFI值均较高。52R因LSA模式异质性强需另文分析。此外，发现7例血清针对DQA1 * 03/DQB1 * 03组合的特异性模式，命名为α76Vβ55PP。

LSA一致性

互补DQpanel验证了除203V外所有eplet的LSA模式；Lifecodes试剂盒对14M/116V、203I、215F均阳性，但203V和α76Vβ55PP仅部分血清阳性，提示试剂间抗原构象或肽库差异影响检测。

吸附/洗脱验证

215F血清实为52SK和40GR抗体组合，被排除。其余4个eplet吸附实验显示：203V和α76Vβ55PP在转染细胞（C+）和SMC（S+）上%ads显著（-78%至-82%）；14M/116V和203I因血清高MFI需通过洗脱证实特异性（%elu 47%-94%）。非表位表达细胞（C-/S-）吸附均不显著。MFI_ads与MFI_NA比较有统计学差异（p<0.05）。

三维定位

14M位于双链连接处及肽结合槽附近，116V可及性低但分子动态柔性可能暴露其侧链；203和215残基嵌入膜内，但203处于膜域上部可能被识别；α76Vβ55PP中DQA1 76与DQB1 55/56位置邻近，提示抗体可能同时结合三残基或通过影响呈递肽间接参与表位形成。

讨论

本研究通过多策略验证了3个DQB1新eplet（14M/116V、203I、203V）和1个DQA1/DQB1跨链eplet（α76Vβ55PP）。三维模型显示部分残基（如203、215）生理条件下不可及，但实验证实203I/V的免疫原性，提示膜近端区域可能被抗体识别。eplet通常包含邻近多个残基，需位点定向突变精细定位。试剂间差异（如203V和α76Vβ55PP的Lifecodes低阳性率）强调考虑抗原构象、肽库和抗体亲和力的重要性。吸附实验中高MFI血清需洗脱验证，酸洗脱可能影响抗体活性需谨慎解读。人群数据库偏倚可能遗漏罕见eplet，跨中心合作可补充验证。DQA1/DQB1双链eplet的确认凸显DQ抗原特殊性，其表位可能涉及链间组合或呈递肽参与。本研究为Epregistry提供了实验验证的eplet，对移植前DSA风险评估和排斥机制研究具有价值。

作者贡献与致谢

M.D.、T.M.和L.G.完成实验；D.A.R.和C.U.完成三维建模与分析；M.D.和J.L.T.设计研究并撰写论文；T.M.、H.M.、O.T.和D.L.提供试剂；所有作者参与论文修订。感谢圣路易医院HLA实验室生物学家的技术支持。

利益冲突声明

作者声明无利益冲突。