昆虫媒介通过修饰筛管 occlusion 蛋白增强黄瓜花叶病毒系统运动机制研究

本研究发现蚜虫唾液蛋白葡萄糖脱氢酶（GLD）在取食过程中释放到植物韧皮部，建立氧化环境，促使筛管 occlusion（SEO）蛋白C端半胱氨酸残基氧化，形成分子间二硫键并促进SEO聚集。聚集的SEO直接与黄瓜花叶病毒（CMV）外壳蛋白（CP）相互作用，从而在韧皮部中促进病毒系统运动。这一生化级联反应揭示了病毒利用寄主维管系统进行系统运动的新机制，为降低蚜虫接种后病毒感染效率提供了关键靶点。

　　

引言

植物和动物采用截然不同的策略来运输液体、化学物质和大分子，但它们的维管导管（如血管和韧皮部）却具有显著的结构相似性。闭塞是维管网络响应系统性损伤的有效机制。在植物中，韧皮部组织含有特殊的纤维状结构蛋白，这些蛋白在受伤后形成筛板栓塞，阻止光合同化物的进一步运输。韧皮部闭塞作为一种快速反应的物理屏障，可消除韧皮部感染病原体的传播。为了对抗寄主植物免疫，病毒蛋白可以通过形成聚集囊泡来模拟韧皮部蛋白，或直接利用韧皮部蛋白作为病毒RNA载体通过筛板进行系统感染。然而，目前尚不清楚调节韧皮部闭塞的韧皮部蛋白对植物病毒的系统感染是有益还是有害。

病毒在植物内的传播主要通过两种途径：通过胞间连丝进行细胞间运动，以及通过维管系统进行长距离系统运输。短距离细胞间运动需要病毒运动蛋白等病毒因子修饰胞间连丝大小，但这一过程相当缓慢（每个细胞2小时）。相比之下，韧皮部长距离运动每小时可达数厘米，有利于病毒感染。在自然界中，许多植物病毒主要由昆虫媒介传播。探针和唾液分泌过程对于植物病毒的接种是必要的。在这种情况下，昆虫媒介的一些唾液蛋白可能通过修饰植物防御或韧皮部生理来为病毒系统运输提供便利。

植物维管组织由用于水和矿物质传导的无生命木质部，以及用于糖和大分子运输的有生命韧皮部组成。筛管是韧皮部的导管，由称为筛分子（SEs）的 elongated 细胞组成，这些细胞通过穿孔的筛板连接。筛板上的孔促进SEs之间的汁液流动。筛管内汁液的自由流动不仅为吸食韧皮部的昆虫提供了连续的光合同化物来源，而且为病毒系统感染提供了“高速公路”。被子植物的SEs含有丰富的结构韧皮部蛋白（P-蛋白），其特征是管状、纤维状或颗粒状超微结构。P-蛋白主要由筛管 occlusion（SEO）基因家族编码，分为非分散型和分散型。非分散型P-蛋白，也称为 forisomes，仅存在于豆科植物中，它们经历从独特的纺锤形P-蛋白到三到九倍大的栓塞样复合物的显著各向异性构象变化，以响应各种刺激，如创伤和Ca²⁺流。在蚜虫侵染时，由于蚜虫水状唾液中的Ca²⁺结合蛋白，forisomes的纺锤形状态（而非栓塞样复合物）保留在韧皮部中。相比之下，分散型P-蛋白存在于所有双子叶植物中，缺乏纺锤形状态。透射电子显微镜证据表明，分散型P-蛋白呈现两种状态：聚集状态，其纤维束锚定在SE膜上；或随机分散状态，其无序纤维填充SE腔。

分散型P-蛋白（此后称为分散型SEO蛋白）最初在未成熟的SEs中形成聚集的纤维结构，随着SEs成熟而转变为分散状态。在机械损伤的植物中，分散型SEO蛋白栓塞筛板以防止光合同化物的损失。这一密封功能得到了烟草（Nicotiana tabacum）中的一个案例研究的支持，该研究中敲低两个SEO基因显著增加了韧皮部渗出。考虑到聚集和分散形式同时在闭塞部位被观察到，目前尚不清楚哪种形式的SEO蛋白负责韧皮部闭塞。相反，在未受伤的植物中，两种形式都可以跨越筛板而不会阻塞筛孔。与咀嚼式昆虫或机械损伤相比，蚜虫取食通常对SEs造成的物理损伤最小。据推测，分散型SEO蛋白保持非闭塞性，使得在蚜虫侵染时韧皮部运输能够进行而没有物理阻塞。这与观察到蚜虫在拟南芥SEO敲低突变体上取食效率降低相一致。

SEO蛋白包含一个以四个半胱氨酸残基为特征的保守C端基序M1。这些SEO蛋白的半胱氨酸残基可能通过氧化形成分子间二硫键。据推测，分散型SEO蛋白从分散状态到聚集状态的转变是由氧化环境下分子间二硫键的形成引发的。此外，拟南芥和烟草中的分散型SEO蛋白在N端含有一个本质上无序区域（IDR）。弱和多价的蛋白质-蛋白质相互作用可以在两个不同分子的IDR之间形成，其中蛋白质通常经历液-液相分离（LLPS），并通过IDR介导的组装从分散状态转变为聚集状态。在植物中，LLPS可以通过结合病毒DNA/RNA或病毒蛋白来促进某些蛋白质与病毒颗粒的共聚集。鉴于这一特征，我们推测SEO蛋白可能通过与病毒共聚集来促进植物病毒在韧皮部中的长距离运动。

作为常见的节肢动物媒介，桃蚜（Myzus persicae）能够传播100多种植物病毒，包括黄瓜花叶病毒（CMV），其中大多数以非持久性方式传播。CMV颗粒短暂附着在蚜虫口针尖端，并在蚜虫探针和唾液分泌过程中传递到植物组织中。广泛的证据表明，蚜虫唾液触发韧皮部中活性氧（ROS）的积累，从而在取食部位建立氧化环境。因此，我们假设由蚜虫唾液蛋白建立的韧皮部氧化环境通过氧化SEO蛋白C端的半胱氨酸残基触发分子间二硫键的形成。这促进了SEO从分散状态到聚集状态的转变，从而与CMV共聚集以促进病毒跨筛孔转运。为了实验验证这些假设，我们具体研究了以下内容：（i）鉴定在韧皮部触发氧化环境的蚜虫唾液蛋白；（ii）在氧化环境下，SEO蛋白之间分子间二硫键的形成是否促进从分散状态到聚集状态的转变；以及（iii）SEO的聚集是否促进与CMV的相互作用以有效促进病毒的系统运动。

结果

蚜虫唾液蛋白GLD促进病毒系统感染

在用无针注射器对叶片进行人工接种病毒后，允许蚜虫在接种叶片上取食，以评估蚜虫取食对CMV传播的影响。被蚜虫侵染的植物的系统叶片比未被侵染的植物具有更高的CMV拷贝数。因此，我们推测蚜虫唾液效应子促进病毒的系统传播。蚜虫唾液和CMV的共同浸润增加了系统叶片中的CMV拷贝数，相对于仅接种CMV。通过蛋白酶K处理或煮沸唾液减少的CMV拷贝数表明，一些唾液蛋白可以促进CMV感染。

为了鉴定在蚜虫物种间保守的推定唾液效应蛋白，我们分析了来自六个蚜虫物种的唾液腺转录组数据库，包括 Pseudoregama bambucicola、M. persicae、Myzus cerasi、Sitobion avenae、Rhopalosiphum padi 和 Acyrthosiphon pisum。使用存在/缺失过滤方法，筛选了在所有六个蚜虫物种中共享的唾液蛋白基因。这些候选基因进一步通过信号肽的存在和跨膜域的缺乏进行过滤，这是唾液蛋白常见的选择标准。最终，鉴定出六个蚜虫物种共享的11个同源唾液蛋白基因。此外，三个蚜虫物种的唾液蛋白质组数据库，包括 M. persicae、A. pisum 和 Macrosiphum euphorbiae，被用来验证这11个候选是否存在于蚜虫唾液中。通过至少一个命中三个唾液蛋白质组，筛选出 M. persicae 中的七个候选基因。它们如下：LOC111043011（葡萄糖脱氢酶，GLD）、LOC111035238（碳酸酐酶，CA）、LOC111039228（表皮蛋白RR1）、LOC111031116（表皮蛋白RR2）、LOC111036182（化学感应蛋白，CSP）、LOC111042753（气味结合蛋白，OBP）和LOC111032921（过氧化物酶，POD）。这表明这七种蛋白质在蚜虫取食过程中可能被释放到植物中。qPCR结果证实，这七个选定蛋白质的基因转录本在 M. persicae 的唾液腺中表达，其中GLD的转录本丰度最高。这七个 M. persicae 的基因在烟草中表达，以评估它们对病毒系统感染的影响。GLD和CA的瞬时表达使系统叶片中的CMV拷贝数分别增加了26倍（p < 0.001）和4倍（p < 0.05），与空载体（EV）植物相比。POD的表达使系统叶片中的CMV拷贝数减少了五倍（P < 0.05）。由于GLD在所有三个蚜虫物种中被鉴定出，并导致最强的病毒系统感染，我们决定进一步研究蚜虫GLD在病毒系统感染中的分子功能。Western blotting分析仅在蚜虫侵染的植物叶片中检测到GLD。此外，蚜虫侵染叶片维管系统的横切和纵切表明，蚜虫GLD可以被分泌到植物的韧皮部中。

GLD增加韧皮部中的ROS产生

GLD已被鉴定为各种昆虫物种中最常检测到的唾液蛋白之一，并作为植物防御的抑制子。假设GLD的缺失会损害蚜虫的韧皮部取食效率。注射dsGLD 48小时后，dsGLD注射使唾液腺中的GLD转录本相对于dsGFP注射的蚜虫减少了43%。这一结果通过解剖唾液腺上的RNA荧光原位杂交（FISH）定位进一步证实，以及通过Western blot检测在被dsGLD和dsGFP注射蚜虫侵染的叶片中的GLD。为了确定GLD在蚜虫取食活动中的作用，使用电子穿透图（EPG）比较dsGLD和dsGFP注射蚜虫的取食行为。在非穿透、路径阶段、唾液分泌和韧皮部取食所花费的时间上，dsGLD和dsGFP注射蚜虫之间观察到很少差异。然而，取食于GLD浸润烟草植物的蚜虫比取食于EV浸润植物的蚜虫在路径阶段花费更多时间，但在唾液分泌和韧皮部取食上花费更少时间。取食效率的降低可能归因于农杆菌浸润叶片组织中蚜虫GLD的普遍表达。相反，它应主要在蚜虫取食期间分泌到筛管中。由于GLD是一种氧化还原酶，目前尚不清楚蚜虫GLD是否能在植物中诱导ROS产生。通过q-PCR确定了ROS相关基因的表达。与dsGFP注射蚜虫相比，dsGLD注射蚜虫的侵染降低了植物中过氧化氢酶（CAT）和RbohD的表达。与EV浸润植物相比，过表达GLD的植物显著上调了叶片中的抗坏血酸过氧化物酶基因（APX）和CAT，以及叶柄中的RbohD。此外，用荧光染料前体（H₂DCF-DA）浸润的蚜虫侵染植物和GLD表达植物都显示GLD激活的H₂O₂在叶肉和韧皮部中的产生。

与蚜虫侵染、唾液浸润和GLD过表达相关的烟草中SEOs差异表达

进行RNA-seq分析以比较蚜虫侵染与未侵染野生型植物、蚜虫唾液浸润与水浸润野生型植物，以及EV浸润植物与GLD表达植物的转录组谱。分别在与各自对照相比的蚜虫侵染、唾液浸润和GLD表达处理中，鉴定出7899、4242和4325个差异表达基因（DEGs）。其中，834个DEGs在所有三个比较组中共有。由于蚜虫侵染、唾液浸润和GLD过表达处理可以促进CMV系统感染，主要关注与病毒复制、防御反应、氧化应激反应、细胞壁组织和韧皮部发育相关的834个重叠DEGs中的102个。值得注意的是，4个与韧皮部发育相关的DEGs，包括LOC107790470、LOC107774440、LOC107809602和LOC107828400，被注释为编码SEO蛋白。事实上，烟草中有10个注释的SEOs，其中4个通过上述RNA-seq分析被筛选出来，并且在蚜虫侵染时上调。qPCR结果证实，蚜虫侵染、唾液浸润和GLD过表达上调了植物中LOC107790470、LOC107774440和LOC107809602的表达。LOC107790470和LOC107774440的表达水平显著高于烟草中的LOC107809602和LOC107828400。此外，被dsGLD注射蚜虫侵染的野生型植物表现出比被dsGFP注射蚜虫侵染的植物更低的LOC107790470和LOC107774440表达水平。LOC107790470先前被表征为烟草中的SEO1，并与LOC107774440的CDS序列有97%的相似性。使用针对LOC107790470和LOC107774440共享的245 bp保守区域的沉默靶标生成NtSEO-RNAi系（irSEO），并且irSEO植物表现出比野生型植物更低的LOC107790470和LOC107774440基因表达。

韧皮部SEO蛋白与CMV共定位并加速病毒系统传播

使用SEO多克隆抗体检测SEO蛋白，共聚焦显微镜显示SEO蛋白分布在韧皮部中，在野生型植物中的丰度高于irSEO植物。透射电子显微镜（TEM）图像显示，irSEO植物无法在韧皮部中合成正常数量的SEO纤维，其拥有的纤维比野生型植物少得多。这些结构特征与先前报道的烟草植物中组装的SEO蛋白一致。Western blotting分析显示，SEO蛋白在茎中表达而非叶片中，并且irSEO植物中的蛋白水平远低于野生型植物。取食于irSEO植物的蚜虫比取食于野生型植物的蚜虫花费更长的唾液分泌时间但更短的韧皮部取食时间。与irSEO植物相关的蚜虫唾液分泌频率增加。在人工接种病毒时，irSEO植物和野生型植物的接种叶片中的CMV拷贝数观察到很少差异。相反，irSEO植物在系统叶片中的CMV拷贝数低于野生型植物。这些结果表明，SEO蛋白促进蚜虫的韧皮部取食和病毒的系统感染。

由于GLD增加SEO蛋白表达并促进CMV系统感染，进一步研究了植物中蚜虫GLD和SEO蛋白之间的关系。GLD的过表达增加了野生型植物系统叶片中的CMV拷贝数，但对irSEO植物无效。蚜虫中GLD的敲低降低了野生型植物系统叶片中的CMV拷贝数，但不影响irSEO植物中的CMV拷贝数。同样，H₂O₂诱导的CMV拷贝数增加在irSEO中显著低于野生型植物。这些结果强烈表明，SEO蛋白在由蚜虫GLD触发的CMV系统感染加速中至关重要。此外，SEO蛋白与CMV外壳蛋白（CP）在韧皮部中共定位，表明它们之间存在物理相互作用。

GLD诱导筛板附近韧皮部中SEO蛋白的聚集

未侵染叶片的TEM图像显示不规则和随机取向的分散SEO纤维结构分布在韧皮部中。蚜虫侵染后，分散的SEO纤维聚集成高度有序的复合物靠近筛板。蚜虫中GLD表达的敲低降低了SEO蛋白的聚集水平。相反，GLD表达植物表现出比对照植物更高水平的聚集SEO蛋白。为了建立GLD诱导的ROS与SEO蛋白聚集之间的因果关系，外源应用1 mM H₂O₂于韧皮部。与对照植物相比，在H₂O₂处理的植物中观察到更高水平的SEO蛋白聚集。二硫苏糖醇（DTT）的应用减轻了由H₂O₂引起的SEO蛋白聚集水平。TEM图像还显示，GLD诱导的韧皮部ROS可以促进筛板附近SEO蛋白的聚集水平。韧皮部中SEO定位表现出显著的方法依赖性。先前的研究表明，经过化学固定的离体叶段在筛板处显示出特征性的SEO蛋白聚集，这是由于组织分离诱导的代谢 disruption 和人工渗透压 shock。相比之下，据报道，整体植物固定可以很好地保存筛管腔内的SEO蛋白分布。因此，使用整体植物固定方法进行相关测定以防止固定前 artifacts。

在蚜虫侵染植物的韧皮部中观察到比未侵染植物更大的筛孔平均直径。正如预期，被dsGLD注射蚜虫侵染的植物表现出比被dsGFP注射蚜虫侵染的植物更小的筛孔直径。同样，GLD表达植物表现出比对照植物更大的筛孔直径。此外，TEM图像显示，大量的纤维状SEO蛋白正在通过筛孔。很可能蚜虫GLD诱导SEO蛋白从不规则和随机取向的分散状态转变为高度有序的聚集状态，允许更多的纤维成分通过而非阻塞筛孔。

SEO蛋白C端基序中的半胱氨酸残基是氧化环境下SEO聚集的基础

SEO蛋白由N端（SEO-NTD，30–324aa）和C端结构域（SEO-CTD，487–718aa）组成。SEO-CTD中的基序M1具有高度保守的4个半胱氨酸残基。在本研究中，纯化的NtSEO1蛋白的LC-MS/MS分析表明，在天然条件下通过C701-C716和C704-C716交联形成分子间二硫键，但在还原（DTT）条件下则没有。由于C端四个半胱氨酸残基（701、704、716和717）在大多数植物物种中是保守的，构建了SEO^4CS突变蛋白，并将所有四个半胱氨酸替换为丝氨酸。

NtSEO在N端包含一个具有低复杂度结构域的42aa IDR。先前的工作表明，具有IDR的蛋白质具有经历LLPS的能力，可以从非聚集相转变为高度浓缩的聚集相。据推测，SEO的相变是由氧化环境下分子间二硫键的形成促进的，并且随着蛋白质浓度的增加，分子间IDR之间的弱多价相互作用可以进一步促进这种聚集。为了实验验证这一假设，使用标准的LLPS测定方法来确定：（i）SEO在响应氧化环境时的聚集；以及（ii）C端半胱氨酸在聚集过程中的作用。确实，增加的GFP-SEO浓度触发了更大聚集液滴的形成。在 high laser power 下对单个凝聚液滴进行光漂白，并测量漂白区域内的荧光恢复。标记漂白液滴的荧光信号的快速恢复（250秒内）表明GFP-SEO分子在凝聚和分散状态之间移动。相反，无论蛋白质浓度如何，在GFP-SEO^4CS中未观察到聚集液滴。纯化的重组GFP-SEO溶液形成各种大小的液滴，表明SEO的聚集和分散状态共存。此外，1 mM H₂O₂或25 μg mL^?1 GLD（来自 Pseudomonas sp.，CAS. 9028-53-9）诱导了GFP-SEO（在10 μM浓度下）的聚集，而10 mM还原剂DTT削弱了这种能力。在GFP-SEO^4CS中未观察到氧化诱导的聚集。

在瞬时表达GFP-NtSEO和GFP-NtSEO^4CS烟草的表皮细胞中检查了SEO聚集。在GFP-NtSEO植物中，GLD过表达、H₂O₂处理和蚜虫侵染促进了表皮细胞中的SEO聚集，但在GFP-NtSEO^4CS植物中则没有。这些结果表明C端四个半胱氨酸残基在SEO聚集中的关键功能。似乎纯的SEO蛋白体外仅能形成液滴，而在GFP-NtSEO植物中它们倾向于形成纤维样结构。然而，不能排除筛管中其他SEOs或其他植物蛋白的存在是这种结构差异的潜在贡献者。

氧化环境下的SEO聚集促进与CMV CP的共聚集

氧化环境可能促进SEO与CMV CP的共聚集。1 mM H₂O₂和25 ug mL^?1 GLD不直接影响CMV-CP-mCherry单独的聚集，但促进了SEO与CMV CP的共聚集。相反，10 mM还原剂DTT和对4个半胱氨酸残基的突变破坏了共聚集。此外，CO-IP显示SEO可以与CMV CP相互作用，并且半胱氨酸残基对于它们的物理相互作用至关重要。

SEO是CMV系统运动所必需的，氧化环境加速了这一过程

为了评估SEO蛋白C端四个半胱氨酸残基在病毒系统运动中的功能，生成了具有增强SEO和SEO^4CS表达的35S::SEO和35S::SEO^4CS转基因植物系。H₂O₂浸润和GLD的瞬时过表达增加了野生型和35S::SEO植物系统叶片中的CMV拷贝数。在没有H₂O₂处理或GLD过表达的情况下，35S::SEO和35S::SEO^4CS植物之间的CMV拷贝数几乎没有差异。当用H₂O₂处理或GLD过表达时，35S::SEO植物在系统叶片中表现出比35S::SEO^4CS植物更高的CMV拷贝数。这些结果表明，在氧化环境下，病毒系统感染在35S::SEO植物中比在35S::SEO^4CS植物中得到促进。

使用带有荧光标记GFP的重组CMV（CMV-GFP）来确定SEO蛋白在促进CMV在植物内长距离运动中的重要作用。无论GLD过表达和H₂O₂处理如何，在irSEO植物的系统叶片中未观察到明显的荧光。相反，在野生型和35S::SEO植物的系统叶片中显示出显著的荧光。GLD表达和H₂O₂处理都增加了野生型植物和35S::SEO植物中的感染叶片数量以及感染面积与整个植物的比率。此外，当GLD瞬时表达时，在35S::SEO植物中观察到比野生型植物更多的感染叶片。

讨论

病毒已经发展并采用多种策略来确保其在植物和脊椎动物寄主感染后的复制和传播。通常，当植物韧皮部被广泛利用时，虫媒病毒从原始感染部位到远端组织的感染性更强。鉴于这一事实，我们发现桃蚜在取食过程中将唾液蛋白GLD分泌到植物韧皮部，诱导H₂O₂产生的积累。这导致韧皮部中SEO蛋白的半胱氨酸残基氧化，从而诱导从随机分散状态到高度有序聚集状态的结构转变。我们的结果进一步证明，聚集的SEOs在氧化环境下促进与CMV CP的共聚集，使病毒能够跨过筛板。总之，这项研究强调了植物病毒与其昆虫媒介在促进长距离病毒运动方面的协调。

韧皮部维持精确、快速和高度动态的ROS稳态调整机制。它可以被韧皮部取食者释放的唾液蛋白扰乱。蚜虫诱导的ROS积累在植物和蚜虫的相容和不相容互作中都被广泛观察到。先前的研究表明，快速和瞬时的ROS积累通常与植物和蚜虫的不相容互作相关，而延迟和温和的ROS积累最常在相容互作中观察到。例如，非烟草适应谱系的 M. persicae 比烟草适应谱系在韧皮部诱导更强的H₂O₂积累。韧皮部中高反应性H₂O₂的爆发导致细胞损伤以及木质素和酚的形成，从而抑制蚜虫韧皮部取食。相反，对相容蚜虫侵染的植物氧化反应通常来自唾液中的氧化酶，这些酶通常促进侵染过程。GLD是蚜虫唾液中最丰富的氧化还原酶之一，通常使用黄素腺嘌呤二核苷酸而非O₂作为主要电子受体催化葡萄糖第一个羟基的氧化。这解释了为什么GLD表现出较低的氧化酶活性，并且仅在韧皮部引起温和的ROS激活。一致地，本研究表明，在GLD过表达植物或dsGLD蚜虫侵染植物中，很少有ROS相关基因受到显著影响，除了CAT或APX。然而，当与GLD表达植物相关时，GLD诱导的ROS有助于限制蚜虫韧皮部取食的基础防御。此外，有强烈迹象表明，温和的ROS而非强ROS更有利于目标蛋白半胱氨酸残基的基于巯基的修饰。我们的数据还提供证据表明，蚜虫GLD可以在韧皮部建立温和的氧化微环境，这是SEO蛋白半胱氨酸残基巯基上二硫键形成的理想环境。

韧皮部SEO蛋白在进化上不同的植物科中表现出不同的构象状态。在豆科植物中，forisome型SEO蛋白可以组装成独特的巨型机械蛋白，其中涉及多个阶段和各种分子间相互作用以确保可逆的筛管闭塞。通常，forisome单体通过疏水蛋白质-蛋白质相互作用形成二聚体，随后形成细丝。来自蒺藜苜蓿（Medicago truncatula）中典型forisome MtSEO的证据表明，四个疏水芳香族氨基酸（Trp100、Tyr115、Tyr195和Trp196）对二聚化特别重要。两个细丝螺旋缠绕形成纤维，涉及非共价相互作用。几个纤维最终组装成纤维束或聚集体。由C端保守半胱氨酸残基形成的分子间二硫键稳定了MtSEO的聚集子结构，而这些半胱氨酸残基的突变导致MtSEO在Ca²⁺应用时分崩离析。尽管与forisome型SEO相比密度较低，但所有双子叶植物中的分散型SEO在未成熟筛管中也表现出聚集的纤维结构，并在筛管成熟时呈现分散状态。在本研究中，我们证明由C端半胱氨酸形成的分子间二硫键促进NtSEO从分散纤维到聚集复合物的转变。N端分子间IDR之间的弱多价相互作用进一步促进了NtSEO聚集的 initiation，并且还观察到与NtSEO相互作用蛋白CMV CP的共聚集增强。这些结果表明，在氧化环境下NtSEO与CMV CP的共聚集使病毒颗粒能够形成可移动的聚集体，这些聚集体可以通过筛板。

理论上，由于SEO组装的纤维样结构蛋白在筛板处栓塞，阻止光合同化物的运输，韧皮部闭塞赋予了对吸食韧皮部昆虫的有效和强大的抗性。为了持续从豆科植物的韧皮部吸收，蚕豆蚜（Megoura viciae）释放的唾液效应子 counteract forisome的 transformation，从而防止韧皮部闭塞。有趣的是，我们的结果发现，蚜虫难以从irSEO植物吸取韧皮部汁液，相对于野生型植物，表明SEO是蚜虫韧皮部取食所必需的，而