患者血清体外特性预测肝细胞癌高剂量率近距离放疗后临床结局：血清诱导因子与肿瘤增殖的关联研究

本刊推荐：本研究首次揭示肝细胞癌（HCC）患者接受高剂量率近距离放疗（HDR-BT）后血清中存在的诱导因子可显著改变肝癌细胞系（Huh7、HepG2）的体外增殖活性，并通过BrdU掺入实验和细胞周期蛋白E（Cyclin E）表达分析证实，血清促增殖效应与不良临床结局（如系统进展时间缩短）显著相关，为HCC局部消融治疗后肿瘤生物学行为提供了新的洞察和潜在生物标志物。

　　

引言

肝细胞癌（HCC）局部消融治疗后复发是临床实践中的主要挑战，高剂量率近距离放疗（HDR-BT）作为放射基消融技术，其治疗后系统性效应尚不明确。既往研究多聚焦于热消融技术，表观遗传调控如microRNA改变、蛋白水平变化（如STAT3信号通路）以及循环生长因子（如EGF、血管生成蛋白）可能与患者预后相关，但直接证据有限。本研究旨在评估HDR-BT前后患者血清对肝癌细胞系增殖和细胞周期动力学参数的改变，并探究其与临床结局的相关性。

材料与方法

研究纳入23例既往未治疗的BCLC A或B期HCC患者，所有患者接受HDR-BT（单次15 Gy）治疗。根据疗效将患者分为应答者（12例，定义为6个月内无进展且2年内无弥漫性系统进展）和无应答者（11例，6个月内复发和/或2年内出现弥漫性系统进展或肝外疾病）。分别于术前24小时和术后48小时采集患者血清，用于体外培养两株肝癌细胞系（Huh7和HepG2）。细胞在含20%患者血清的培养基中孵育72小时，通过BrdU掺入实验评估DNA合成活性，计算术后与术前血清的BrdU掺入比率（% BrdU post/pre）。同时，采用免疫组化法检测细胞周期蛋白E（Cyclin E）在代表性子集患者血清刺激下的表达动力学。图像分析通过ImageJ软件处理，统计方法包括Mann-Whitney U检验、Fisher精确检验、ROC曲线分析及生存分析（log-rank检验）。

结果

研究人群特征

患者基线特征在应答者和无应答者间无显著差异，平均随访628天，无应答者的系统进展时间（TTSP）显著短于应答者（341天 vs. 892天）。

BrdU掺入与治疗应答相关

在Huh7细胞中，无应答者术后血清诱导的BrdU掺入比率显著高于应答者（2.14 vs. 0.51, P=0.0158），且90.9%的应答者显示比率下降（<0.9），而81.8%的无应答者显示比率上升（>1.1）。HepG2细胞中观察到类似趋势（比率：2.00 vs. 0.61, P=0.0004），所有应答者均显示比率下降，70%无应答者显示上升。两种细胞系结果一致性达86.9%。

Cyclin E表达验证增殖差异

在血清饥饿同步化的HepG2细胞中，无应答者术后血清诱导的Cyclin E表达比率在6小时达峰值，显著高于应答者（交互作用P=0.0182），证实细胞周期G1/S期转换加速。

BrdU掺入预测临床结局

ROC分析显示BrdU掺入比率区分应答者与无应答者的AUC为0.80（Huh7）和0.89（HepG2）。生存分析表明，BrdU比率>1.1的患者TTSP显著缩短（Huh7: HR=16.06, P=0.0003；HepG2: HR=8.93, P=0.0009）。

蛋白质组学关联分析

92种免疫 oncology 相关蛋白的邻近延伸 assay 显示，多效生长因子（PTN）和细胞毒性T细胞分子（CRTAM）的术后/术前比率与BrdU掺入比率显著相关（Spearman r>0.5），提示其可能参与调控血清诱导的增殖效应。

讨论

本研究首次证实HDR-BT后患者血清可直接调控肝癌细胞体外增殖，且增殖效应与临床不良结局紧密相关。血清中可能存在多种促肿瘤因子（如PTN、CRTAM）共同作用，驱动细胞周期进展。该发现为HCC局部治疗后肿瘤生物学提供了新视角，血清诱导的增殖 assay 可作为预测治疗反应的潜在生物标志物，助力临床分层管理和辅助治疗决策。局限包括样本量较小、机制未明及外推至其他消融技术或癌型的需验证。

结论

HDR-BT后患者血清可改变肝癌细胞系增殖参数，其体外效应与临床结局显著相关，为HCC治疗反应预测提供了新型血清生物学指标。