芍药苷与甘草酸协同治疗溃疡性结肠炎的机制研究：网络药理学与实验验证

《Chinese Journal of Analytical Chemistry》：Evaluation of Combined Paeoniflorin and Glycyrrhizin Therapy for Ulcerative Colitis In Vitro and In Vivo

本研究针对溃疡性结肠炎（UC）现有疗法副作用大、疗效有限的临床难题，通过网络药理学筛选出芍药苷（PA）与甘草酸（GL）组合（PAGL）的关键靶点（IL6/STAT3/TNF等），结合体外细胞实验和DSS诱导的小鼠模型证实PAGL能显著抑制促炎因子（IL1B/IL6/TNF）、提升抗炎因子IL10表达，并改善结肠长度和疾病活动指数（DAI），为中药复方治疗UC提供了新策略。

　　

溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis, UC）是一种慢性炎症性肠病，主要表现为结肠黏膜的持续性炎症，患者常出现血性腹泻、腹痛和里急后重等症状。近年来，UC的全球发病率持续上升，尤其在发达国家和地区负担较重。目前临床主要采用氨基水杨酸类药物和皮质类固醇进行治疗，但这些药物长期使用会带来免疫抑制和依赖性等副作用，且疗效有限。因此，开发安全有效的新型治疗策略成为当务之急。

在这一背景下，传统中药（TCM）因其多成分、多靶点的作用特点受到广泛关注。其中，芍药苷（Paeoniflorin, PA）和甘草酸（Glycyrrhizin, GL）分别源自白芍和甘草，是两种具有显著抗炎和抗氧化活性的天然化合物。既往研究表明，PA和GL在单独应用时对UC有一定改善作用，但二者联合使用的协同效应及作用机制尚不明确。为此，来自厦门市中医院的研究团队开展了一项整合网络药理学分析、分子对接、体外细胞实验和体内动物模型验证的系统研究，旨在阐明PA与GL组合（PAGL）治疗UC的潜在机制及疗效。该研究发表于《Chinese Journal of Analytical Chemistry》。

在研究过程中，作者主要采用了以下几项关键技术方法：首先利用网络药理学从TCMSP、ETCM、CTD和Swiss Target Prediction等数据库筛选PA和GL的潜在作用靶点，并与UC疾病靶点取交集，使用STRING数据库构建蛋白互作（PPI）网络，借助Cytoscape进行拓扑分析和模块识别；接着通过DAVID和KOBAS数据库进行GO功能与KEGG通路富集分析；采用AutoDockTools进行分子对接验证结合能力；在实验验证部分，使用CCK-8法检测细胞活性，Western blot（WB）和ELISA测定炎症因子蛋白水平，RT-qPCR检测基因表达，并建立DSS诱导的UC小鼠模型，评估结肠长度、疾病活动指数（DAI）和组织病理变化。所有统计分析均使用SPSS 22.0和GraphPad Prism 7.0完成。

研究结果主要包括以下几个方面：

3.1. 获取PAGL抗UC的潜在靶点

通过多数据库筛选和取交集分析，共得到36个PAGL-UC共同作用靶点，包括TNF、IL6、IL1B、IL10和STAT3等关键炎症相关因子。

3.2. 构建蛋白互作网络

PPI网络显示这些靶点之间存在密切相互作用，其中IL6、STAT3、TNF、IL1B和IL10节点度最高，提示它们可能是PAGL作用的核心靶标。MCODE模块分析进一步识别出以IL10为种子节点的功能簇。

3.3. GO与KEGG富集分析

GO分析表明靶点显著富集于炎症反应、细胞对脂多糖应答等生物过程；KEGG分析提示PAGL主要通过炎症性肠病通路（hsa05321）、癌症通路和IL-17信号通路等发挥治疗作用。

3.4. 分子对接验证

PA和GL与核心靶点（如IL1B、IL10、STAT3等）均表现出较强的结合能力，结合能均低于-5 kcal/mol，表明二者可直接作用于这些靶点。

3.5. PAGL协同调节炎症性肠病信号通路

细胞实验显示，PAGL可浓度依赖性地提高CCD-841 CoN细胞活力，降低促炎因子（IL1B、IL6、TNF、STAT3）的蛋白表达，同时升高抗炎因子IL10的水平。此外，PAGL处理还显著降低了LPS诱导的ROS水平，改善SOD活性和MDA含量，表明其具有抗炎和抗氧化双重作用。

3.6. PAGL缓解DSS诱导的小鼠结肠炎

动物实验表明，PAGL治疗显著改善DSS引起的结肠缩短、高DAI评分及组织病理损伤（如炎细胞浸润和黏膜结构破坏）。

3.7. 结肠组织中炎症细胞因子的mRNA水平

RT-qPCR结果显示，PAGL干预显著下调了结肠组织中Il1b和Il6的mRNA表达，同时上调了Il10的表达，与体外实验结果一致。

在讨论部分，作者指出PA口服生物利用度较低（仅3–4%），而GL可在肠道菌群作用下转化为活性更强的甘草次酸，二者联合可能通过抑制P-糖蛋白（P-gp）介导的外排作用提高PA的生物利用度，从而增强疗效。分子对接和实验数据共同支持PAGL通过调控炎症性肠病相关通路（如NF-κB、JAK/STAT等），平衡促炎与抗炎因子，缓解UC进展。与现有化学药物相比，PAGL具有多靶点、副作用小和来源天然的优势。

该研究不仅深化了对中药复方协同作用机制的理解，也为临床开发PA与GL联合治疗UC提供了坚实的理论依据和实验支持。尽管在剂量效应关系、药代动力学互动及临床转化方面仍需进一步探索，但本研究无疑为UC的药物治疗策略开辟了新的方向。