NGS在晚期非小细胞肺癌可操作突变检测中的诊断准确性：系统评价与荟萃分析

为解决晚期非小细胞肺癌（NSCLC）中可操作突变（AM）的精准检测难题，研究人员开展了基于组织（TT）和液体活检（LB）的下一代测序（NGS）与常规技术的诊断准确性比较研究。结果显示，NGS在组织中检测EGFR（敏感性93%，特异性97%）和ALK重排（敏感性99%，特异性98%）具有高准确性；在液体活检中，NGS对EGFR、BRAF V600E、KRAS G12C和HER2突变敏感（敏感性80%，特异性99%），但对ALK、ROS1、RET和NTRK重排敏感性较低。该研究为NGS在临床实践中的应用提供了重要证据，支持其作为全面突变分析的有效工具。

　　

肺癌一直是全球癌症发病和死亡的主要原因之一，2022年报告了240万新发病例和180万相关死亡。这种高疾病负担占全球伤残调整生命年（DALYs）的4650万，自2010年以来增长了18.3%。随着癌症研究的进展，可操作突变（actionable mutations, AM）的识别成为精准医疗的关键，它们能够预测特定治疗的响应，并改变了晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）的治疗模式。当前指南建议对所有晚期NSCLC患者进行AM检测，无论是顺序还是并行进行，以促进靶向治疗的应用，带来显著的临床益处。

组织样本（tumor tissue, TT）仍然是肿瘤分析的金标准，因此保存组织以确保有足够材料进行当前和未来研究是优先事项。作为替代方案，循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA, ctDNA）被提出作为一种实时、非侵入性的生物标志物，提供预后和预测信息，用于治疗监测，并在组织不可用时实现突变检测，因其与组织分析具有高度一致性。然而，ctDNA检测存在局限性，包括克隆性造血（clonal hematopoiesis）的干扰，可能导致假阳性和误导性治疗建议。其敏感性还与肿瘤负荷相关，通常在晚期患者中较高。这些局限性增加了无效结果的风险，包括 artifacts 和那些没有治疗选择的突变。

为了最大化利用来自肿瘤组织（TT）和液体活检（LB）的可用样本，应优先选择能够识别最多改变同时确保资源合理使用的技术。下一代测序（next-generation sequencing, NGS）是推荐的方法，用于同时评估多个突变，促进个性化治疗的早期启动。技术的进步使得这些分析更易于临床使用。

本研究旨在通过系统文献回顾和荟萃分析，提供关于NGS在TT或LB样本中识别AM的诊断性能信息，与其它技术进行比较，以指导晚期NSCLC患者的靶向治疗。

研究人员通过系统检索PubMed和EMBASE数据库，从2023年9月至10月进行文献筛选，不限制发表日期或语言。研究纳入标准包括晚期NSCLC患者（根据美国癌症联合委员会（AJCC）分期系统定义为局部晚期（III期）或播散性疾病（IV期）），并报告使用NGS与另一种诊断技术评估AM的比较。详细检索策略和术语已在公开协议中指定。数据提取由两名研究者共同完成，使用Microsoft Excel?存储信息，包括样本数量、样本类型（组织或血浆）、测序平台以及每个突变的真阳性、假阳性、假阴性和真阴性数据。标准护理（standard-of-care, SOC）技术定义为当前临床指南推荐的常规突变分析方法，例如基于PCR的检测用于点突变，免疫组织化学（IHC）用于基因重排的初步筛查，并通过荧光原位杂交（FISH）或其他原位杂交（ISH）方法进行确认。质量评估使用QUADAS-2工具进行，由成对研究者完成，任何分歧通过共识解决。荟萃分析使用Stata 17?进行，通过“metadta”命令汇总敏感性和特异性，并生成森林图可视化结果。统计分析包括比例差异的假设检验和平均差异的t检验，显著性水平设为p<0.05。

研究共分析了56项研究，涉及7143名患者。在有效结果百分比方面，组织标准测试与NGS之间无显著差异（85.57% vs. 85.78%；p=0.99），液体活检标准测试与NGS之间也无显著差异（81.50% vs. 91.72%；p=0.277）。液体活检的周转时间（TAT）显著 shorter（8.18 vs. 19.75天；p<0.001）。NGS在组织中检测EGFR突变（敏感性93%，特异性97%）和ALK重排（敏感性99%，特异性98%）表现出高准确性。在液体活检中，NGS对EGFR、BRAF V600E、KRAS G12C和HER2突变有效（敏感性80%，特异性99%），但对ALK、ROS1、RET和NTRK重排的敏感性有限。商业和内部NGS面板在液体活检中检测EGFR突变时，无显著差异 in sensitivity or specificity。

本研究评估了NGS在NSCLC中检测可操作突变的诊断性能，并提供了其临床适用性的关键见解。NGS方法在液体活检中显示出显著更短的周转时间，同时与标准组织方法保持高度一致性。NGS技术在检测NSCLC中的可操作突变方面表现出高敏感性和特异性，但在检测基因重排方面存在局限性。克隆性造血可能导致假阳性并影响测试准确性，液体活检中低频率变异的检测在肿瘤负荷低的患者中仍然具有技术挑战性，可能影响整体敏感性。

需要进一步的验证和缓解策略来解决这些问题，重点是通过基于RNA的测序方法改进重排检测。内部NGS面板可能提供减少周转时间和成本效益的替代方案；然而，其临床实施需要严格的内部和外部验证，当前证据有限。通过 enabling 在单个样本中同时评估多个突变，NGS促进了个性化治疗。其与标准方法的高度一致性和在液体活检中的适用性支持其融入临床实践，特别是对于组织有限的患者， minimize 重复活检的需要并增强精准肿瘤学。