健康流浪犬源葡萄球菌（Staphylococcus spp.）的检出及其耐药性分析：一项基于“一体健康”视角的流行病学研究

本综述系统分析了从健康流浪犬皮肤样本中分离的葡萄球菌（Staphylococcus spp.）的流行特征与耐药表型，揭示其高携带率（46%）及多重耐药性（MDR，85%），尤其对青霉素（83.2%）、头孢西丁（72.3%）和苯唑西林（62.2%）耐药严重。研究强调流浪犬作为耐药菌储库在“一体健康（One Health）”框架下的重要公共卫生意义，呼吁加强耐药性监测与防控策略。

　　

1 引言

葡萄球菌（Staphylococcus spp.）是人与动物皮肤微生物组中的常见共生菌，也是一类重要的机会性病原体。在犬只中，伪中间葡萄球菌（Staphylococcus pseudintermedius）是最主要的定植与致病菌种，其次为金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）。特别是伪中间葡萄球菌，作为犬皮肤和黏膜的正常菌群，可引发多种感染，如脓皮症、外耳炎、尿路感染等，并具备一定的人兽共患潜力。

近年来，随着抗菌药物的广泛使用（包括兽医临床），耐药葡萄球菌的传播日益严重。其中，甲氧西林耐药伪中间葡萄球菌（MRSP）和甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）尤为引人关注，其多重耐药（MDR）表型显著限制了临床治疗选择。流浪犬由于生活环境复杂、医疗资源匮乏，更易成为耐药菌的携带者和传播者，但目前相关研究仍较为有限。

意大利坎帕尼亚大区流浪犬数量众多，尽管相关控制计划已实施多年，其作为抗菌素耐药性（AMR）扩散节点的潜在风险尚未被充分评估。因此，本研究旨在调查从那不勒斯ASL Napoli 1 Centro兽医医院收治的健康流浪犬皮肤样本中分离的葡萄球菌的流行情况、物种分布及其抗菌药物耐药性谱，为“一体健康（One Health）”策略提供科学依据。

2 材料与方法

2.1 伦理批准

本研究所有采样操作均遵循意大利第281/91号法律（流浪动物控制计划）中规定的绝育程序，并获得那不勒斯腓特烈二世大学动物福利伦理委员会批准（批准号：PG/2020/0057490_13/07/2020）。

2.2 健康流浪犬采样

2021年9月至2023年12月期间，共纳入102只健康流浪犬，品种混杂，年龄介于8个月至14岁。从每只犬的鼻梁、鼻腔和耳道三个部位采集样本，共获得306份拭子。样本置于Stuart转运培养基中，24小时内送至实验室进行细菌学分析。

2.3 葡萄球菌的分离与鉴定

样本分别接种于甘露醇盐琼脂（MSA）和哥伦比亚CNA血琼脂平板，37°C培养24–48小时。对疑似葡萄球菌菌落进行形态学观察、革兰氏染色、触酶试验和 coagulase 试验以进行初步筛选。纯化后的菌株采用MALDI-TOF MS技术进行物种水平鉴定，以 log(score) ≥ 2.0 作为可靠鉴定的标准。质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC 33591和伪中间葡萄球菌ATCC 49444。

2.4 药敏试验

采用Kirby–Bauer纸片扩散法在Mueller–Hinton琼脂上测试19种抗菌药物，涵盖10大类。结果判读依据CLSI（2020）和EUCAST（2021）标准，万古霉素药敏则参考法国微生物学会指南。根据Magiorakos等（2012）标准，将菌株分类为MDR（多重耐药）、XDR（广泛耐药）和PDR（全耐药）。

2.5 数据管理与统计分析

数据录入Excel进行描述性统计分析，采用卡方检验比较不同菌种分离率的差异，显著性水平设定为 p ≤ 0.05。

3 结果

3.1 葡萄球菌的分离与鉴定

在306份样本中，72%（221份）为细菌阳性，共鉴定出256株细菌。其中葡萄球菌占47%（119/256），其余为链球菌、微球菌、芽孢杆菌和肠球菌等。伪中间葡萄球菌为最主要菌种，占所有葡萄球菌的50%（59/119），其次为松鼠葡萄球菌（Staphylococcus simulans，17%）和金黄色葡萄球菌（14%）。其他还包括施氏葡萄球菌（Staphylococcus sciuri）、表皮葡萄球菌等9个菌种。

3.1.1 不同采样部位的菌种分布

从鼻腔分离的葡萄球菌最多（43%），其次为鼻梁（35%）和耳道（22%）。伪中间葡萄球菌在三个部位均占主导（鼻腔47%，鼻梁50%，耳道54%）。值得注意的是，有4只犬在同一只个体的三个部位均分离出同一菌种（伪中间葡萄球菌或松鼠葡萄球菌）。

3.2 耐药性谱

葡萄球菌对青霉素耐药率最高（83.2%），其次为头孢西丁（72.3%）和苯唑西林（62.2%）。对氨苄西林–克拉维酸、头孢氨苄、头孢羟氨苄、磺胺甲噁唑–甲氧苄啶等的耐药率在40%–50%之间。对庆大霉素、多西环素、恩诺沙星等耐药率在20%–30%之间，而马波沙星耐药率低于20%。所有菌株对万古霉素均敏感。

按药物类别统计，耐药率最高的类别分别为青霉素类（85.7%）、头孢菌素类（75.6%）和四环素类（61.3%）。85%的菌株被判定为MDR，15%为XDR，未发现PDR菌株。

4 讨论

本研究证实，健康流浪犬皮肤携带多种葡萄球菌，其中伪中间葡萄球菌占主导地位，与其作为犬皮肤正常菌群的特性一致。高比例的MRSP和MRSA（通过苯唑西林和头孢西丁耐药推测）以及普遍的多重耐药现象，表明流浪犬可能是耐药葡萄球菌的重要储库。

与宠物犬相比，流浪犬接触的环境更为复杂，包括垃圾、污水等，可能增加其获得和传播耐药菌的机会。动物收容所中高密度饲养、频繁动物流转以及医疗资源有限等因素，也可能加剧耐药菌的传播。

本研究中所有菌株对万古霉素敏感是一个积极发现，因万古霉素是治疗人类MRSA和MRSP感染的最后手段之一。然而，青霉素类、β-内酰胺类及四环素类的高耐药率仍值得高度警惕，这些药物在兽医临床中应用广泛，其失效将导致临床治疗选项大幅减少。

5 结论

本研究强调流浪犬作为抗菌素耐药性传播节点的重要性，尤其在“一体健康”框架下，需加强对其携带的耐药菌的监测与管理。通过改进动物医疗实践、减少抗菌药物滥用、加强环境与动物管理，可有效遏制耐药菌的扩散，保障公共健康和动物福利。