TLR4依赖性成纤维细胞-单核细胞轴在三阴性乳腺癌淋巴结转移中的作用机制及治疗新策略

本研究揭示了TNBC（三阴性乳腺癌）转移过程中肿瘤引流淋巴结（TDLN）内TLR4依赖性成纤维细胞-单核细胞免疫抑制轴的关键作用。研究人员通过多组学分析发现，FRC（成纤维细胞网状细胞）通过CCL2-CCL7-CCR2信号轴招募PD-L1hi单核细胞形成免疫抑制微环境，联合靶向TLR4和PD-1可显著抑制肺转移，为TNBC免疫治疗提供了新靶点。

　　

三阴性乳腺癌（TNBC）作为最具侵袭性的乳腺癌亚型，其高转移率和免疫治疗耐药性一直是临床面临的重大挑战。肿瘤引流淋巴结（TDLN）作为免疫防御的第一道防线，却在癌症进展中扮演着矛盾角色——既是抗肿瘤免疫的启动场所，又是转移的前哨站。这种双重身份背后的分子机制尚不明确，特别是TNBC如何重塑TDLN微环境以促进免疫逃逸和远处转移，成为亟待解决的科学问题。

为揭示这一机制，Greta Mattavelli和Moutaz Helal等研究人员在《Immunity》发表的重要工作中，整合了多组学分析、空间转录组技术和功能验证实验。研究团队首先通过流式细胞术发现TNBC小鼠模型TDLN中PD-L1^hi单核细胞（Ly6C^hiLy6G^-）频率显著增加。单细胞RNA测序（scRNA-seq）揭示这些单核细胞高表达免疫抑制分子iNOS（诱导型一氧化氮合酶）和S100a8/a9，具有单核髓系来源抑制细胞（mMDSC）特征。通过细胞互作网络分析，发现成纤维细胞网状细胞（FRC）亚群（特别是血管周围CD34⁺基质细胞和髓质网状细胞）特异性上调CCL2/CCL7表达，而单核细胞则高表达其受体CCR2。

空间转录组技术（10x Visium）精确定位了FRC-单核细胞-效应记忆T细胞在T细胞区和髓质区形成的空间免疫抑制微环境。机制研究发现，肿瘤源性内源性TLR4配体（如SAA1、S100A9、FN1）通过激活FRC的TLR4-MyD88信号通路诱导CCL2/CCL7表达。功能实验证实，TDLN来源的单核细胞通过PD-L1和iNOS途径显著抑制T细胞增殖，而iNOS抑制剂L-NMMA可逆转这种抑制。

在治疗策略上，研究创新性地采用局部给药方式（前肢皮下注射），发现TLR4抑制剂（TAK-242）联合PD-1阻断可协同减少TDLN单核细胞浸润，增强CD44⁺ICOS⁺活化T细胞功能，显著降低肺转移负荷。临床样本分析证实，TNBC患者TDLN中单核细胞积累与FRC-单核细胞轴活化相关，且TLR4配体特征谱与患者不良预后显著相关。

关键技术方法包括：①建立4T1（BALB/c）、AT3（C57BL/6）多转移性和67NR非转移性TNBC小鼠模型；②整合scRNA-seq、空间转录组和蛋白质组学多组学分析；③局部给药系统评估TLR4i联合αPD-1疗效；④29例乳腺癌患者（含10例TNBC）TDLN样本的流式分析和单细胞测序验证。

研究结论部分强调，该工作首次系统阐明了TNBC通过TLR4-FRC-单核细胞轴重塑TDLN免疫微环境的级联机制：肿瘤源性TLR4配体→FRC活化→CCL2/CCL7分泌→CCR2⁺单核细胞招募→PD-L1/iNOS介导的T细胞抑制→促进转移。这一发现不仅为TNBC免疫治疗耐药提供了新解释，更提出了"局部靶向TDLN微环境+全身免疫治疗"的联合策略。特别值得注意的是，内源性TLR4配体作为预测标志物的临床转化潜力，以及局部给药方式在增强疗效、减少毒副作用方面的独特优势，为TNBC精准治疗开辟了新途径。