西班牙马略卡岛壁虎中塔氏利什曼原虫与婴儿利什曼原虫的共存及其流行病学意义

本研究针对地中海地区利什曼病流行背景下，蜥蜴类宿主中利什曼原虫的感染状况不明确的问题，通过在马略卡岛开展壁虎种群筛查，采用duplex qPCR技术同步检测塔氏利什曼原虫(L. tarentolae)和婴儿利什曼原虫(L. infantum)。结果显示成年T. mauritanica壁虎中L. tarentolae感染率达26.53%，并首次在西班牙发现两种利什曼原虫的共感染现象(6.12%)，证实体腔器官的检测敏感性显著高于血液。该研究为阐明爬行动物在利什曼病传播循环中的潜在作用提供了关键证据。

　　

在地中海地区，人兽共患的利什曼病一直是一项重大的公共卫生挑战，而由婴儿利什曼原虫(Leishmania infantum)引起的内脏利什曼病更是其中的焦点。狗作为主要的保虫宿主，其感染情况已被广泛研究，但近年来科学家们发现，这种疾病的流行病学图景远比想象中复杂。除了犬科动物和人类，野兔、家兔等兔形目动物也被证实是重要的野生动物储存宿主。更令人惊讶的是，就连爬行动物——特别是地中海地区常见的壁虎——也可能携带利什曼原虫。

在这片生态多样性丰富的区域，存在着两种生态位相近的利什曼原虫：一种是能感染哺乳动物并致病的婴儿利什曼原虫(L. infantum)，另一种则是传统上被认为仅感染爬行动物且对哺乳动物无害的塔氏利什曼原虫(L. tarentolae)。这两种寄生虫共享相同的生态环境，甚至可能由同一种媒介——白蛉进行传播。这就引出了一个关键问题：当这两种寄生虫在同一地区共存时，它们之间会产生怎样的相互作用？爬行动物是否会成为婴儿利什曼原虫的潜在储存宿主？这些问题对于完善利什曼病的防控策略至关重要。

西班牙的马略卡岛为回答这些问题提供了理想的研究场地。作为巴利阿里群岛中最大的岛屿，这里不仅是犬利什曼病的高发区，还栖息着两种引入的壁虎物种：毛里塔尼亚壁虎(Tarentola mauritanica)和土耳其壁虎(Hemidactylus turcicus)。这些壁虎数量庞大，分布广泛，且与人类居住环境密切接触，密度高达每平方公里1200只以上。它们的生态特性使得其与传播利什曼原虫的白蛉媒介有大量接触机会。

为了探究马略卡岛壁虎种群中利什曼原虫的感染状况，来自Nano1Health S.L.的研究团队开展了一项系统的野外调查和实验室检测工作。研究人员在2024年5月期间，从马略卡岛北部和中部地区捕获了59只壁虎，其中包括53只毛里塔尼亚壁虎和6只土耳其壁虎。通过心脏穿刺采集血液样本，并解剖获取心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏等组织样本。

研究采用了多项关键技术：通过duplex quantitative PCR（双重复合定量PCR）同时检测L. tarentolae和L. infantum，针对ITS1区域设计特异性探针；使用kinetoplast qPCR（动质体qPCR）对L. infantum阳性结果进行验证；通过广义线性模型（binomial logit）统计分析不同组织的检测阳性率差异；进行引物和探针的in silico（计算机模拟）分析确保检测特异性。

研究结果揭示了马略卡岛壁虎种群中利什曼原虫感染的详细情况：

样本概况方面，研究共采集59只壁虎，包括5只幼体和54只成体。其中53只为T. mauritanica（4只幼体，49只成体），6只为H. turcicus（1只幼体，5只成体）。

总体感染率显示，14/59（23.73%）的壁虎PCR检测为利什曼原虫阳性，其中13/59（22.03%）为L. tarentolae阳性，4/59（6.77%）为L. infantum阳性。3例同时感染两种寄生虫（共感染）。所有阳性样本均来自T. mauritanica，H. turcicus中未检测到利什曼原虫。

物种特异性感染率方面，在成年T. mauritanica（n=49）中，L. tarentolae感染率为26.53%（13/49），L. infantum感染率为8.16%（4/49），共感染率为6.12%（3/49）。所有幼体样本（n=4）均为阴性。

组织分布特征显示，L. tarentolae在13只成体的肝脏（9例）、脾脏（8例）、肺脏（9例）、肾脏（7例）、心脏（7例）和血液（2例）中检测阳性。L. infantum在4只成体的血液（2例）、脾脏（2例）、肝脏（1例）、肺脏（1例）和心脏（1例）中检测阳性，其中3例为共感染。

统计分析表明，在成年T. mauritanica中，L. tarentolae（包括共感染）在体腔器官（心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏）中的检测率显著高于血液（glm，p值=0.0266），肝脏、脾脏和肺脏的阳性率略高。

检测灵敏度方面，L. tarentolae的平均Ct值为34.02（范围28.69-38.42），L. infantum的平均Ct值为36.44（范围34.55-38.33）。共感染样本中L. tarentolae的Ct值（平均31.61）显著低于单独感染样本（平均35.49）（t检验，p值=2.08E-07）。

特异性验证通过in silico分析确认，TaqMan-MGB探针具有高度特异性：Lt探针仅与L. tarentolae完全匹配，Li探针仅与L. donovani-infantum复合体完全匹配。

这项研究首次在西班牙证实了壁虎种群中L. tarentolae和L. infantum的存在，其中L. tarentolae的感染率（26.53%）高于意大利南部地区的报道，而L. infantum的感染率（6.77%）与意大利南部的研究结果相当。这种差异可能源于马略卡岛壁虎的高种群密度、白蛉媒介的高分布密度，以及研究中使用的相对宽松的PCR判定阈值（Ct≤38.5）。

特别值得注意的是，研究发现了L. tarentolae和L. infantum的共感染现象，且共感染样本中L. tarentolae的寄生虫载量显著更高，这提示了两种寄生虫之间可能存在某种相互作用或竞争关系，为宿主-病原体相互作用研究提供了新的方向。

从检测方法学角度，研究发现体腔器官（特别是肝脏、脾脏和肺脏）对L. tarentolae的检测敏感性明显高于血液样本，这为未来类似研究提供了实用的采样指导：优先采集这些器官进行PCR检测，而非依赖血液样本。

这些发现对利什曼病的流行病学具有重要启示。在血清学检测中，L. tarentolae和L. infantum的抗体可能存在交叉反应，导致对哺乳动物L. infantum感染率的高估。因此，在利什曼病流行地区，需要更加谨慎地解读血清学检测结果，并结合分子检测方法进行确认。

研究也提出了若干有待进一步探索的问题：壁虎作为L. infantum的潜在储存宿主究竟扮演怎样的流行病学角色？两种利什曼原虫在同一宿主内的共存会产生怎样的生物学后果？季节变化对感染率和寄生虫载量有何影响？

综上所述，这项研究不仅首次报道了西班牙壁虎种群中利什曼原虫的感染状况，揭示了两种利什曼原虫的共感染现象，还为理解爬行动物在利什曼病传播循环中的潜在作用提供了重要证据。在马略卡岛这样的利什曼病流行区，壁虎与人类、犬类共享生态环境，它们携带的利什曼原虫可能通过共同的白蛉媒介进行传播，这种复杂的生态学关系需要更多的研究来阐明。该研究发表在国际期刊《International Journal for Parasitology: Parasites and Wildlife》上，为寄生虫生态学和人兽共患病流行病学领域增添了重要的科学数据。