基于胶体金免疫层析技术快速检测塞内卡病毒A（SVA）方法的建立与评价

本研究针对塞内卡病毒A（SVA）现场快速检测需求，开发了一种基于VP2蛋白单克隆抗体的胶体金免疫层析试纸条（LFA）。该方法检测限达0.5 ng/mL，与FMDV、PRRSV等常见猪病病原无交叉反应，临床样本检测与RT-PCR符合率达90%，为基层SVA防控提供了低成本、高时效的技术方案。

　　

塞内卡病毒A（Senecavirus A, SVA）是一种可引起猪只水疱性病变的重要病原体，其临床症状与口蹄疫病毒（FMDV）等难以区分，给养猪业造成重大经济损失。目前SVA检测主要依赖RT-PCR和ELISA等方法，但这些技术需要专业设备和技术人员，难以在资源有限的基层场点开展现场快速检测。因此，开发一种操作简便、成本低廉的快速检测工具成为迫切需求。

近期发表于《Biochemistry and Biophysics Reports》的一项研究成功建立了一种基于胶体金免疫层析技术（Lateral Flow Assay, LFA）的SVA快速检测方法。该研究通过表达纯化SVA VP2重组蛋白，制备特异性单克隆抗体，优化胶体金标记工艺和试纸条组装参数，最终构建出具有高灵敏度和特异性的检测试纸条。

研究采用的关键技术包括：1）原核表达系统制备重组SVA VP2蛋白；2）杂交瘤技术制备抗VP2单克隆抗体；3）Western blot验证抗体特异性；4）胶体金标记条件优化（包括K₂CO₃用量、抗体包被浓度等）；5）临床样本验证（20份猪水疱液样本与RT-PCR对比检测）。

3.1. 重组SVA VP2的表达与纯化

通过pET-30a(+)载体在大肠杆菌BL21(DE3)中表达带His标签的VP2蛋白，经镍柱纯化获得纯度达98%的重组蛋白（浓度1.83 mg/mL），为后续免疫实验提供高质量抗原。

3.2. 单克隆抗体的制备与纯化

采用重组VP2蛋白免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合和筛选获得13株杂交瘤细胞系。经配对筛选确定4B10（包被抗体）和1E3（胶体金标记抗体）为最佳配对组合，抗体纯度均超过95%。

3.3. Western blot鉴定单克隆抗体

Western blot结果显示，4B10和1E3均能特异性识别SVA病毒颗粒和重组VP2蛋白，而与空载体蛋白无交叉反应，证实了抗体的特异性。

3.4. 胶体金试纸条的制备

通过优化胶体金标记条件（确定最佳K₂CO₃添加量为4 μL/mL）、抗体包被浓度（T线最佳浓度为1 mg/mL）和样品垫处理液配方（配方3：含0.5%酪蛋白+0.5% S9），最终组装出性能稳定的试纸条。

3.5. 性能评估

灵敏度实验显示检测限为0.5 ng/mL（20次重复检测均为阳性）；重复性试验表明在0.5 ng/mL和200 ng/mL浓度下结果均一；特异性试验证实与FMDV、PRRSV、CSFV和PCV2无交叉反应。

3.6. 临床样本检测

20份临床样本检测显示：与RT-PCR相比，该方法灵敏度为88.24%，特异性为100%，阳性预测值100%，阴性预测值60%，总符合率达90%。

该研究的讨论部分指出，虽然胶体金法的灵敏度略低于RT-PCR（最低检测限为60.3 copies/μL vs 13.5 copies/μL），但其操作简便、检测快速（10-15分钟出结果）、成本低廉的优势使其特别适用于基层现场筛查。研究者同时承认样本量有限和未测试复杂基质（如饲料）的局限性，但强调该方法在资源有限地区的应用价值。

这项由河北省科学院生物研究所裴晓萌等研究人员完成的工作，为SVA的现场监测提供了可靠的技术工具，对早期疫情预警和防控策略制定具有重要意义。该试纸条的成功开发也为其他动物病毒快速检测技术的建立提供了参考范式。