中国肢带型肌营养不良2B家系DYSF基因新型复合杂合突变鉴定及其致病机制研究

本报告深入分析一例中国女性肢带型肌营养不良2B型（LGMD2B）病例，通过电生理学、肌肉活检与基因测序（NGS及Sanger测序）鉴定出DYSF基因新型复合杂合突变：c.6313G>A（p.Ala2105Thr）错义突变与c.4444del（p.Glu1482Serfs*43）移码突变。研究揭示了突变导致的蛋白结构紊乱与功能丧失机制，为遗传性神经肌肉病诊断、家系筛查及靶向治疗开发提供关键依据。

　　

引言

肢带型肌营养不良（Limb-girdle muscular dystrophy, LGMD）是一种遗传性骨骼肌萎缩与无力性疾病，由基因突变引起进行性肌肉功能丧失。在中国人群中，LGMD2B（由DYSF基因突变导致）与LGMD2A（由CAPN3突变引起）约占病例总数的65.9%。LGMD2B主要累及髋部与肩部肌肉，其病理基础是肌纤维膜修复关键蛋白dysferlin的缺失或功能异常。

---

病例展示

患者为38岁中国西北地区女性，来自近亲家系，病程长达23年。15岁时因“双下肢无力2年”就诊，表现为蹲起困难、行走跳跃协调能力丧失。神经系统检查显示颅神经无异常，双侧下肢近端肌力4级（骨盆与股四头肌为主），远端肌力5级，Babinski征阴性，Gowers征阳性。

实验室检查发现肌酸激酶（CK）显著升高至27,990.83 μmol/L。电生理检查提示双下肢慢性肌源性损伤，肌电图（EMG）静息期无自发电位，轻收缩时运动单位时限缩短、多相波增多。初诊为多发性肌炎（polymyositis），经静脉甲基泼尼松龙治疗后症状缓解，CK水平降至3,423.7 μmol/L。

2005年患者因持续爬楼困难再次入院，接受甲氨蝶呤与叶酸治疗。肌肉活检显示腓肠肌萎缩、肥大与脂肪增生，符合LGMD2B病理特征。至2024年，患者未接受针对性治疗，已完全依赖轮椅生活，但心脏超声未见异常。

家系调查显示患者父母表型正常，但存在近亲婚配史与家族遗传病背景（两名叔父于20岁发病，40余岁死亡）。基因检测获取了患者、父母及对照的知情同意。

---

遗传学分析

基因测序发现患者携带DYSF基因两个突变：

1. 1.

   c.6313G>A（p.Ala2105Thr）：错义突变，位于Ferlin_C结构域内，gnomAD数据库中有3例杂合报道，与Miyoshi肌病/LGMD2B相关，但临床意义未明确；

2. 2.

   c.4444del（p.Glu1482Serfs43）*：移码突变，导致蛋白截短，未在gnomAD或文献中报道，ACMG指南归类为意义未明变异（VUS），但具有潜在致病性。

患者为复合杂合突变，其父携带c.4444del，其母携带c.6313G>A，其弟未携带突变（见图1、图2）。

---

讨论

LGMD2B患者肌肉活检常显示炎症反应，易被误诊为多发性肌炎。dysferlin缺失可激活炎症小体，加剧肌肉损伤。早期误诊可能导致肌力下降、骨密度降低等并发症。间歇性泼尼松治疗可减轻肌肉损伤，但对疾病进展的影响尚未明确。

通过dbSNP、ClinVar与多物种序列比对（Clustal Omega）分析，发现突变位点在不同物种中高度保守（图3）。二级结构预测（PSIPRED v4.0）显示突变位于无规卷曲区（图4），域分析（Pfam/SMART）表明c.4444del位于主要结构域外，而c.6313G>A位于Ferlin_C域内（图5）。

三维结构建模（SWISS-MODEL）显示：

• •

  c.4444del突变导致谷氨酸变为丝氨酸，失去3个氢键，可能影响蛋白稳定性或相互作用；

• •

  c.6313G>A突变使丙氨酸变为苏氨酸，失去1个氢键，导致蛋白结构从有序变为无序（图6）。

---

结论

本研究通过多学科诊断与生物信息学分析，首次报道DYSF基因新型复合杂合突变导致的LGMD2B病例，揭示了突变对蛋白结构与功能的影响，为遗传性神经肌肉病的精准诊断、家系遗传咨询及靶向治疗开发提供了重要依据。