新生儿心脏再生中LYVE-1依赖性巨噬细胞通过未成熟淋巴管滞留的新机制

本研究发现，新生小鼠心脏再生期间，未成熟的心脏淋巴管（lymphatics）通过保持紧密连接（zippered junctions）和低清除能力，滞留LYVE-1依赖性巨噬细胞（macrophages），从而促进心脏再生（cardiac regeneration）。该研究揭示了淋巴管内皮细胞（LECs）与巨噬细胞间信号交流的发育时序变化，为心肌梗死（MI）后免疫微环境调控提供了新靶点。

　　

在成年小鼠中，心肌梗死（MI）会激活心脏淋巴管，引发淋巴管生成（lymphangiogenesis），从而引流组织间液并将巨噬细胞转运至纵隔淋巴结（MLNs）。这一过程减轻水肿、降低炎症/纤维化免疫细胞含量，改善心脏功能。然而，本研究聚焦于新生小鼠心脏再生窗口期内淋巴管和巨噬细胞清除的作用。

研究发现，与出生后7天（P7）相比，出生后1天（P1）的心脏在损伤后淋巴管生成和巨噬细胞清除能力有限。这一现象与淋巴管内皮细胞（LECs）连接的成熟过程同步：从不可渗透的“拉链式”（zippered）连接向可渗透的“按钮式”（buttoned）连接转变，同时伴随LECs与巨噬细胞间信号交流的改变。

缺乏淋巴管内皮受体LYVE-1的小鼠（成年后巨噬细胞淋巴转运受损）在P1时经历MI后长期预后更差，提示LYVE-1在巨噬细胞中可能具有非典型功能。巨噬细胞特异性缺失Lyve1会损害新生儿心脏损伤后的心脏再生。本研究证明，未成熟心脏淋巴管在早期新生儿阶段具有低清除性，从而确保保留促再生的LYVE-1依赖性巨噬细胞。

主要发现

在成年稳态中，心脏淋巴管调节组织液和免疫监视。损伤后，它们通过生长和扩展至梗死区域发生淋巴管生成。心外膜和促炎巨噬细胞分泌血管内皮生长因子C（VEGFC），驱动淋巴管生成和心脏淋巴网络的重塑。MI触发免疫反应，浸润的吞噬细胞（如中性粒细胞和巨噬细胞）清除死亡组织和碎片，协助后续重塑和修复。然而，高数量且持续存在的免疫细胞会导致进一步纤维化和病理重塑，最终发展为心力衰竭（heart failure）。内源性淋巴管生成试图减少组织水肿和免疫细胞负荷，清除中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞和T细胞，这对有效组织修复是必要的。然而，该反应不足以清除增加的液体和过多免疫细胞浸润，导致慢性炎症、纤维化和心功能受损。因此，尝试增强淋巴管生成和淋巴功能。在动物模型中，施用重组VEGFC-C156S（特异性与VEGFR3相互作用）可改善MI后心脏功能。腹腔注射重组VEGFC-C156S后，通过LYVE-1依赖性机制增加了巨噬细胞清除。LYVE-1高表达于初始淋巴管表面，与吞噬性免疫细胞表面的糖胺聚糖聚合物透明质酸（hyaluronan）特异性相互作用，促进血管进入。LYVE-1与长链透明质酸的结合涉及一种不寻常的滑动相互作用，介导树突状细胞和巨噬细胞与皮肤淋巴管的对接和迁移，并在受伤的成年小鼠心脏中具有类似作用。

与无法在心脏损伤后功能恢复的成年哺乳动物不同，新生儿哺乳动物心脏具有进化保守的再生能力。小鼠心脏在P1时MI后完全再生，而P7时相同损伤会导致纤维化瘢痕形成。临床病例报告描述了人类婴儿因先天性心脏病在子宫内发生MI后类似的心脏再生。在新生小鼠中，早期 postnatal 阶段完整心脏中的巨噬细胞主要源自胚胎的组织驻留CCR2^?巨噬细胞，并通过局部增殖维持。相比之下，成年期普遍的循环CCR2⁺单核细胞和单核细胞衍生的CCR2⁺巨噬细胞在这些阶段对心脏单核细胞-巨噬细胞群体的贡献极小。响应新生儿心脏损伤，组织驻留CCR2^?巨噬细胞数量增加，而没有额外的CCR2⁺单核细胞浸润。MI后P1时用氯膦酸盐脂质体处理普遍耗尽巨噬细胞会抑制心脏再生，导致纤维化瘢痕形成和心功能显著抑制。这种再生缺乏归因于冠状动脉血管生成受损，这与支持巨噬细胞直接和间接贡献于血管生长和血管丛形成的证据一致。

组织驻留巨噬细胞在新生小鼠心脏再生中的基本功能，以及淋巴管在成年小鼠心脏中的免疫调节作用，促使我们研究心脏淋巴管在再生环境中的反应以及它们在受伤的新生小鼠心脏中与巨噬细胞相互作用的程度。迄今为止，尚未研究淋巴管和它们对免疫细胞（特别是巨噬细胞）的运输在新生儿心脏再生和向纤维化修复过渡过程中的阶段依赖性反应。在本研究中，我们量化了出生后淋巴网络的扩张，揭示了直到出生后16天（P16）的生长和出芽。我们进一步研究了MI后新生儿心脏淋巴管的淋巴管生成反应和巨噬细胞运输效率，使用结合三维光片和共聚焦成像以及过继转移脾脏hCD68–eGFP标记的单核细胞。损伤反应显示，与P7梗死心脏相比，P1时淋巴管生成缺乏，且GFP标记细胞到MLNs的清除效率较低在损伤后7天（dpi）。这与需要在P1时保留促再生巨噬细胞相对于在P7时调用清除促纤维化巨噬细胞一致，重现了成人损伤和淋巴反应。清除受损可能部分由淋巴管内皮细胞连接的成熟状态以及出生后头2周内从“拉链式”（不可渗透）到“按钮式”（可渗透）连接的发育转变解释。为了深入了解P1与P7时淋巴管内皮-巨噬细胞相互作用的分子基础，我们生成了来自MI后不同时间点收集的新生儿心脏的无偏单细胞RNA测序（scRNA-seq）数据集，并观察到改变的淋巴管内皮细胞（LEC）-巨噬细胞信号传导。值得注意的是，这包括淋巴管分泌因子reelin（RELN）在P7相对于P1心脏中的表达减少，与再生潜能受损一致。最后，我们探讨了淋巴进入受体LYVE-1在早期新生儿心脏再生中的可能参与。在这里，我们预期LYVE-1不会发挥作用，因为促再生巨噬细胞的运输在早期阶段是多余的；然而，我们观察到全局Lyve1缺失导致再生受损、持续瘢痕和心功能丧失，提示其在不同于淋巴内皮的谱系中的功能。Lyve1的条件性巨噬细胞特异性靶向揭示，这种依赖性是由于其在组织驻留巨噬细胞中先前未被重视的作用，维持该群体原位以抑制浸润的促炎/纤维化单核细胞并促进冠状动脉血管生成以促进心脏再生。

结果

出生后心脏淋巴管的发育

心脏在出生后发育期间显著生长，从P1的平均面积2.5 mm²到P16的10 mm²。为了可视化淋巴网络，我们使用了 knock-in 小鼠系 Vegfr3^+/LacZ 的5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-d-半乳糖苷（X-Gal）染色，揭示了在出生后阶段P1-P28期间网络的协同扩张。在P1，淋巴管位于心脏腹侧靠近基部的位置，而在背侧，它们向心尖延伸，靠近主要冠状静脉。在出生后第一周（从P1到P9），在心脏的腹侧或背侧均未观察到新淋巴管的出芽，通过共聚焦和光片图像的三维渲染以及ImageJ和AngioTool软件的使用进行量化。在此期间，心脏淋巴管长度随着器官生长而增加，以在背侧建立从基部到心尖的完全覆盖，在腹侧建立不完全覆盖。腹侧相对于背侧的血管长度和覆盖减少与胚胎阶段淋巴管发育延迟一致。此外，在背侧心脏注意到少量孤立的VEGFR3⁺细胞，这些细胞在P1和P3时未与已建立的淋巴管系统连接。这些类似于已描述的通过称为淋巴管生成（lymphvasculogenesis）的过程贡献于心脏淋巴网络的孤立LECs。从P11开始，心脏两侧可见第一批血管芽。这些芽继续扩张，直到形成一个复杂的血管网络，到P28时似乎完全发育。这种淋巴管生长模式在样本中一致，通过在P14时背侧近心尖处的密集血管网络建立，并在P28时完全成形。一个进一步不变的特征是存在缺乏淋巴管的区域，例如腹侧的心尖和背侧的右心室。

在CD1野生型（WT）心脏中进行VEGFR3免疫染色，以验证 Vegfr3^+/LacZ 小鼠在不同出生后阶段的X-Gal染色结果。VEGFR3⁺淋巴管在P14时完全覆盖心脏，表明出芽发生在更早的时间点且效率更高。此外，CD1心脏背侧的淋巴管继续与心脏生长同时扩张，至少直到P21。对背侧心脏VEGFR3免疫染色淋巴管的进一步量化显示，总血管长度从P1的15 mm增加到P21的175 mm，符合持续生长，并且端点总数从P1的50条血管增加到P14的500条血管，表明网络的复杂性增加。使用iDISCO光学清除评估未受伤WT心脏在P1、P7和P14时深处的淋巴结构。该分析证实淋巴管主要存在于再生期间的外心脏表面，并支持通过整体mount染色检查淋巴管生成。

比较心脏背侧和腹侧扩张的网络揭示了出生后期间不同的生长动力学。平均长度和单个血管的数量从P1（背侧：21 mm和83条血管；腹侧13 mm和52条血管）到P11（背侧：33 mm和98条血管；腹侧25 mm和98条血管）略有增加，表明生长和出芽有限。与P11后淋巴管出芽的可视化一致，背侧总血管长度从P11的33 mm显著增加到P14的66 mm（P < 0.001）和从P14的66 mm到P16的91 mm（P < 0.01）。在腹侧，血管长度从P11的25 mm增加到P14的52 mm（P < 0.011）和从P16的66 mm到P21的96 mm（P < 0.005）。此外，背侧端点总数显著增加，从P11的98条血管到P14的273条血管（P < 0.001）。在早期出生后发育期间观察到腹侧总血管长度较小的趋势，这在P16时具有统计学显著性，背侧91 mm血管长度相对于腹侧66 mm血管长度（P = 0.009）。

为了揭示出生后发育期间淋巴管的潜在分子变化，使用针对一组已知淋巴管标志物的引物和全心脏样本进行定量聚合酶链反应（qPCR）。大多数淋巴管生成标志物的基因表达水平在出生后发育期间显示两个峰值，一个在P2–P3，一个在P7–P9。在P2–P3，Prox1和Nrp2以及配体Vegfc和Vegfd的表达水平相对于P0翻倍。随后，Prox1、Vegfc和Vegfd的表达水平下降，Nrp2的表达水平保持稳定直到P6。此后，Vegfc（P = 0.007）和Nrp2（P = 0.036）的表达水平从P6到P7显著增加，并且Vegfr3、Vegfd和Prox1在P8–P9时相对于P0翻倍。P11后，所有基因的表达水平下降，除了Nrp2，它保持升高。具体来说，Vegfc（P = 0.014）和Vegfd（P = 0.04）的表达从P11到P14显著下降，并且Vegfr3和Prox1的表达恢复到近P0水平。Pdpn的表达在出生后阶段保持相对稳定，在P9时相对于P8显著增加（P < 0.001），随后在P14时相对于P11显著下降（P = 0.016）到基线水平。淋巴管标志物在P2–P3的表达增加与观察到的新生儿心脏生长伴随的淋巴管扩张相关，而在P8–P11的表达增加与P11后观察到的淋巴管生成出芽相关。

分析与淋巴功能而非发育相关的基因揭示了不同的模式。例如，编码LEC分泌的趋化因子CCL21（趋化因子（C-C motif）配体21）的基因Ccl21的表达水平在P2时相对于P0翻倍，并在P6时恢复到基线水平。在P7，有进一步的显著增加（P < 0.001），保持稳定直到P14，之后在P21时有另一个显著增加（P < 0.001）。从P21直到成年，Ccl21的表达水平保持稳定，相对于基线增加八倍。类似地，Lyve1的表达在P21时相对于P14显著增加（P < 0.001），并保持稳定到成年，相对于P0增加两倍。Lyve1是唯一一个在P3和P7之间表达水平下降两倍的基因。

总之，这些结果揭示了出生后发育期间淋巴网络的扩张和伴随的分子变化，并突出了淋巴管在心脏背侧与腹侧的不同时空行为，与后期阶段（P28）的功能成熟一致。

心脏淋巴管在再生性（P1）与纤维化（P7）伤口愈合期间对MI的反应不同

为了检查新生儿心脏淋巴管在MI后的反应，在hCd68–eGFP巨噬细胞报告基因小鼠的P1或P7阶段手术结扎左前降支（LAD）冠状动脉。最初，心脏在LAD结扎后30-60分钟内收获，称为0 dpi，并进行VEGFR3免疫染色以可视化淋巴管系统以及hCD68–eGFP⁺巨噬细胞。淋巴管从心脏基部扩展到损伤部位在P1和P7阶段的0 dpi时。发育中的淋巴网络在P7时比P1时有更多血管且形态更复杂。在0 dpi时，巨噬细胞反应尚未启动，因为hCD68–eGFP⁺巨噬细胞表征没有明显变化。

在成年小鼠中，心脏淋巴管在7 dpi时响应损伤部位。因此，对梗死的P1和P7心脏在手术后7天取样，并与等效的完整（非梗死）阶段（P8和P14）比较。对染色的VEGFR3心脏的整体mount光片成像显示，与完整年龄匹配对照P8心脏相比，P1 MI后损伤部位的淋巴管生成反应有限。更高放大倍数显示，在梗死的P1心脏中，缝合部位近端淋巴管存在有限；一条从左心房下方扩展到损伤部位的大血管持续存在，但这在P8完整心脏中也明显，表明这不是响应损伤形成的。相比之下，在P7 MI心脏的7 dpi时有清晰的淋巴反应，更高放大倍数显示围绕缝合区域的淋巴管扩张。心脏其余部分的淋巴网络在背侧和腹侧在7天时相对于P14完整对照显得发育不全。这些结果表明损伤部位有局部淋巴管生成反应，而正常发育程序在偏远区域延迟或受损，反映了心肌缺血的全局影响。值得注意的是，心脏的大小在P1和P7小鼠MI后7天相对于完整年龄匹配对照P8和P14小鼠显著更大。这可能是由于心脏损伤导致的心肌肥厚和/或水肿增加，如先前在成年小鼠心脏中报道的。

为了进一步可视化P1与P7阶段对MI的反应并记录巨噬细胞反应，对hCD68–eGFP小鼠进行MI手术，并对受伤与完整心脏的横断面系列切片进行淋巴管标志物PDPN和LYVE-1染色，并使用共聚焦显微镜成像。在P8和P14完整心脏中，淋巴管广泛分布于心脏心外膜下空间，并且GFP⁺巨噬细胞未与血管共定位。损伤后，在P1时观察到适度的PDPN⁺和LYVE-1⁺淋巴管生成反应，这在P7时损伤后更 substantial。淋巴管在P1和P7 MI后均发现于缝合部位附近；然而，它们在梗死的P7心脏中更密集且在管腔大小方面更扩张。P1和P7的MI均导致GFP⁺巨噬细胞在7天时浓度增加，这些巨噬细胞广泛定位于损伤部位近端，与P8或P14对照相比。

总之，这些结果揭示了P1 MI后适度的淋巴管生成，而在P7时，近梗死淋巴管的扩张是显著的，模仿了成年心脏反应。两个阶段的损伤均导致CD68⁺巨噬细胞积累，与损伤部位的淋巴管共定位。

P1时心脏淋巴管不功能于清除损伤后巨噬细胞

为了评估新生儿心脏淋巴管是否功能于将巨噬细胞从受伤心脏清除到引流淋巴结，我们进行了hCD68–eGFP单核细胞的过继细胞转移到受伤的WT供体。从成年小鼠分离脾脏hCD68–eGFP单核细胞，以确保它们能够被运输，并在MI手术时大约3 × 10⁴个细胞注射到CD1 P1和P7受体小鼠的心肌中。心脏和MLNs在7 dpi时收获并成像以识别植入和清除的GFP⁺巨噬细胞。GFP⁺巨噬细胞存在于所有心脏中，并且主要位于P1和P7小鼠的损伤部位，确认成功的过继转移和植入。

PDPN染色用于确认早期出生后小鼠中MLNs的鉴定，并定位于分离的淋巴结的外周和中央区域。MLNs还使用泛单核细胞/巨噬细胞标志物CD68的抗体染色，揭示在P1时经历MI的小鼠MLNs中仅识别出少量GFP⁺巨噬细胞，而在P7时经历MI的小鼠MLNs中明显存在大簇的GFP⁺巨噬细胞。

为了进一步验证过继转移数据，并更具体地扩展到组织驻留巨噬细胞的分析，从hCD68–eGFP和CX3CR1–eGFP受伤和对照小鼠分离MLNs。对MLNs进行切片，并获取图像以量化CD68⁺或CX3CR1⁺巨噬细胞数量相对于淋巴结大小。在P1时MI后7天，CD68⁺和CX3CR1⁺巨噬细胞在MLNs中的存在与完整P8心脏相比没有显著差异，而在P7时MI后，CD68⁺和CX3CR1⁺巨噬细胞数量相对于P14完整心脏显著升高。F4/80染色有助于从树突状细胞中 delineate 巨噬细胞，并证实了在P7时MI后7天 within the afferent lymphatics draining to the MLNs 的巨噬细胞存在增加，但在P1时没有。此外，在Lyve1敲除（KO）小鼠的MLNs中也进行了检查，在P7时MI后7天，当在WT setting中观察到巨噬细胞积累时，揭示了 disrupted lymphatic trafficking and an absence of macrophages within the afferent lymphatic lumen compared to WT controls。

为了排除在P7时MI后MLNs中CD68⁺和CX3CR1⁺巨噬细胞数量增加是由于淋巴结驻留巨噬细胞增殖反应的可能性，对MLNs进行了增殖标志物磷酸组蛋白H3（PH3）染色。发现巨噬细胞在完整（P14）和P7梗死小鼠的MLNs的包膜下窦中增殖。然而，大多数CD68⁺和CX3CR1⁺巨噬细胞位于髓窦，并且对PH3呈阴性。MLNs髓窦中缺乏PH3⁺巨噬细胞证实了来自过继转移实验的GFP⁺巨噬细胞数量增加源于从心脏到淋巴结的基于淋巴管的清除。

总之，这些数据揭示心脏淋巴管在P7时MI后显著清除CD68⁺、CX3CR1⁺和F4/80⁺巨噬细胞通过afferent lymphatics到引流MLNs，但不从梗死的P1心脏清除巨噬细胞。

P1与P7时心脏淋巴管内皮细胞-细胞连接的形态变化

心脏淋巴管在P1与P7时损伤后运输巨噬细胞能力差异的一个潜在解释可能源于出生后立即新生儿期间淋巴管系统的持续发育变化。LECs具有特殊化的细胞间连接，具有不同程度的细胞渗透性，称为按钮式和拉链式连接。在肺和气管中，初始淋巴管的连接在出生后发育期间经历 transformation，用不连续的、更具细胞渗透性的按钮样连接替换紧密的拉链式连接，主要由相同的连接蛋白组成。为了研究新生儿心脏中初始淋巴管的连接，我们使用高分辨率共聚焦成像对VE-钙粘蛋白（其表达在拉链中保持）和LYVE-1进行了比较免疫染色。在P1，初始淋巴管主要包含拉链样连接，具有连续的VE-钙粘蛋白表达，并且相邻LECs之间没有间隙。到P7时，按钮连接变得明显，定义为VE-钙粘蛋白表达中不连续的大约3μm间隙，尽管仍有一部分拉链；然而，到P14时，连接主要是按钮样，具有不连续的VE-钙粘蛋白和相邻LECs之间的间隙，每种连接类型的百分比 incidence 量化。因此，在P1和P7之间发生从拉链通过中间到按钮连接的 transformation，到P14时仍在进行中，代表连接形态的动态变化，在出生后心脏发育的后期阶段继续。P1时的主要拉链接合表型将有效地排除损伤后免疫细胞清除，而到P14时按钮连接的出现对应于P7时MI后7天，并支持该阶段的清除，与我们的过继转移实验一致。

不同的分子特征和LECs与巨噬细胞之间改变的信号传导

为了理解在P1与P7时MI后观察到的淋巴管生成反应和免疫清除功能差异是否也可能涉及改变的LEC分子表型和/或LECs与巨噬细胞之间的 distinct signaling，我们在不同时间点使用10x Genomics Chromium平台进行了scRNA-seq。因此，从P1和P7 CD1小鼠的心脏在MI后1天和7天收获， along with their corresponding non-infarcted controls，并构建了六个单独的cDNA文库用于scRNA-seq。使用 published Seurat pipelines 和 automated cluster annotation 以及 published gene markers 的手动整合在R中分析 resulting data。

对scRNA-seq数据进行分析以确定巨噬细胞和单核细胞在巨噬细胞群体中的异质性，以及MI后P1与P7阶段与LECs的潜在改变信号传导。总共识别出23个具有 defined gene expression signatures 的细胞簇，并使用 uniform manifold approximation and projection（UMAP）在两个维度上可视化。这揭示了四个主要簇：内皮细胞（包括LECs的一个较小亚集）、成纤维细胞、免疫细胞以及壁周细胞和平滑肌细胞，如通过规范标志物基因表达分析确定的。

我们最初试图评估指定巨噬细胞群体中的巨噬细胞和单核细胞异质性，以及MI后P1与P7阶段与LECs的潜在改变信号传导。使用 automated cluster annotation 和 published gene markers for monocyte and macrophage subpopulations 的手动整合，识别出八个具有 defined gene expression signatures 的簇。这些包括五个指定为Mf1–Mf4的巨噬细胞簇，一个指定为Prol Mf的增殖巨噬细胞簇，和两个指定为Mono和Mono/Mf的单核细胞簇。接下来，我们确定了各种巨噬细胞亚群在出生后心脏中的 representation。在完整P1和P7心脏中，巨噬细胞和单核细胞合计占非心肌细胞类型的3-4%。在P1 MI后1天，Mf2巨噬细胞从P1对照中的0.65%迅速扩张到5.69%。类似地，Mf2巨噬细胞从P14对照中的0.22%增加到P7 MI后1天的5.27%，说明了损伤对两个阶段Mf2扩张的立即影响。在MI后观察到Mf1巨噬细胞百分比的更逐渐增加：在P1对照中，0.91%增加到MI后1天的1.51%，最终在7 dpi达到2.26%，在P7对照中，0.77%上升到MI后1天的1.24%和MI后7天的2.59%。Mf3和Mf4巨噬细胞的百分比在所有条件和时间点保持稳定在0.5%。单核细胞的百分比在P1时完整与受伤心脏中较低且相似（对照中1.04%相对于MI后7天1.90%），而它们在P7时损伤时显著增加（从对照中的0.7%相对于MI后7天3.39%）。这表明在P1时MI后单核细胞的贡献有限，与P7时MI后浸润增加形成对比。最后，在P1心脏中MI后，Mono/Mf巨噬细胞的百分比从对照中的1.24%增加到MI后1天的2.05%，然后下降到MI后7天的0.99%。在P7心脏中MI后观察到的Mono/Mf巨噬细胞百分比增加更逐渐，从P7对照中的0.41%上升到MI后7天的1.93%。

为了区分在早期出生后阶段观察到的Mf1和Mf2巨噬细胞百分比增加是由于增殖还是由于单核细胞招募和分化，研究了Mf1、Mf2、Mono/Mf和Mono簇的前五个标志物在Prol Mf中的基因表达水平。Prol Mf巨噬细胞在所有条件和时间点表达高水平的Mf1标志物，而它们主要在P1和P7的MI后1天表达Mf2标志物。相比之下，Prol Mf巨噬细胞对Mono和Mono/Mf标志物的表达很少或没有。绝对细胞数和差异表达基因包含在补充表中。

总之，这些结果表明出生后心脏主要由两个组织驻留巨噬细胞群体 populate：Lyve1⁺;Ccr2^?;Arg1^?的Mf1群体和Lyve1^?;Ccr2⁺;Arg1⁺的Mf2群体。这些巨噬细胞群体对新生儿MI有不同的时间反应。Mf1巨噬细胞在出生后发育期间增殖，并在P1和P7的MI后前7天逐渐扩张，而Mf2巨噬细胞通过在P1和P7的MI后1天增殖迅速扩张，随后减少。

巨噬细胞已被描述与完整心脏和损伤后的几个细胞群体相互作用。在本研究中，使用R中的scTalk管道分析了巨噬细胞相互作用组，以确定出生后心脏所有簇中已知配体和受体的表达。我们随后专注于可能促进出生后心脏中淋巴管生成和/或巨噬细胞清除的巨噬细胞和LECs之间的潜在信号传导。LECs显示比出站连接更多的入站连接。相比之下，发现巨噬细胞具有显著更多的出站连接，通过旁分泌