虹鳟（Oncorhynchus mykiss）精子冷冻保存技术：冷冻介质评估与方案优化研究及其在基因组育种中的应用价值

本文系统评估了虹鳟精子冷冻保存中不同冷冻介质（如DMSO、MeOH、DMA）与糖基/矿物基稀释剂的组合效果，通过优化pH调节和抗氧化剂补充方案，显著提升了精子解冻后活力（motility）、受精能力及DNA完整性，为水产种质资源库（cryobanking）建设和基因组选择育种提供了关键技术支撑。

　　

Materials and Methods

本研究依据SUMAE动物实验伦理委员会批准的2017/4号协议执行。

Assessment of density, pH and osmolality

初始实验使用的两份精子池表现出相近的密度、渗透压和pH值，范围分别为10.3±1.8×10⁹至10.8±1.6×10⁹ spz/ml、293.7±39.9至303.6±12.6 mOsm/kg以及7.4±0.2至7.5±0.2。第二次实验中精子池的平均密度、渗透压和pH值分别为9.6×10⁹±0.2 spz/ml、237±2.16 mOsm/kg和7.3±0.12。

Assessment of motility

初始实验中使用的两份新鲜精子池表现出总运动活力——

Discussion

无论使用何种冷冻介质，冷冻过程均导致虹鳟精子的总运动活力和前向运动活力显著下降，但对运动持续时间未见明显影响。此外，在解冻后运动活力较高的精子中，未观察到曲线速度（VCL）、直线速度（VSL）、平均路径速度（VAP）或鞭打频率（BCF）的显著降低。使用FF-DMSO与0.15M葡萄糖组合冷冻的精子获得了最理想的运动参数结果。