新型68Ga标记靶向ROR1多肽探针的开发及其在肿瘤检测中的应用研究

本研究针对肿瘤受体酪氨酸激酶孤儿受体1（ROR1）检测需求，开发了三种新型68Ga标记多肽探针（PR3、PR7、1036）。实验证实68Ga-DOTA-PEG4-PR3/PR7能特异性识别ROR1阳性肿瘤，且摄取可被前体阻断，具备无创评估ROR1表达的潜力，为靶向ROR1治疗提供重要分子影像工具。

　　

在精准医疗时代，靶向治疗已成为肿瘤治疗的重要策略，而寻找特异性高的分子靶点是实现有效治疗的关键。受体酪氨酸激酶孤儿受体1（Receptor Tyrosine Kinase Orphan Receptor 1, ROR1）作为一种肿瘤特异性抗原，在多种恶性肿瘤中高表达，但在正常成人组织中表达受限，使其成为理想的治疗靶点。然而，目前缺乏无创、实时评估ROR1表达水平的方法，这严重制约了靶向ROR1治疗的临床应用和疗效评估。传统活检方式具有侵入性且难以反映肿瘤异质性，因此开发一种能特异性识别ROR1的非侵入性分子影像探针迫在眉睫。

为解决这一难题，四川大学华西医院核医学科的研究团队在《Molecular Pharmaceutics》上发表了一项创新研究。他们设计并合成了三种靶向ROR1的多肽探针（PR3、PR7和1036），通过化学修饰连接DOTA（1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸）螯合剂后，进行⁶⁸Ga放射性标记，系统评估了这些新型探针在检测肿瘤ROR1表达方面的应用潜力。

研究采用的主要技术方法包括：1）通过高效液相色谱（HPLC）评估⁶⁸Ga标记探针的放射标记产率；2）使用薄层色谱（TLC）分析探针的体外稳定性；3）选用ROR1阳性细胞系NCI-H1975和ROR1阴性细胞系HepG2进行体外细胞实验；4）建立NCI-H1975和HepG2肿瘤小鼠模型进行micro-PET/CT体内成像研究；5）通过阻断实验验证探针结合特异性。

放射标记与稳定性研究

所有三种⁶⁸Ga标记的ROR1靶向多肽（⁶⁸Ga-DOTA-PEG4-PR3、⁶⁸Ga-DOTA-PEG4-PR7和⁶⁸Ga-DOTA-KGGG-1036）均表现出高标记产率和良好的体外稳定性，为后续体内外实验提供了质量保证。

体外细胞实验验证特异性

在体外细胞实验中，研究人员证实了⁶⁸Ga标记探针与ROR1结合的特异性。实验结果显示，⁶⁸Ga-DOTA-PEG4-PR3和⁶⁸Ga-DOTA-PEG4-PR7在ROR1阳性的NCI-H1975细胞中摄取显著高于ROR1阴性的HepG2细胞，表明这两种探针具有良好的靶向特异性。

体内micro-PET/CT成像研究

动物实验结果显示，在注射后15和30分钟，⁶⁸Ga-DOTA-PEG4-PR3和⁶⁸Ga-DOTA-PEG4-PR7在NCI-H1975肿瘤（ROR1阳性）中的摄取显著高于HepG2肿瘤（ROR1阴性）（所有P < 0.05）。这一结果进一步证实了这两种探针在体内环境下也能特异性识别ROR1表达。

阻断实验证实结合特异性

为验证结合特异性，研究人员进行了阻断实验。使用未标记的前体化合物进行阻断后，⁶⁸Ga-DOTA-PEG4-PR3在NCI-H1975肿瘤中的摄取从1.87 ± 0.32%ID/g下降到1.02 ± 0.22%ID/g（P = 0.02），⁶⁸Ga-DOTA-PEG4-PR7则从1.53 ± 0.15%ID/g下降到0.87 ± 0.24%ID/g（P = 0.011）。这种显著的摄取降低证实了这两种探针与ROR1的结合是特异性和可饱和的。

值得注意的是，第三种探针⁶⁸Ga-DOTA-KGGG-1036在NCI-H1975和HepG2肿瘤中的摄取没有显著差异，且其摄取不能被未标记的DOTA-KGGG-1036阻断，表明该探针缺乏ROR1特异性结合能力。

研究结论表明，⁶⁸Ga-DOTA-PEG4-PR3和⁶⁸Ga-DOTA-PEG4-PR7两种探针能够特异性靶向ROR1阳性肿瘤，且具有快速血液清除和高靶向本底比的特点。这些特性使它们成为无创评估肿瘤ROR1表达水平的理想分子影像工具，有望为靶向ROR1的治疗提供重要的疗效评估手段和患者筛选工具。

该研究的重要意义在于首次成功开发了具有临床应用潜力的ROR1特异性PET探针，解决了靶向ROR1治疗缺乏伴随诊断工具的难题。这些探针不仅能够无创、实时地监测肿瘤ROR1表达水平，还能为个体化治疗提供重要依据，推动靶向ROR1治疗从实验室向临床转化。未来，这些探针可能成为评估ROR1靶向治疗效果和筛选适宜患者的重要工具，具有广阔的临床应用前景。