RFFIT替代NIH试验：狂犬疫苗中和抗体定量与相对效力评估新方法的验证与评价

本研究验证了快速荧光灶抑制试验（RFFIT）作为狂犬疫苗效力评价的创新方法，通过定量中和抗体（RVNA）实现效力间接测量。结果显示RFFIT较传统NIH试验具有更高效率（92.85%符合率）、更低变异性和更符合动物伦理（3R原则），为疫苗质量控制提供了标准化替代方案。

　　

Highlight

细胞培养

使用幼仓鼠肾细胞系（BHK-21）ATCC-CCL-10 Clone 13，在37°C、5% CO₂和>70%相对湿度（RH）条件下，采用添加10%（v/v）胎牛血清（FBS）的最低必需培养基（MEM）进行培养。

狂犬病毒

制备狂犬病毒挑战病毒标准7株（CVS-7）病毒悬液（源自VECOL S.A., Colombia），使用含10%（v/v）FBS的MEM培养基配制，并预先测定其细胞培养感染剂量100（CCID₁₀₀）用于RFFIT分析。

细胞传代优化

对狂犬病毒样本（CVS-7）采用三对传代差异分别为20、15和10的BHK-21细胞培养物进行评估（所有细胞均源自第67代种子）。当使用传代差为20的细胞对时，结果出现显著差异（p<0.05）；而使用传代差为10和15的细胞对时未发现显著差异（p>0.05）。这表明细胞解冻后传代次数需严格控制以确保实验稳定性。

讨论

开发可靠、高效且符合伦理的狂犬疫苗相对效力评估方法对公共卫生至关重要。传统NIH体内试验虽具有历史意义，但存在生物变异性高、动物使用量大、伦理争议、成本高昂及流程冗长等显著缺陷。本研究通过验证RFFIT法证明其可作为NIH试验的标准化替代方案，在提升检测效率的同时显著降低动物使用量。

作者贡献声明

Sara S. Tibavija： 文稿修订与起草、方法验证与形式分析

María P. Almario： 文稿修订与起草、研究监督、方法论设计、资金获取与概念化

Valentina Jaramillo： 数据整理与形式分析

Jorge Rivera： 方法验证与实验操作

Carmen Yanira Chaparro： 方法验证

Catalina Paramo： [原文未完整呈现]

Daniel F. García： [原文未完整呈现]

Leonardo Ladino： [原文未完整呈现]

Zulma Rocío Suarez： [原文未完整呈现]

利益冲突声明

作者声明不存在可能影响本研究的已知竞争性财务利益或个人关系。