非结核分枝杆菌蛋白质组学鉴定中简化提取方法的优化与生物安全性评估

本文推荐一种基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）的非结核分枝杆菌（NTM）快速蛋白质组学鉴定方法。通过简化甲酸提取步骤，在保证生物安全性的同时显著缩短处理时间，为临床微生物实验室提供高效、可靠的NTM鉴定方案。

　　

Abstract

Introduction

非结核分枝杆菌（NTM）的蛋白质组学鉴定技术近年来持续优化。由于不同地域菌株的蛋白质谱存在差异，通用数据库的准确鉴定适用性受限。

Methods

我们优化了Bruker Daltonics公司推荐的Myco-Ex和MBT提取方案，该厂商是MALDI Biotyper（一种基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统）的制造商。实验涵盖120株临床分离株、1株环境菌株（Mycobacterium canariasense）及7株西班牙临床微生物与传染病学会（SEIMC）质控菌株。所有菌株均送至国家参考中心（卡洛斯三世健康研究所）的分枝杆菌实验室，采用多种分子方法进行并行鉴定。新蛋白提取方法仅需单步甲酸提取/灭活流程，并通过30株NTM菌株的存活实验验证该过程的生物安全性。

Results

88株缓慢生长分枝杆菌（SGM）的质谱评分范围为1.61–2.16（均值1.84），40株快速生长分枝杆菌（RGM）评分范围为1.66–2.33（均值2.06）。经甲酸处理的菌株培养8周后，临床分离株与对照组均未观察到生长。

Conclusions

我们开发了一种更简便、快速的非结核分枝杆菌蛋白质组学鉴定方法（MALDI-TOF），在保持显著评分的同时未影响生物安全性。