人α-1-酸性糖蛋白（hAGP）一步法磁珠固定化新技术：推动小分子结合研究的高通量突破

本研究针对传统hAGP-小分子结合分析方法耗时长、操作复杂的问题，开发了基于NHS酯活化磁珠的一步法固定化技术（hAGP-beads）。研究人员通过对比平衡透析法（ED）验证了该技术的可靠性，证实其可在3分钟内完成结合测定（ED需4-6小时），且hAGP结合位点构象未因固定化改变。该系统支持-80°C长期稳定储存，为高通量药物筛选提供了革新性工具。

　　

人类α-1-酸性糖蛋白（Human α-1-acid glycoprotein, hAGP）通过NHS酯（N-hydroxysuccinimide）活化磁珠实现一步法直接固定化，形成新型hAGP-beads复合体系。该技术突破了传统生物素-链霉亲和素固定化技术的多步骤局限，为研究小分子与hAGP的结合作用提供了快速、便捷的分析平台。相较于平衡透析（Equilibrium Dialysis, ED）和超速离心（Ultracentrifugation, UF）等传统方法，hAGP-beads系统仅需约3分钟孵育时间（ED需4-6小时），并通过磁性分离技术同步定量游离态与hAGP结合态的小分子。

关键实验数据显示，通过hAGP-beads测定的多种小分子平衡解离常数（K_d）与ED法结果高度一致，表明hAGP通过NHS酯共价结合磁珠后其结合位点构象未发生改变。该系统在-80°C下长期储存仍能保持结合活性，显著降低实验重复制备需求。这些特性使hAGP-beads不仅适用于常规小分子结合研究，更为高通量药物筛选领域提供了理想技术解决方案。