HEK293细胞中重组人凝血因子X的高效表达与生物活性研究：为凝血障碍治疗提供新策略

本研究成功利用HEK293细胞体系实现重组人凝血因子X（rhFX）的高效表达，通过载体构建、稳定株筛选及悬浮培养优化，将产量提升至13.16 mg/L并显著增强促凝血活性（658.4%），同时建立FXa抑制剂筛选模型（Edoxaban IC50=3.56 nM），为凝血疾病治疗提供安全可靠的生物制剂候选方案。

　　

Highlight

本研究通过单克隆细胞系筛选和悬浮培养优化，显著提升了HEK293细胞中重组人凝血因子X（rhFX）的表达效率与功能活性，为凝血障碍治疗提供了创新性解决方案。

Discussion

先天性凝血功能障碍（如FX缺乏症和血友病）源于影响凝血级联反应的基因突变，导致全球数百万人面临严重出血风险。凝血因子X（FX）作为关键丝氨酸蛋白酶，通过连接内在和外在凝血途径增强凝血酶生成，在凝血过程中发挥核心作用。本文通过单克隆细胞系筛选和悬浮培养适应策略，优化了HEK293表达系统，成功实现了rhFX的高产量和高活性表达。相较于传统血浆来源产品，重组技术避免了病原体传播风险与供应限制问题，契合凝血因子药物发展范式转移趋势（如rhFVIII和rhFIX的成功案例）。此外，本研究建立的FXa抑制剂高通量筛选模型为抗凝药物研发提供了重要技术平台。

Limitation

本研究存在若干局限性：首先未对纯化rhFX与血浆来源产品Coagadex进行直接对比分析。在进入临床开发前，需开展详细的动力学参数测定（如K_m与k_cat）、热稳定性分析（采用差示扫描荧光法等技术）以及合适动物模型体内的药代动力学/药效学研究。

Conclusion

本研究成功建立了HEK293细胞中rhFX的高效表达系统，展现出显著产量、优异稳定性和均一性，更重要的是具备治疗相关生物活性与安全性。这些发现凸显了rhFX作为凝血障碍治疗候选药物的潜力，并为未来优化生产技术和验证临床疗效的研究提供重要参考。