急性髓系白血病患者HOXA9与HOXA7基因表达变异性及其临床意义研究

本综述深入探讨了HOXA9和HOXA7基因在急性髓系白血病（AML）中的表达特征及其与NPM1突变的强相关性，揭示了HOX基因作为NPM1突变型AML靶向治疗标志物（Biomarker）的重要潜力，为开发新型靶向治疗策略（如Menin抑制剂）提供了关键理论依据。

　　

亮点

患者与方法

本研究纳入了91名新诊断的埃及急性髓系白血病（AML）病例。所有受试者均于2018年10月至2021年2月期间就诊于开罗大学国家癌症研究所的血肿/肿瘤门诊诊所。研究还包含了23名年龄和性别匹配的健康对照受试者样本，这些样本采集自健康的骨髓捐赠者。本研究获得了开罗大学医学院（Kasr Al Ainy Medical School）机构审查委员会的批准。

核酸提取

DNA和RNA从骨髓样本中提取，这些样本在严格无菌条件下收集于两个各含3毫升的EDTA管中。从人类骨髓中提取总细胞RNA和DNA分别使用QIAamp RNA Blood Mini Kit（QIAGEN? Austin, Texas, USA）和DNA Blood Mini Kit（QIAGEN? Austin, Texas, USA）。RNA和DNA的浓度和纯度通过使用NanoDrop?分光光度计测量260纳米（A???）处的吸光度来确定。

NPM1突变检测

NPM1突变的检测使用5微升基因组DNA，结合ipsogen NPM1 MutaScreen Kit（Qiagen, Hilden, Germany）进行。该试剂盒能够检测野生型和突变型NPM1，并能区分MutA、MutB和MutD突变类型。在SLAN?-48P实时PCR系统（上海宏石医疗科技有限公司）上运行的PCR程序包括：50°C初始步骤2分钟，随后95°C步骤10分钟。接着进行40个循环的95°C 15秒和60°C 1分钟。

HOXA7和HOXA9基因表达分析

RNA提取后，进行逆转录反应，使用1微克总RNA和Applied Biosystems? High-Capacity cDNA逆转录试剂盒（Thermo Fisher Scientific, USA）制备第一链cDNA。

定量RT-PCR assays使用SLAN?-48P实时PCR系统（上海宏石医疗科技有限公司）和SYBR-green荧光染料进行，使用了先前文献[37]中描述的HOXA7和HOXA9特异性引物（见表1）。

统计方法

结果使用IBM SPSS? Statistics version 22（IBM? Corp., Armonk, NY, USA）进行统计分析。数值数据适当地以均值和标准差或中位数和范围呈现。定性数据以频数和百分比呈现。定性变量之间的关系分析采用Pearson卡方检验或Fisher精确检验。曼-惠特尼U检验（非参数t检验）用于比较不符合正态分布的两组定量数据。

结果

研究对91名无细胞遗传学异常的AML患者进行，这些患者于2018年至2021年间就诊于开罗国家癌症研究所。此外，还包括了23名性别和年龄匹配的骨髓捐赠者作为对照组。

研究纳入了新诊断的埃及AML病例。AML患者的年龄范围从8个月到70岁，中位年龄32.58岁。其中女性51/91例（56%），男性40/91例（44%）；成人（19-70岁）60/91例（67%）。

AML中的HOX基因

对所有病例和对照组进行了HOXA7和HOXA9的mRNA转录本表达分析。AML组中HOXA7的中位表达量为0.71（0–21.6）倍。与对照组的中位表达量1.13（0.09 - 8.00）相比，AML患者的HOXA9中位表达量显著更高，为17.76（0.0 - 335.51），p = 0.009（图1）。

通过使用受试者工作特征（ROC）曲线检查患者和对照组的曲线下面积（AUC），HOXA9的AUC为0.72，最佳截断值为>1.3，敏感性为71.4%，特异性为69.6%，p = 0.003。HOXA7的AUC为0.60，最佳截断值为>0.385，敏感性为58.2%，特异性为69.6%，p = 0.15。

HOXA基因与生存

无病生存期（DFS）从完全缓解之日起计算，直至复发/死亡或最后一次随访之日。中位无病生存时间为6.97个月，最短0.26个月，最长28.45个月。此外，有31名患者（34.1%）在第28天达到完全缓解。其中，7名患者（22.6%）在第28天后复发。6个月时的累积生存率为70.6%。一年时为58.1%，到两年时下降至31.8%。

NPM1突变AML中的HOX基因

进行了一项比较分析，旨在检查突变型NPM1 AML患者与野生型NPM1 AML患者中HOX基因的表达水平，目的是确定NPM1与各类别中HOXA基因表达之间的相关性。NPM1突变AML与HOXA7的截断值为0.385，p值为0.032；NPM1突变AML与HOXA9的截断值为13.335，p值 < 0.001（图2）。

研究发现高HOXA基因表达与NPM1突变之间存在强关联。

讨论

AML患者中存在NPM1突变与独特的临床病理特征和更好的预后相关。NPM1突变是AML中最常见的遗传改变，约占病例的30%(39)。世界卫生组织（WHO）将NPM1归类为AML基因组突变中的一个独立实体[25]。在本研究中，样本被选择性地分为两个相对均等的组；（52.7%）的病例为NPM1突变型，（47.3%）为NPM1野生型。