双特异性抗体KN060通过靶向FXI-A2/A3表位实现抗凝与降压协同作用的新机制研究

本文首次报道人源化双域抗体KN060通过特异性靶向凝血因子XI（FXI）的A2/A3表位，在血管炎症和重塑中发挥关键作用。临床前研究证实，KN060单药治疗能显著降低AngII诱导高血压小鼠和自发性高血压大鼠的收缩压（SBP分别降低27.8 mmHg和34.7 mmHg），并改善左心室肥厚和主动脉中膜增厚。其与氯沙坦联用展现协同降压效应（ΔSBP: ?23.7 mmHg vs ?15.9 mmHg），为耐药性高血压提供了兼具抗凝与血管保护作用的全新治疗策略。

　　

结合亲和力分析

通过生物膜干涉技术（BLI）对抗体KN060及亲本重链抗体与FXI、FXIa及其苹果结构域抗原蛋白的结合亲和力进行测定。实验采用抗体捕获/抗原分析模式，将待测抗体稀释至10 μg/mL后固定于生物传感器，抗原蛋白按梯度浓度与抗体结合。检测程序包含基线稳定、结合反应与解离阶段，最终通过拟合动力学曲线计算结合常数（K_D）。

KN060结合并抑制FXI与FXIa活性

我们通过骆驼免疫人源FXI苹果结构域（排除催化域）并筛选噬菌体展示文库，获得两株分别靶向苹果2域（iFE 56）和苹果3域（iFE 97）的重链抗体。其Fc融合蛋白表现出皮摩尔级亲和力（详见补充图S1）。进一步构建的双特异性抗体KN060可同时结合A2/A3表位，通过四价结合空间阻遏FXI被FXIIa和凝血酶激活，且不影响FXIa介导的FIX活化（图1A）。表面等离子共振（SPR）显示KN060与FXI/FXIa的结合解离常数（K_D）达亚皮摩尔级别（图1B-C）。在凝血酶生成试验中，KN060显著抑制FXI依赖性凝血酶爆发（IC₅₀ = 0.38 nM），且对生理性止血功能无影响（图1D）。

讨论

过去十年中，高血压研究领域取得显著进展，但耐药性高血压仍是临床难题。此类患者心血管与肾脏并发症风险升高，亟需精准治疗新策略。除肾素-血管紧张素系统（RAAS）抑制剂、盐皮质激素受体拮抗剂或内皮素拮抗剂外，靶向凝血-炎症交叉通路的新型疗法成为前沿方向。本研究首次揭示FXI抑制剂在高血压治疗中的直接作用，KN060通过双重机制——抑制血小板局部FXI介导的凝血-炎症环路及阻断p38 MAPK/JNK/ERK信号通路活化——实现降压与器官保护协同效应。其与RAAS抑制剂的联用优势，为耐药性高血压提供了精准治疗新范式。