西班牙圈养白颈白眉猴(Cercocebus lunulatus)自然获得性内脏利什曼病的首例病例报告及病原学鉴定

本文报道了西班牙圈养濒危物种白颈白眉猴首例婴儿利什曼原虫(L. infantum)感染所致内脏利什曼病的临床病理学特征。通过尸检发现多器官播散性肉芽肿病变，经血清学(IFAT/ELISA/WB)、分子生物学(qPCR/RFLP/cytB测序)和免疫组化确诊，提示L. infantum宿主范围扩大，为动物园疫病防控提供关键依据。

　　

在西班牙等地中海地区，婴儿利什曼原虫（Leishmania infantum）作为一种重要的人兽共患病原体，长期以来主要在犬类中被确认为主要储存宿主。然而近年来，随着监测范围的扩大和诊断技术的进步，越来越多的非传统宿主被发现可能参与该寄生虫的传播循环。尤其值得关注的是，在动物园等圈养环境中，多种珍稀野生动物陆续出现感染病例，包括本内特小袋鼠（Macropus rufogriseus rufogriseus）、婆罗洲猩猩（Pongo pygmaeus pygmaeus）以及猫鼬（Suricata suricatta）等。这些发现不仅揭示了L. infantum广泛的宿主适应性，也对濒危物种保护与公共卫生管理提出了新的挑战。

尽管实验条件下非人灵长类动物感染利什曼属寄生虫后可出现自限性感染，但自然感染下出现临床症状的报道仍较为罕见。白颈白眉猴（Cercocebus lunulatus）作为非洲濒临灭绝的灵长类物种，其感染情况尚未见文献记载。本研究首次详细报道了一例圈养白颈白眉猴因L. infantum感染导致的内脏利什曼病，系统描述了其临床病理特征、诊断过程与分子鉴定结果，为理解该病原在灵长类中的致病机制及制定动物园防控策略提供了重要参考。

本研究主要采用以下关键技术方法：对濒危物种白颈白眉猴进行临床监测与尸检采样；通过血清蛋白电泳（AGE）分析多克隆丙种球蛋白病；应用免疫荧光抗体试验（IFAT）、酶联免疫吸附测定（ELISA）和蛋白质印迹（WB）进行血清学诊断；利用定量聚合酶链反应（qPCR）、限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）及细胞色素b（cytB）基因纳米孔测序（MatMet）进行分子鉴定；对组织样本进行组织病理学检查和免疫组化（IHC）染色确认病原分布。

Case history

一只18岁雄性白颈白眉猴出现进行性体重下降、虚弱和淡漠症状，伴发腋下淋巴结肿大。临床检查发现严重肌肉萎缩和黏膜苍白。在麻醉状态下采集淋巴结细针抽吸物和血液样本后，动物因自发性气胸导致的急性呼吸衰竭死亡。

Serum protein electrophoresis

血清蛋白电泳显示α₂-球蛋白升高和多克隆丙种球蛋白病，表现为γ-和β-球蛋白宽基底峰，与健康对照相比显著异常，提示急性期反应。

Serological analysis

IFAT检测显示抗体滴度为1:800，ELISA光密度值达1.211，WB分析显示对14、16、18、20、24、28、30、34、36、44、46、48、50、53、55、58和71 kDa多个抗原条带发生免疫反应。同时排除了猿免疫缺陷病毒（SIV）和猿逆转录病毒（SRV）感染。

Pathological study

尸检发现肺、淋巴结、脾脏和肝脏多发白色结节。细胞学检查显示巨噬细胞和多核巨细胞胞质内含有符合利什曼原虫的卵圆形无鞭毛体。组织学证实这些结节为凝固性坏死灶，周围环绕以巨噬细胞为主的炎症浸润。免疫组化染色在巨噬细胞胞质内检测到L. infantum无鞭毛体。

Molecular analysis

qPCR检测显示脾脏寄生虫负荷最高（1.4×10⁴寄生虫/克组织），其次为肺（1.7×10³）和淋巴结（1.1×10²）。PCR-RFLP和cytB基因测序（GenBank登录号PV928215）均证实为L. infantum感染。

Discussion and conclusions

本研究首次详细描述了白颈白眉猴自然感染L. infantum所致内脏利什曼病的临床病理学特征。该病例表现为典型的播散性内脏感染，以脾脏寄生虫负荷最高，但值得注意的是肺组织显示出显著的组织嗜性，这一发现与犬类感染的典型分布有所不同。尽管排除了SIV和SRV等常见免疫抑制病毒，动物的高龄状况和群体争斗导致的应激状态可能促使感染发展为临床疾病。

诊断方面，血清学检测显示高抗体滴度，结合细胞学检查、组织病理学、免疫组化和分子生物学方法，建立了全面的诊断流程。研究强调了对圈养灵长类动物进行利什曼病监测的重要性，特别是在流行地区。对于出现体重下降、淋巴结病和多克隆丙种球蛋白病的灵长类个体，应将利什曼病纳入鉴别诊断。

本研究证实L. infantum宿主范围持续扩大，可感染高度濒危的灵长类物种并导致严重疾病。研究结果强调需要在动物园环境中加强针对白颈白眉猴等非传统宿主的监测和防控措施，包括媒介控制、定期血清学筛查和早期诊断干预，以减少动物园环境中的传播风险和人兽共患病威胁。该案例为理解L. infantum在非人灵长类中的致病机制提供了重要数据，对濒危物种保护和公共卫生管理均具有重要意义。