综述：工程化CAR-T细胞治疗实体瘤：双特异性抗原靶向、肿瘤微环境调控与毒性控制

本综述系统探讨了CAR-T细胞疗法在实体瘤治疗中的前沿进展，重点解析了双特异性抗原靶向（如双靶点CAR）、肿瘤微环境（TME）重塑（通过装甲型CAR分泌IL-12或检查点抑制剂）及毒性控制（如iCasp9自杀开关）三大策略，为突破实体瘤治疗瓶颈提供了多维度解决方案。

　　

Abstract

嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法革新了血液恶性肿瘤的治疗格局，但其在实体瘤中的应用仍面临抗原异质性、免疫抑制性肿瘤微环境（TME）以及治疗相关毒性的严峻挑战。本综述系统梳理了各代CAR-T技术的发展脉络，着重强调了共刺激结构域（如CD28、4-1BB）和细胞因子强化型TRUCK（T cells Redirected for Universal Cytokine-mediated Killing）在增强T细胞持久性与功能方面的核心作用。在载体递送系统方面，病毒载体（慢病毒、γ-逆转录病毒）与非病毒载体（CRISPR基因编辑、转座子系统、mRNA电转染）在效率、安全性和可规模化生产上各具优劣，其中CRISPR技术因其可实现多重基因编辑以提升靶向特异性而备受关注。

为应对实体瘤抗原异质性，双靶向CAR（bispecific CAR）策略应运而生，可同时识别两种不同肿瘤相关抗原，从而降低抗原逃逸风险。此外，肿瘤局部微环境响应型CAR设计，例如缺氧诱导型CAR（hypoxia-inducible CAR）和SynNotch受体系统，能够将CAR-T细胞的激活特异性限制在肿瘤部位，增强安全性。在改善T细胞浸润方面，趋化因子受体工程化改造（如表达CXCR2、CCR4）可引导CAR-T细胞迁移至肿瘤核心区域；而“装甲型CAR”（armored CAR）通过分泌IL-12或免疫检查点抑制剂（如抗PD-1抗体）等手段，直接重塑免疫抑制性TME，逆转T细胞耗竭。

在分子构建技术上，纳米抗体（nanobody）为基础设计的CAR-T细胞展现出优于传统单链可变区片段（scFv）的潜力，其具有更高的稳定性、更深的肿瘤组织穿透能力以及更低免疫原性。安全性调控亦取得多项突破：诱导型 caspase-9（iCasp9）自杀基因开关可在发生严重毒性时迅速清除CAR-T细胞；小分子药物达沙替尼（dasatinib）可逆地抑制CAR-T细胞活化；细胞因子阻断策略则可用于缓解细胞因子释放综合征（CRS）。

尽管多项临床实验显示双特异性CAR-T在实体瘤中前景可期，目前的挑战仍集中在制造工艺复杂性、脱靶效应以及规模化生产工艺瓶颈。未来，整合人工智能（AI）驱动的抗原筛选与个性化新抗原（neoantigen）靶向策略，或可引领CAR-T 2.0时代的到来，但这仍有待于 scalable 生产体系与全球监管协调的进一步推进。

Graphical Abstract

本综述的图示摘要总结了工程化CAR-T细胞攻克实体瘤的多维策略：通过双特异性靶向克服抗原异质性问题；利用趋化因子受体增强肿瘤浸润；通过局部细胞因子释放或免疫调节分子重塑肿瘤微环境；并引入精准可控的安全开关系统以管理毒性反应。整体呈现出从基础构建到临床应用的转化研究全景。