基于亲和纯化-质谱联用技术的SFTS病毒与宿主蛋白互作全景图谱揭示致病新机制

本刊推荐：本研究采用亲和纯化-质谱联用技术（AP-MS）系统性解析SFTS病毒蛋白与宿主互作网络，鉴定出432个关键宿主互作蛋白，首次实验验证NSs与VDAC1/Vimentin/HSP90AB1的相互作用，为揭示病毒免疫逃逸机制和抗病毒靶点开发提供重要理论依据。

　　

Materials

HEK293T细胞系购自美国典型培养物保藏中心（ATCC）。VR1012-NP-HA、VR1012-NSs-HA、VR1012-Gc-HA、pCAGGS-Gn-HA和pcDNA3.1-L-HA质粒由天津大学王涛教授惠赠。胎牛血清（FBS）购自Ausbian，杜氏改良 Eagle 培养基（DMEM）和胰蛋白酶购自Gibco。抗HA亲和基质和蛋白酶抑制剂 cocktail 购自罗氏公司。

Flow chart of proteomic studies on the interaction between SFTSV virus protein and host protein

为探究SFTSV致病机制，我们采用免疫共沉淀（Co-IP）联合质谱技术系统性鉴定与SFTSV结构/非结构蛋白互作的宿主蛋白。将NSs-HA、NP-HA、Gn-HA、Gc-HA和L-HA重组质粒转染至HEK293T细胞，空载体作阴性对照。转染48小时后收获细胞进行Co-IP，蛋白复合物经尿素变性、DTT还原、碘乙酰胺烷基化处理后，通过胰蛋白酶解和StageTip脱盐制备质谱样品。最终通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析获得病毒-宿主蛋白互作数据。

Discussion

基于质谱的蛋白质组学正日益广泛应用于病毒学研究。蛋白质组学调查带来了新颖见解，使我们能更深入理解病毒-宿主分子复合物如何调控宿主防御机制并促进病毒复制。这些发现将为揭示病毒感染致病机制和识别病毒靶点提供关键线索。对于SFTSV这种具有高死亡率的新发蜱传白蛉病毒，其精确致病机制仍待阐明。我们的研究通过构建病毒蛋白与宿主蛋白的系统互作网络，为探索SFTSV感染机制提供了宝贵资源。

Author statement

侯雯、陈瑞兵、刘红云共同设计本研究思路。侯雯和刘红云完成实验及质谱数据采集。刘红云、卢建森和潘浩进行数据分析。侯雯完成稿件撰写。刘红云、王涛和潘浩参与稿件修订。所有作者均认可稿件最终版本。

CRediT authorship contribution statement

侯雯：综述编辑/原稿撰写/方法论/研究实施/资金获取/形式分析/概念化；卢建森：软件/形式分析；陈瑞兵：方法论/资金获取；刘红云：综述编辑/验证/形式分析；王涛：督导/概念化；潘浩：综述编辑/形式分析。

Funding

本研究得到天津市自然科学基金（23JCZDJC01070, 22JCYBJC00550, 18JCZDJC34500）、国家自然科学基金（22474087）以及国家重点实验室开放研究基金的资助。

Declaration of Competing Interest

作者声明不存在利益冲突。