利用液滴数字PCR技术检测肝母细胞瘤与肝细胞癌中TERT启动子热点突变的应用与临床意义

本文推荐一种基于液滴数字PCR（ddPCR）的高灵敏度检测方案，可同步识别TERT启动子（TERTp）C228T和C250T热点突变。该方法在肝细胞癌（HCC）、肝母细胞瘤（HB）及FFPE样本中均展现100%的灵敏度和特异性，最低可检测0.1%突变等位基因频率，为肿瘤诊断、液态活检及预后评估提供重要技术支撑。

　　

Highlight

利用多重液滴数字PCR（ddPCR）技术，我们开发了一种可同时检测TERT启动子（TERTp）两个热点突变的新型检测系统。该方法适用于来源于冷冻组织、福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本以及液态活检中的细胞游离DNA（cfDNA），仅需10 ng DNA即可在一次反应中完成两种突变的同步检测。

Detection of TERTp lesions

在96例肝母细胞瘤（HB）样本中检出17例、11例肝细胞癌（HCC）样本中检出8例存在TERTp突变。其中22例为C228T类型，3例为C250T类型。所有突变均经Sanger测序验证，表明ddPCR检测系统性能可靠。

Detection limit of TERTp lesions

在HepG2细胞系中成功检测到50%突变等位基因频率（MAF）的TERTp突变等位基因。通过连续稀释实验证明，该检测方法对突变等位基因频率的检测下限可达约0.1%，展现出极高的检测灵敏度。

Discussion

多重ddPCR技术可实现单次检测中多个靶点的同步分析。本研究证实，采用双探针的ddPCR检测系统能够利用微量DNA（包括FFPE样本和cfDNA）同步分析TERTp的两个热点突变。该方法不仅操作简便、检测快速（约两小时出结果），还具备高度敏感性和特异性，尤其适用于肿瘤组织突变筛查和液态活检中的微量突变检测。此外，研究发现携带TERTp突变的HB患者预后显著较差，突显该检测方法在临床预后评估和治疗监测中的重要价值。