基于GC–MS技术的传统外用制剂中樟脑、薄荷醇、水杨酸甲酯和百里香酚合规性分析与掺假检测研究

本研究针对传统外用制剂中活性成分（樟脑、薄荷醇、水杨酸甲酯、百里香酚）的合规性问题，开发并验证了同时测定四种化合物的GC–MS方法。该方法灵敏度高（LOD 1 μg/mL，LOQ 3 μg/mL），准确度好（回收率94.98%–104.70%），成功应用于32个市场样品检测，发现3个样品超出NPRA的DRGD限值，为监管机构提供了可靠的质量控制工具。

　　

在传统医学领域，以搽剂、软膏、乳膏和贴剂为代表的局部外用制剂因其独特的治疗优势而备受青睐。这些制剂中常含有樟脑(camphor)、薄荷醇(menthol)、水杨酸甲酯(methyl salicylate)和百里香酚(thymol)等活性成分，它们具有抗炎、镇痛、清凉等多重药理作用。然而，随着市场需求的增长，部分生产商为追求产品效果而非法添加过量活性成分，导致产品合规性问题日益突出。这不仅违背了药品监管要求，更对消费者健康构成潜在威胁——过量樟脑可能引发神经系统紊乱，薄荷醇过度使用可能导致皮肤病变，水杨酸甲酯中毒会引发呼吸窘迫，而百里香酚则存在遗传毒性风险。马来西亚国家药品监管机构(NPRA)面临着传统药物中活性成分掺假检测的技术挑战，亟需建立高效、准确的分析方法进行质量控制和市场监督。

在此背景下，马来西亚国家药品监管局合规与质量控制中心的研究团队在《Results in Chemistry》发表了创新性研究成果，开发了一种基于气相色谱-质谱联用(GC–MS)技术的同时测定四种活性成分的分析方法，并成功应用于实际市场样品的检测。

研究人员采用的技术方法主要包括：1）优化样品前处理流程，采用55°C超声辅助甲醇提取结合0.45 μm尼龙滤膜过滤；2）建立GC–MS分析条件，使用BP-624毛细管柱(30 m × 250 μm × 1.4 μm)实现16分钟内完成分离；3）运用选择性离子监测(SIM)模式提高检测特异性；4）以丁香油酚(eugenol)为内标进行定量分析；5）按照ICH Q2(R2)指南全面验证方法的特异性、线性范围、准确度、精密度等参数。研究使用的32个市场监测样品来自NPRA的上市后监督活动，基于风险抽样策略选取。

3.1. 系统适用性

系统适用性测试结果显示，所有目标化合物的理论塔板数均高于124,476，拖尾因子在1.022-1.067之间，峰面积相对标准偏差(%RSD)小于1.911%，符合分析要求，表明方法稳定可靠。

3.2. 特异性和选择性

方法展现出良好的特异性，空白样品无干扰峰，加标样品和混合标准溶液中的樟脑、薄荷醇、水杨酸甲酯、百里香酚和内标均呈现清晰且保留时间一致的色谱峰。通过特征离子碎片(m/z)和相对指数百分比进一步证实了方法的特异性。

3.3. 检测限和定量限

该方法灵敏度高，樟脑、薄荷醇、水杨酸甲酯和百里香酚的检测限(LOD)为1 μg/mL，定量限(LOQ)为3 μg/mL，信噪比均符合ICH指南要求。

3.4. 线性和范围

线性回归分析显示，四种化合物在3-80 μg/mL浓度范围内均呈现良好线性，决定系数(r²)分别为0.999、0.998、0.999和0.998，满足定量分析要求。

3.5. 准确度

在不同基质(搽剂、软膏、乳膏、贴剂)中进行加标回收试验，三个浓度水平(6、20、80 μg/mL)的回收率范围分别为：樟脑96.54%-103.89%、薄荷醇94.98%-104.10%、水杨酸甲酯97.53%-104.02%、百里香酚96.72%-104.70%，均在可接受范围内(90%-110%)。

3.6. 精密度

精密度研究表明，方法重复性和中间精密度良好，所有化合物的%RSD在1.88%-3.69%之间，低于5%的接受标准，表明方法在不同分析人员和不同日期分析时仍保持稳定。

3.7. 传统外用产品中目标化合物的靶向GC-MS分析与定量

应用验证的方法对32个市场样品进行分析，发现三种样品(SL7、SO3、SO4)超出NPRA药品注册指导文件(DRGD)规定的限值。其中SL7样品樟脑含量12.38%(超过11%限值)，薄荷醇含量16.09%(略超16%限值)；SO3和SO4样品的薄荷醇含量分别高达68.18%和68.59%，远超安全限值。

研究结论部分强调，该GC–MS方法成功实现了传统外用制剂中四种活性成分的同时测定，方法验证参数符合监管要求。实际样品检测发现的市场违规产品证明了该技术在监管实践中的实用价值。研究还通过白色分析化学(WAC)评估表明，该方法在分析性能(红色领域得分100%)、环境友好性(绿色领域得分97.5%)和经济实用性(蓝色领域得分93.3%)方面均表现优异，总白度得分96.9%，优于以往报道的方法。

讨论部分指出，GC–MS技术特别适合这些挥发性半挥发性化合物的分析，因其具有分子量较小(150-156 g/mol)、具有芳香环或环状结构等特点。方法采用甲醇提取结合超声处理，操作简便且回收率良好。使用选择性离子监测(SIM)模式有效降低了基质干扰，提高了检测准确性。研究发现的市场样品违规情况凸显了加强传统药品监管的紧迫性，特别是对薄荷醇和樟脑含量的监控。这些过量成分可能带来神经系统毒性、胚胎发育障碍等严重健康风险。

研究也承认了一些局限性：GC–MS技术主要适用于挥发性成分分析，对非挥发性成分存在检测盲区；甲醇提取可能不适用于所有基质类型，特别是高油性或蜡质基质；未采用基质匹配校准可能影响某些复杂样品的定量准确性。未来研究可结合液相色谱-质谱(LC-MS)技术以扩大检测范围，并探索更环保的样品前处理技术如固相微萃取(SPME)或QuEChERS方法。

该研究的实际意义在于为监管机构提供了一种可靠、高效的分析工具，可用于传统外用产品的质量控制和市场监督，保障消费者用药安全，同时促进传统医药行业的规范发展。