基于QbD策略的RP-HPLC方法开发与验证：同步测定Deflazacort与Tamsulosin Hydrochloride的ICH Q14/Q2R2合规研究

本研究针对Deflazacort（DEF）与Tamsulosin Hydrochloride（TAM）复方胶囊制剂缺乏同步定量分析方法的难题，采用质量源于设计（QbD）理念，结合Box-Behnken Design（BBD）优化反相高效液相色谱（RP-HPLC）条件，成功建立了灵敏、准确且稳定的分析方法。经验证符合ICH Q2R2指南要求，为制剂质量控制和临床用药安全提供了可靠技术支撑，对推动复方制剂标准化分析具有重要实践意义。

　　

在药物分析领域，复方制剂的高效、准确质量控制一直是行业关注的焦点。Deflazacort（DEF）作为一种糖皮质激素，用于治疗炎症性疾病和自身免疫性疾病，而Tamsulosin Hydrochloride（TAM）是选择性α_1A-肾上腺素能受体阻滞剂，常用于治疗良性前列腺增生（BPH）。这两种药物的复方胶囊制剂在临床上逐渐应用，但其同步定量分析却面临挑战：DEF的水溶性差、生物利用度仅约70%，且尚未被任何药典收载；TAM剂量极低（0.4 mg/胶囊），传统分析方法难以实现高灵敏度与高特异性兼顾。此外，现有文献中尚未有基于质量源于设计（Quality by Design, QbD）理念并符合ICH Q14和Q2R2框架的同步测定方法报道。

为解决这一问题，研究人员开展了一项系统研究，旨在开发并验证一种反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法，用于DEF和TAM在复方胶囊中的同步测定。该研究采用QbD策略，通过风险识别、实验设计（DoE）和响应面优化，显著提升了方法的鲁棒性和可靠性。论文发表于《Current Plant Biology》，为复方制剂分析提供了新思路。

在方法学层面，研究团队运用了几项关键技术：首先，基于鱼骨图（Ishikawa diagram）进行系统性风险识别，评估了缓冲液类型、有机改性剂比例、pH、流速等关键方法参数（CMPs）的影响；其次，采用三因素三水平的Box-Behnken Design（BBD）优化色谱条件，以保留时间、分辨率和理论塔板数作为响应变量；最后，按照ICH Q2R2指南全面验证方法的线性、准确度、精密度、特异性、检测限（LOD）、定量限（LOQ）和稳健性。所有实验使用Agilent 1260 Infinity II HPLC系统，配备PDA检测器，色谱柱为Agilent TC-C18（250 mm × 4.6 mm, 4 μm），检测波长283 nm。

3.1. Method development studies

通过多轮试验，研究人员筛选出最优色谱条件：流动相为0.1% orthophosphoric acid（OPA, pH 6.8）与乙腈（50:50, v/v），流速1.0 mL/min。在此条件下，DEF和TAM的保留时间分别为7.4分钟和3.3分钟，峰形对称，分离度良好（Resolution > 24），理论塔板数均优于1500，满足系统适用性要求。

3.2. Optimization (QbD approach)

利用BBD设计，团队对有机改性剂比例（45–55%）、pH（6.6–7.0）和流速（0.8–1.2 mL/min）进行了优化。ANOVA分析表明，有机改性剂和流速对保留时间、分辨率及理论塔板数均有显著影响（p < 0.05），而pH的影响相对较小。3D响应面图显示，较低流速和较高有机相比例可延长保留时间并提高柱效，但会降低分辨率；最终确定的最优条件为有机相50%、pH 6.8、流速1.0 mL/min，在此设计空间内方法性能稳定。

4. Method validation studies

4.1. System suitability

六次重复进样的RSD均低于2%（DEF为0.7%，TAM为0.56%），表明系统精密度良好。

4.2. Linearity

DEF在45–105 μg/mL、TAM在0.6–1.4 μg/mL范围内呈现良好线性，相关系数（r2）分别为0.999和0.996。

4.3. Accuracy

加标回收率试验显示，DEF和TAM在80%、100%、120%三个水平的平均回收率分别为97.13%和102.29%，符合97–103%的接受标准。

4.4. Precision

日内和日间精密的RSD均小于2%，表明方法重复性优异。

4.5. Limit of detection and limit of quantification

DEF的LOD和LOQ分别为0.67 μg/mL和2.02 μg/mL，TAM的LOD和LOQ为0.027 μg/mL和0.082 μg/mL，灵敏度满足低剂量检测需求。

4.6. Specificity

色谱图显示，DEF和TAM峰与空白、辅料及降解产物无干扰，证明方法特异性强。

4.7. Robustness

故意改变流动相比例、pH和流速后，方法仍保持稳定，RSD符合要求。溶液在室温下24小时内稳定性良好。

4.8. Assay and applicability of developed method

对市售胶囊（Defcort?）进行测定，DEF和TAM的含量分别为99.17%和100.18%，表明方法适用于实际样品分析。

4.9. Updated risk assessment

更新后的风险评估将初始中高风险参数（如缓冲液类型、有机相比例、pH）优化后均降至低风险，进一步确认了方法的鲁棒性。

4.10. Confirmation of control strategy, method operable design region (design space) and continual improvement

建立了明确的控制策略和设计空间，确保方法在长期使用中保持性能一致。通过持续监控和系统适用性测试，实现生命周期管理。

5. Discussion

本研究首次将QbD理念与BBD优化结合，应用于DEF和TAM复方制剂的RP-HPLC方法开发。相较于传统试错法，该方法通过系统性的风险管理和实验设计，显著提高了方法的可重复性和 regulatory compliance（法规符合性）。优化后的色谱条件在较短时间内实现了良好分离，且溶剂消耗低，经济环保。验证结果表明，方法在灵敏度、准确度、精密度和稳健性方面均优于以往报道的单药分析方法。

此外，研究还通过更新风险评估和控制策略，确保了方法在整个生命周期内的可靠性。这一策略不仅适用于本复方制剂，还可推广至其他低剂量或复杂矩阵的药品分析中。该方法的成功开发，为制药行业提供了符合ICH Q14和Q2R2要求的分析范例，对提升复方制剂质量控制水平具有重要意义。

6. Conclusion

本研究开发了一种基于QbD的RP-HPLC方法，成功实现了DEF和TAM在复方胶囊中的同步测定。方法经全面验证，符合ICH Q2R2指南，具有高灵敏度、高准确度和良好稳健性。通过BBD优化和风险管理，确保了方法的科学性和可靠性。该研究不仅解决了复方制剂分析的技术难题，还为行业提供了可推广的QbD实践案例，对保障药品质量和患者用药安全具有重要价值。