综述：对虾养殖中RNAi递送系统的比较评述及未来方向

本综述系统探讨了RNA干扰（RNAi）技术在对虾病毒性疾病防控中的应用潜力，重点比较了dsRNA、siRNA、miRNA等多种RNAi分子的作用机制，分析了体外转录、细菌体内生产等dsRNA制备技术，并评估了注射、浸泡、口服及纳米颗粒递送等系统的效率与可行性，为RNAi技术在水产养殖中的规模化应用提供了重要参考。

　　

RNAi分子类型及其作用机制

RNA干扰（RNAi）是真核生物中保守的基因沉默机制，通过对特定mRNA的降解或翻译抑制实现基因表达调控。在对虾病毒防控中应用的RNAi分子主要包括双链RNA（dsRNA）、小干扰RNA（siRNA）、微RNA（miRNA）、短发夹RNA（shRNA）和长发夹RNA（lhRNA）。其中dsRNA被Dicer酶切割生成siRNA，进而引导RNA诱导沉默复合体（RISC）靶向降解病毒基因。研究表明，针对白斑综合征病毒（WSSV）的vp28、vp26、orf89等结构基因以及宿主Penaeus monodon Rab7等感染相关基因的RNAi能有效抑制病毒复制。

dsRNA生产技术对比

dsRNA的大规模制备是RNAi应用的前提。目前主要生产方式包括体外转录（IVT）、化学合成、Dicer酶解生成siRNA以及体内细菌表达系统。IVT法利用DNA模板通过T7 RNA聚合酶转录生成dsRNA，成本较高但纯度优异；化学合成适用于短序列siRNA但规模受限；而利用重组菌株（如HT115E. coli）进行体内dsRNA生产则具有显著的成本优势，可通过发酵大规模制备，更适合水产养殖场景的应用需求。

递送系统的创新与挑战

尽管实验室中注射递送显示高效基因沉默效果，但其操作强度大且不适用于规模化对虾养殖。目前研究的替代方案包括：1）口服递送：通过表达dsRNA的工程菌株或微胶囊化饲料投喂；2）浸泡法：将虾苗浸没于dsRNA溶液中；3）纳米颗粒载体：利用壳聚糖、阳离子聚合物等材料包封dsRNA提升稳定性与细胞摄取率。细菌递送系统尤其受到关注，既可表达靶向病毒基因的dsRNA，又能作为免疫刺激剂增强对虾抗病能力。

田间应用的可行性分析

RNAi技术在对虾养殖中展现出高度特异性、环境友好性和抗病毒有效性，其口服递送方式更具规模化应用潜力。农业领域已有成功先例（如表达DvSnf7 dsRNA的转基因玉米），为水产应用提供参考。然而细菌菌株选择、dsRNA稳定性、投喂策略以及长期安全性等问题仍需优化。特别是针对不同对虾发育阶段（育苗期/成虾期）需要制定差异化的递送方案。

未来发展方向

未来研究应聚焦于：1）开发高效稳定的口服递送载体；2）优化细菌发酵与dsRNA提取工艺以降低成本；3）探索多重靶向策略（如同时沉默病毒基因与宿主因子）；4）建立标准化效果评价体系；5）加强环境安全性与抗性演化风险评估。通过多学科协作推进RNAi技术从实验室向养殖场的转化，有望重塑对虾疾病防控体系。

结论

RNAi技术为对虾病毒性疾病防控提供了革命性解决方案。通过比较多种递送系统，口服与纳米颗粒递送展现出良好的应用前景。虽然目前仍存在生产成本、稳定性和给药方案优化等挑战，但随着细菌表达系统和制剂技术的进步，RNAi有望成为对虾养殖中替代传统防控手段的可持续策略。