基于多检测器联用在线纳流分选策略加速诃子中流感病毒PA内切酶抑制剂的发现

本研究开发了一种创新的HPLC-DAD-CAD-MS多检测器联用在线纳流分选平台，结合FRET生物活性分析，系统性筛选传统中药（TCM）中流感病毒PAN内切酶抑制剂。从230种中药提取物中发现诃子（Terminalia chebula Retz.）提取物具有显著抑制活性（IC50=0.88 μg/mL），并鉴定出31种低丰度高活性化合物（包括鞣花酸、诃子酸等），其抑制效果优于巴洛沙韦（IC50=10.83 μM）。该策略为复杂体系中药效物质基础研究提供了新范式。

　　

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Chemicals and materials

所有中药材（详细信息见支持信息表S1）购自广州采芝林药业有限公司和广东一方制药有限公司。药材由暨南大学药学院药物分析研究所张婷婷副教授进行鉴定。诃子成熟干燥果实采购自广州采芝林药业有限公司（批号：20220501）。

Primary screening of TCM extracts

基于FRET的PA_N抑制实验系统性地筛选了230种中药提取物（乙醇/水提取物，浓度125 μg/mL）。如热图（图1）和表S1所示，12种乙醇提取物（编号B15、C11等）和4种水提物（编号O9、O12等）表现出高于80%的PA_N抑制率。值得注意的是，部分提取物（如姜黄、海金沙孢子、黄连等）虽在传统抗病毒应用中备受关注，但其PA_N抑制活性低于40%，而诃子（编号N2）乙醇提取物展现出卓越的抑制效果（IC₅₀=0.88 μg/mL），显著优于阳性药巴洛沙韦（IC₅₀=10.83 μM）。

Conclusions

本研究提出了一种整合在线纳流分选、HPLC-DAD-CAD/MS分析和FRET生物测定的多检测器策略，从诃子中发现了31种潜在PA_N抑制剂，包括8种没食子单宁、12种鞣花单宁、6种酚酸和5种未鉴定化合物。关键的是，其中75.9%为超低丰度化合物（CAD响应值<1 pA·min），且有6种化合物抑制率超90%。在11种验证化合物中，5种（鞣花酸、诃子酸、安石榴苷、诃子鞣花酸和1,3,6-三-O-没食子酰-β-D-葡萄糖）表现出优于巴洛沙韦的抑制活性（IC₅₀=0.52-1.00 μM）。分子对接研究揭示了它们与PA_N的关键结合相互作用和机制基础。该研究不仅发现了新型PA_N抑制剂，更为复杂中药体系的含量-活性关联研究提供了可扩展的分析策略。