靶向Arf6依赖性回收通路调控脂筏稳态以减轻炎症的新机制

本研究针对炎症受体依赖脂筏组装激活的难题，探索了合成氧固醇Oxy210通过调控Arf6依赖性回收通路改变脂筏组成与丰度的新机制。研究人员发现Oxy210能抑制TLR4二聚化与内化，减少NLRP3炎症小体活化，并增强ABCA1介导的胆固醇外流，显著减轻体内外炎症反应。该研究为脂筏靶向治疗炎症性疾病提供了新策略。

　　

细胞膜上存在一种称为脂筏（lipid rafts）的特殊微结构域，它们富含胆固醇、鞘磷脂和饱和脂肪酸，像漂浮在液态无序膜环境中的“功能平台”。许多免疫受体（如TLR4）、病原体识别受体和信号分子聚集于此，通过促进蛋白相互作用参与炎症应答。当脂筏过度聚集形成“炎症筏”（inflammaraft）时，会加剧多种疾病，包括动脉粥样硬化、神经退行性疾病和自身免疫性疾病。然而，目前靶向脂筏的治疗策略仍缺乏明确的机制指导，制约了其临床应用。

在这项发表于《Journal of Lipid Research》的研究中，研究人员聚焦于一种合成氧固醇化合物Oxy210，探究其是否通过调控脂筏功能发挥抗炎作用。他们发现，Oxy210不仅能减少脂筏丰度，还显著抑制了脂多糖（LPS）诱导的炎症反应，其机制与调控小GTP酶Arf6介导的回收通路密切相关。

为开展本研究，团队运用了多种关键技术方法：通过密度梯度离心分离脂筏并进行脂质组学分析；采用流式细胞术检测细胞表面TLR4表达与内化；使用Western blot分析Arf6、ABCA1等关键蛋白；通过siRNA沉默和过载实验验证Arf6功能；借助胆固醇外流实验评估ABCA1活性；并利用蛋白质-脂质 overlay assay检测分子互作。动物实验采用C57BL/6J小鼠，通过口服Oxy210后LPS腹腔注射建立急性炎症模型。

研究结果揭示以下重要发现：

一、Oxy210减少炎症

体内实验显示，Oxy210处理降低血液中性粒细胞和巡逻单核细胞频率，抑制LPS引起的TLR4上调和细胞因子（TNFα、IL-6）分泌。体外实验中，Oxy210预处理显著减轻巨噬细胞炎症应答。

二、Oxy210降低脂筏丰度

在多种细胞系（SupT1、RAW264.7、BMDM、SH-SY5Y）中，Oxy210处理均使脂筏标志物胆固醇和flotillin-1的梯度分布峰值下降，表明其具有广谱脂筏调控能力。

三、Oxy210减弱TLR4信号

Oxy210抑制LPS引起的TLR4二聚化、内化和下游ERK磷酸化，减少NLRP炎症小体组装和促炎因子基因表达。

四、Oxy210促进逆向胆固醇转运

Oxy210增加ABCA1和ABCG1表达，增强载脂蛋白A-I（apoA-I）和HDL介导的胆固醇外流，但不依赖LXR激活途径。在ABCA1缺陷细胞中，Oxy210仍可减少脂筏，表明其作用不依赖于胆固醇外流。

五、Oxy210作用依赖Arf6通路

Arf6沉默模拟了Oxy210的脂筏减少和抗炎效果，而Oxy210处理降低Arf6总量及其活化形式（磷酸化Arf6）。此外，Oxy210下调脂筏中磷脂酰肌醇二磷酸（PIP₂）水平，后者是Arf6下游关键脂质信号分子。

研究结论表明，Oxy210通过抑制Arf6活性和减少PIP₂生成，破坏脂筏再循环检查点，从而降低脂筏稳定性及其介导的炎症信号。同时，Arf6抑制也减少ABCA1内化，增加其膜定位，促进胆固醇外流。这一双效机制为理解脂筏动态调控提供了新视角，并为治疗炎症、感染和神经退行性疾病提供了以Arf6为靶点的治疗策略。该研究不仅深化了对氧固醇类化合物功能多样性的认识，也拓展了脂筏靶向治疗的理论与实践基础。