调节性T细胞浸润预示鸡盲肠扁桃体中传染性支气管炎病毒持续性感染的早期免疫事件

本刊推荐：为解决传染性支气管炎病毒(IBV)在盲肠扁桃体(CT)中长期存留的机制问题，研究人员开展了IBV不同基因型感染早期免疫应答特征的比较研究，发现DMV/1639基因型在CT中呈现更高病毒载量和Treg细胞浸润，揭示了免疫抑制微环境促进病毒持久化的新机制，对控制家禽病毒传播具有重要意义。

　　

传染性支气管炎病毒（IBV）作为禽冠状病毒的代表，自1931年首次报道以来，持续对全球养禽业造成重大经济损失。这种正链RNA病毒不仅引起呼吸道疾病，还能感染消化、生殖、泌尿等多个系统，其中盲肠扁桃体（CT）被确认为病毒持久存留的关键部位。特别值得注意的是，Delmarva（DMV）/1639基因型IBV能在CT中持续存在长达16周，并伴随持续泄殖腔排毒，这种持续性感染现象构成了病毒传播和进化的重要风险。然而，导致IBV在CT组织中长期存留的早期免疫机制至今尚未明确。

以往研究主要集中在病毒本身的特征和病理变化，而对宿主免疫应答特别是调节性T细胞（Treg）在IBV持续感染中的作用了解甚少。禽类Treg细胞的特征与哺乳动物不同，它们不表达FOXP3标记，而是通过CD4⁺CD25⁺表型和抑制性细胞因子IL-10、TGF-β发挥作用。在其它病毒感染模型中，Treg细胞的早期浸润与病毒清除延迟和免疫耐受有关，但在IBV感染背景下，这一机制尚未得到系统研究。

为了解决这一知识空白，由Mohamed Faizal Abdul-Careem领导的研究团队开展了一项深入的研究，比较了三种不同IBV基因型（DMV/1639、Mass和CA 1737/04）在感染早期引起的免疫应答差异。该研究近期发表在《Virology》期刊上，为理解IBV持久化机制提供了新的视角。

研究采用了多种关键技术方法：使用特异性病原免费（SPF）白来航鸡建立感染模型，通过qPCR定量检测病毒基因组载量，采用免疫组织化学（IHC）定位病毒核蛋白和免疫细胞，利用免疫荧光双标技术检测Treg细胞（CD4⁺CD25⁺），并通过qPCR分析细胞因子（IFN-γ、IL-10、TGF-β）mRNA表达水平。组织病理学分析评估了CT和脾脏的病变特征。

3.1. 临床表现

所有感染组在3天感染后（dpi）开始出现呼吸道临床症状，DMV/1639 IBV感染组在5-8 dpi期间临床表现评分显著高于其他组。DMV/1639感染组在7 dpi达到峰值，而其他两组在8 dpi达到峰值，表明DMV/1639毒株具有更强的致病性。

3.2. 拭子和组织样本中的IBV基因组载量

DMV/1639感染组在口咽（OP）和泄殖腔（CL）拭子中的病毒载量始终高于其他组。在组织分布方面，CT中的病毒载量显著高于脾脏在所有时间点。DMV/1639在CT中的载量最高，且在14 dpi仍维持高水平，提示其具有更强的组织趋向性和持久化能力。

3.3. 组织病理学发现

CT主要病变包括上皮间淋巴细胞浸润、上皮下层异嗜细胞浸润和淋巴细胞坏死/凋亡，而脾脏仅表现为浆细胞增多症。DMV/1639感染组在CT中病变最为严重，且持续时间最长。

3.4. 免疫组化检测组织中的IBV核蛋白

免疫组化结果显示CT中有强烈的病毒核蛋白阳性反应，而脾脏中几乎检测不到。DMV/1639感染组的CT在所有时间点均显示强阳性，进一步证实了CT作为病毒主要复制场所的地位。

3.5. Treg细胞群体

通过免疫荧光检测发现，CT中的Treg细胞比例显著高于脾脏。值得注意的是，DMV/1639感染组在10和14 dpi的CT中Treg细胞数量显著增加，这与病毒持久化现象密切相关。

3.6. 宿主应答

3.6.1. 细胞因子分析

IFN-γ表达在感染组和对照组间无显著差异。IL-10和TGF-β表达在CT中显著高于脾脏，DMV/1639感染组表现出最高的TGF-β水平，创造了免疫抑制微环境。

3.6.2. Bu1⁺ B细胞和CD8⁺ T细胞的招募

CT中B细胞和CD8⁺ T细胞的招募显著低于脾脏，效应免疫细胞的缺乏进一步削弱了病毒清除能力。

研究结论表明，CT作为IBV持久感染的主要场所，其独特的免疫微环境特征包括：延迟的Treg细胞浸润、减少的效应细胞招募以及抑制性细胞因子环境，这些因素共同促进了病毒的长期存留。与其他基因型相比，DMV/1639表现出最强的持久化潜力，这与后期更高的Treg细胞水平和病毒载量相关。

讨论部分强调，尽管预期Treg细胞的早期诱导会削弱抗病毒反应，但本研究发现在IBV感染中，Treg细胞在后期（10-14 dpi）才显著增加，这种延迟的免疫抑制反应可能为病毒建立了生存利基。CT中高水平的IL-10和TGF-β以及低水平的效应免疫细胞共同创建了一个免疫特权环境，允许病毒逃避宿主免疫监视。

这项研究的重要意义在于首次系统地揭示了IBV在盲肠扁桃体持久存在的免疫机制，为开发新的防控策略提供了理论基础。通过靶向调节性T细胞或相关免疫抑制通路，可能能够干扰病毒的持久化过程，从而减少病毒传播和进化风险。研究结果对家禽健康管理和疫苗设计具有重要指导价值，为控制传染性支气管炎提供了新的干预思路。