基于线粒体DNA多重PCR技术的牛肉松物种鉴定与标签合规性评估研究

本研究采用常规多重PCR（mPCR）和双联PCR技术，靶向线粒体DNA（mtDNA）的12S rRNA和细胞色素b（Cyt b）基因片段，对中小微企业（MSMEs）生产的牛肉松进行物种鉴定与标签合规性分析。结果显示27.27%样本符合标签规范，22.73%样本检出未标注的鸡肉DNA，证实该方法可有效监测肉类掺假并保障清真食品（halal）认证体系完整性。

　　

¹样本采集

采用目的性抽样技术从杂货店和超市随机采集44个由中小微企业生产的商业牛肉松样本。每个样本置于自封塑料袋中，标注特定编码后于-21°C冷冻保存直至分析。不同牛肉松的外观呈现如图1所示。

²牛肉松包装标签评估

根据印度尼西亚共和国第18号法律（2012年食品法）和第31号法规（2018年加工食品标签标准），对包装牛肉松标签进行严格评估。评估参数包括：产品名称、成分列表、制造商地址、清真认证标识、有效期和分销许可证编号。采用描述性统计方法分析标签合规性数据。

³DNA提取与PCR扩增

通过苯酚-氯仿法从牛肉松样本中提取基因组DNA。使用NanoDrop?分光光度计测定DNA浓度和纯度，A_260/280比值介于1.8-2.0视为合格。采用针对线粒体DNA12S rRNA和Cyt b基因的特异性引物进行常规多重PCR（mPCR）和双联PCR扩增，检测牛、狗、猪、鼠和鸡的物种特异性片段。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳分离，溴化乙锭染色后在紫外光下观察条带。

⁴牛肉松包装信息验证

如表2所示，包装标签评估表明大多数样本缺少关键信息：制造商地址（缺失率79.55%）、有效期（63.64%）、清真标签（31.82%未认证）和分销许可证编号（81.82%）。清真标签真实性核查显示仅31.82%样本具有官方认证，36.36%为未认证标签，31.82%完全缺失。值得注意的是，13.64%样本虽标注"100%纯牛肉"但被检出含有其他物种DNA。

⁵物种鉴定电泳分析

如图2所示，所有样本均检出牛源性DNA（12S rRNA 456 bp条带；Cyt b 271 bp条带）。多重PCR检测未发现狗（216 bp）、猪（219 bp）或鼠（105 bp）的DNA条带。然而，针对Cyt b基因的扩增显示22.73%（10/44）样本出现227 bp的鸡源性DNA条带（图3），且这些样本的包装标签均未标注鸡肉成分。

结论

中小微企业加工肉制品的物种溯源认证对确保标签合规性和保护消费者免受误导至关重要。本研究通过靶向mtDNA 12S rRNA和Cyt b基因的常规mPCR和双联PCR技术，成功检测出10个牛肉松样本含有未标注的鸡肉DNA，表明存在标签欺诈行为。建议加强对中小微企业加工肉制品的监管，并推广DNA检测技术作为常规监测工具。