猕猴桃采后腐败菌的分离鉴定及三种芽孢杆菌的协同拮抗活性研究

本研究首次系统鉴定了引起猕猴桃采后腐烂的7种真菌病原体（包括镰刀菌、间座壳菌等），并通过平板对峙和果实接种实验证明短小芽孢杆菌YB-2与巨大芽孢杆菌YB-1的组合对多种病原菌抑制率超60%，为开发基于芽孢杆菌（Bacillus）的绿色生物防治剂提供了科学依据。

　　

Highlight

植物材料

成熟‘红阳’猕猴桃（Actinidia chinensiscv. Hongyang）采自中国四川省蒲江县果园（北纬30°，东经103°）。

拮抗菌株

巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium，菌株代号YB-1）保藏于中国普通微生物菌种保藏中心（CGMCC）；短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus，YB-2）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis，YB-3）来源于上海生物资源保藏中心。

试剂与培养基

壳聚糖（脱乙酰度90%，粘度50 CPS）用1%乙酸溶解配置成2%（w/v）溶液。所有培养基均按标准配方制备并高压灭菌。

腐烂真菌的形态特征

室温贮藏的猕猴桃约7–9天后开始腐烂，果皮出现皱缩、褐变斑块，20天后病斑软化凹陷，局部膨大并产生白色菌丝或粉红色孢子堆（图1）。病原菌在PDA培养基上呈现多样形态：菌落呈绒毛状、絮状或毡状，颜色包括白色、灰白色、浅黄色或橙红色，孢子形态各异，具隔膜或镰刀状结构。

分子鉴定与系统发育分析

基于ITS序列构建的系统发育树（图2）显示7株病原菌分别为：Fusarium verticillioidesZ-1、Diaporthesp. (Z-2, Z-3, Z-11)、Botryosphaeria dothideaZ-4、Diaporthe vacciniiZ-6和Colletotrichum fructicolaZ-7。

拮抗菌的抑菌效果

平板对峙实验表明：YB-1菌悬液对Z-1抑制率最高（69.8%）；YB-1/YB-2组合对Z-2、Z-3、Z-4和Z-7的抑制率分别为63.8%、67.3%、60.4%和72.7%；YB-1/YB-2/YB-3三联组合对Z-11抑制效果最佳（73.0%）；YB-2/YB-3对Z-6抑制率达70.2%。壳聚糖单独使用抑菌率均低于50%，但与芽孢杆菌联用后显著提升抑菌效果（p< 0.05）。

果实接种实验

所有处理均显著降低果实腐烂率（p< 0.05），其中YB-1/YB-2组合防治效果最高（48%），壳聚糖与菌株联用组腐烂率进一步降低至35%以下。

结论

本研究首次系统鉴定了引起猕猴桃采后腐烂的7种病原真菌，并证明巨大芽孢杆菌YB-1与短小芽孢杆菌YB-2的组合对多数病原菌表现出最强拮抗活性，为开发基于芽孢杆菌的绿色防控策略提供了理论基础。