鉴定传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白新型B细胞表位及其在诊断应用中的意义

本研究成功制备了针对传染性支气管炎病毒（IBV）核衣壳蛋白（N蛋白）的单克隆抗体（mAbs）6D1与6D2，并鉴定出新型线性B细胞表位218KADEMAHRR226。该表位高度保守，可被多种基因型IBV识别，为开发高特异性诊断工具、表位疫苗及研究免疫机制提供了关键基础。

　　

Highlights

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  成功制备两种抗IBV N蛋白单克隆抗体（mAbs）6D1与6D2。

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  抗体亚型为IgG1（κ轻链），EC₅₀值分别为7.385 ng/mL与9.994 ng/mL。

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  表位定位为新型线性B细胞表位²¹⁸KADEMAHRR²²⁶。

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  该表位在不同基因型间高度保守，具有广谱识别潜力。

Introduction

禽传染性支气管炎（IB）由传染性支气管炎病毒（IBV）引起，是一种急性呼吸道疾病，其特征包括气管啰音、打喷嚏和咳嗽。IBV具有高度传染性，可导致雏鸡高死亡率、肉鸡生长速率下降以及蛋鸡产蛋量与品质降低，造成全球范围内重大经济损失。

IBV属于γ冠状病毒科，基因组为27 kb的单链正义RNA，包含5′帽结构与3′多聚腺苷酸尾。其基因组结构为5′UTR-1ab-S-3a/3b/E-M-5a/5b-N-3′UTR，编码四种结构蛋白：刺突蛋白（S）、囊膜蛋白（E）、膜蛋白（M）与核衣壳蛋白（N），以及15种由ORF1a与ORF1ab多聚蛋白编码的非结构蛋白。

N蛋白在病毒进化中高度保守，并在病毒感染过程中大量表达，其产量约为S蛋白的6倍。与易突变的S蛋白不同，N蛋白在不同基因型间保守性强，可诱发特异性抗体与细胞毒性T细胞反应，因此成为诊断靶点的重要候选。

B细胞表位的鉴定对于表位疫苗、诊断工具与治疗性抗体的开发至关重要。尽管抗原表面存在多个潜在表位，仅符合B细胞表位结构与位置要求的区域能被有效识别。近期研究聚焦于保守N蛋白中的B细胞表位，已报道包括“FGPRTK”（242–247）、“IPLNRGRGGRST”（158–169）与“DSPAPIIKLGG”（11–21）等线性表位。

本研究通过原核系统表达IBV N蛋白，制备了两种特异性mAbs（6D1与6D2），证实其与重组及天然IBV N蛋白的高亲和力结合，并鉴定出新型表位²¹⁸KADEMAHRR²²⁶。该表位在多种基因型中高度保守，为IBV的临床检测、流行病学研究与疫苗设计提供了新策略。