苏丹、尼泊尔与柬埔寨发热患者中伯纳特立克次体与巴尔通体血清学阳性率分析及其与热带病和自身免疫病的交叉反应研究

本文探讨了中低收入国家（LMICs）发热患者中伯纳特立克次体（Coxiella burnetii）和巴尔通体（Bartonella）血清学阳性率，通过间接免疫荧光抗体试验（IFA）发现其与内脏利什曼病、疟疾、钩端螺旋体病、布鲁菌病、恙虫病和系统性红斑狼疮（SLE）存在显著关联，提示血清学交叉反应可能影响诊断准确性，呼吁在资源有限地区优化病原体检测策略。

　　

研究设计与人群

本研究基于NIDIAG发热研究项目保存的血清样本，旨在评估苏丹、尼泊尔和柬埔寨三国发热患者中伯纳特立克次体（Coxiella burnetii）和巴尔通体（Bartonella）物种的血清学阳性率。所有样本来自2013年1月至2014年10月期间收集的持续发热超过7天的患者，且这些患者已通过原NIDIAG研究 protocol 被确诊为某种感染性或炎症性疾病。由于刚果民主共和国的血清量不足，本研究仅纳入来自苏丹（560例）、尼泊尔（432例）和柬埔寨（321例）的1,313例样本。

参考组的构建是本研究的核心设计之一，该组包括67例患者，诊断为常见细胞外细菌感染（如细菌性脑膜炎、皮肤软组织感染、细菌性胃肠炎等），这些疾病通常不与伯纳特立克次体或巴尔通体感染相关，且已知不会引起血清学交叉反应。参考组用于代表背景血清阳性率，以区分既往暴露与当前发热事件的关联。

间接免疫荧光抗体试验方法

采用内部建立的间接免疫荧光抗体试验（IFA）检测血清样本对伯纳特立克次体（针对I相和II相脂多糖抗原）和巴尔通体（针对Bartonella quintana和Bartonella henselae抗原）的抗体反应。血清稀释起始滴度为1:50和1:100，滴度≥1:100被视为阳性，并进行进一步倍比稀释。滴度为1:50但1:100阴性者被判定为“不确定”，不进行后续稀释。对于伯纳特立克次体，IFA筛查使用I相和II相抗原混合进行，阳性样本再分别检测抗I相和II相IgG。对于巴尔通体，筛查使用B. henselae和B. quintana抗原，对任一物种滴度≥1:100即判定为巴尔通体阳性。

分析与结果解读

统计分析使用R软件（4.2.2版），采用卡方检验和Fisher精确检验比较分类变量。计算Kappa系数、阳性一致性百分比和相对风险比（RR）等指标，以评估伯纳特立克次体与巴尔通体IFA之间的一致性以及疾病组与参考组之间的血清阳性率差异。统计显著性设定为P<0.05。

总体血清阳性率与国家特异性阳性率

在1,313例受试者中，57例（4.3%）伯纳特立克次体IFA阳性，182例（13.9%）不确定，1,074例（81.8%）阴性。三国间伯纳特立克次体阳性率无显著差异（苏丹5.2%、尼泊尔3.7%、柬埔寨3.7%，P=0.44）。巴尔通体阳性率为4.6%（60例），不确定占5.6%（73例），阴性占89.9%（1,181例）。巴尔通体阳性率在三国间差异显著（尼泊尔11.3%、苏丹1.6%、柬埔寨0.6%，P<0.001），尼泊尔阳性率最高。

伯纳特立克次体与巴尔通体IFA的一致性

两种IFA结果间存在78.0%的一致性（Kappa=0.14，95%CI：0.08–0.19），阳性一致性为75.4%。44例患者同时呈伯纳特立克次体和巴尔通体阳性，提示可能存在血清学交叉反应。

各疾病组血清阳性率分析

内脏利什曼病（VL）：109例VL患者中，6例（5.5%）伯纳特立克次体阳性，10例（9.2%）巴尔通体阳性。与参考组相比，VL组巴尔通体阳性率有升高趋势（RR=6.15，P=0.051）。

结核病（TB）：93例TB患者中，伯纳特立克次体和巴尔通体阳性率均较低，与参考组无显著差异。

疟疾：46例恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）感染中，伯纳特立克次体阳性率4.3%，不确定率高达37.0%，与参考组相比差异显著（P=0.004当不确定视为阳性时）。巴尔通体阳性率无显著升高。

钩端螺旋体病：52例患者中，伯纳特立克次体阳性率9.6%，与参考组相比RR=3.56（P=0.12）。

布鲁菌病：18例患者中，伯纳特立克次体阳性率11.1%，巴尔通体阳性率5.5%，均高于参考组但未达统计显著性。

恙虫病：11例患者中，63.6%巴尔通体阳性（均为低滴度1:100），与参考组相比显著升高（RR=42.63，P<0.001）。

系统性红斑狼疮（SLE）：7例SLE患者中，伯纳特立克次体阳性率42.9%（RR=14.36，P=0.005），巴尔通体阳性率28.7%（RR=19.14，P=0.017），均显著高于参考组。

高滴度阳性病例分析

5例患者呈现高滴度阳性（IgG≥1:800），符合感染性心内膜炎诊断标准。包括2例VL、1例结核、1例钩端螺旋体病和1例布鲁菌病患者，但无一例临床检查发现心脏杂音或心内膜炎证据。

讨论与意义

本研究首次系统评估了LMICs发热患者中伯纳特立克次体和巴尔通体的血清学阳性率，发现其与多种热带病和自身免疫病存在显著关联。巴尔通体阳性率在尼泊尔显著偏高，可能与当地B. quintana在虱子中的流行有关。高比例的双重阳性及与SLE、恙虫病等的关联强烈提示IFA在这些地区存在广泛的血清学交叉反应，可能导致误诊。

研究局限性包括无法通过交叉吸附试验或免疫印迹法区分交叉反应与真实感染，且参考组样本量较小。未来需结合分子检测和前瞻性设计进一步验证血清学在LMICs的诊断价值。本研究强调在资源有限地区开发特异性高、成本低的诊断工具的必要性，以准确识别伯纳特立克次体、巴尔通体及其他文化阴性细菌病原体。