基于UPLC-Q-TOF/MS的非靶向代谢组学研究揭示獐牙菜苦苷及其新型含氮代谢物(R)-龙胆二醇和(S)-龙胆二醇治疗大鼠非酒精性脂肪肝的作用机制

本研究通过非靶向代谢组学技术系统阐明了獐牙菜苦苷(STM)及其体内转化产物(R)-龙胆二醇(RG)和(S)-龙胆二醇(SG)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)的治疗机制。研究发现RG能显著改善高脂饮食诱导的代谢紊乱，调节21种生物标志物（如硬脂酸、棕榈酸等），通过调控牛磺酸代谢、花生四烯酸代谢、三羧酸循环(TCA cycle)等关键通路发挥肝保护作用，而SG无明显疗效。该研究首次验证了立体异构体代谢物的差异化生物活性，为中药獐牙菜属植物的药效物质基础研究提供了重要依据。

　　

引言

非酒精性脂肪肝病（NAFLD）已成为全球主要的肝脏疾病，与全身性代谢紊乱密切相关。该疾病表现为肝细胞损伤、氧化应激和肝纤维化，可能发展为非酒精性脂肪性肝炎（NASH）、肝硬化甚至肝细胞癌（HCC）。虽然NAFLD普遍存在，但目前尚未达成共识，且缺乏专门的治疗药物。近年来，中药提取物在治疗NAFLD方面显示出优异的治疗效果，表明中药单体可能具有治疗NAFLD的潜力且副作用较少。

獐牙菜属植物属于龙胆科，广泛用于治疗消化功能障碍、肝胆和代谢紊乱。獐牙菜苦苷（STM）是獐牙菜中的活性成分，是一种环烯醚萜苷类化合物，具有抗肝损伤、抗乙肝病毒、降血脂和降血糖等多种药理作用。最近研究表明，STM可通过调节脂质代谢和炎症反应来减少肝脏氧化应激和脂质积累，从而治疗NAFLD。在先前的研究中，STM在体内被β-葡萄糖苷酶水解为不稳定的苷元，然后在肠道菌群的作用下转化为龙胆碱，最终通过LC-MS在大鼠体内检测到新型含氮代谢物(R)-龙胆二醇（RG）和(S)-龙胆二醇（SG），并首次从STM合成了这些化合物。这一过程证明了STM在体内转化为新型含氮代谢物龙胆二醇的过程。STM、RG和SG可能是獐牙菜治疗NAFLD的主要活性成分。然而，STM及其含氮代谢物影响NAFLD的机制尚未完全研究，需要进行体内研究。

代谢组学作为一种技术，利用现代分析技术准确鉴定和测定代谢物，探索与不同疾病相关的生物标志物和代谢途径。代谢组学可用于将中药特征与医学研究相结合，采用系统动态的方法研究疾病发展，从而阐明中药的治疗机制和物质基础，是中药现代化的有价值工具。

在本研究中，建立了大鼠NAFLD模型，然后基于血清代谢组学使用UPLC-Q-TOF/MS研究了STM及其含氮代谢物对NAFLD的潜在调节作用，并揭示了与NAFLD相关的潜在代谢途径。通过这种方式，确定了STM的潜在活性代谢物。

方法与材料

药物与试剂

大鼠正常饮食购自长生生物技术公司（辽宁，中国）。大鼠高脂饮食自制（成分：77.5%正常饮食，10%蛋黄粉，10%猪油，2%胆固醇，0.5%胆盐）。水飞蓟宾购自天士力盛特制药公司（天津，中国）。乙腈（UPLC级）和甲酸（UPLC级）购自默克集团（达姆施塔特，德国）。獐牙菜苦苷（STM，化学式C₁₆H₂₂O₁₀，分子量374.43，Cat. CAS 17388-39-5）纯度为98.04%，购自生物活性分子公司。RG和SG按先前描述合成。总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所（南京，中国）。使用Milli-Q超纯水系统（美国Billerica）纯化蒸馏水。氨、盐酸、氯仿、石油苯、亚硫酸钠、乙酸乙酯和不对称二羟基化（AD）混合物购自Sigma Chemical（美国密苏里州圣路易斯）。

动物实验与样本采集

成年雄性Sprague-Dawley大鼠体重200±20克，购自黑龙江中医药大学动物育种中心（黑龙江，中国）[许可证号SCXK（黑）2018-003]。动物研究经黑龙江中医药大学伦理委员会批准[决议号2023012702]，并遵循赫尔辛基宣言。所有获得的大鼠在标准实验室条件下（23°C–25°C，12小时/12小时光/暗循环，55%±2%湿度）适应1周，自由饮水和进食。所有动物随机分为八组：对照组、模型组、阳性组、STM组、RG高剂量组（RGH）、RG中剂量组（RGM）、RG低剂量组（RGL）和SG组（每组n=10）。

对照组给予正常饮食，其他七组给予高脂饮食12周。造模后，STM组口服STM剂量25毫克/千克，RGH组静脉注射6毫克/千克RG（生理盐水悬浮液）。RGM组静脉注射3毫克/千克RG（生理盐水悬浮液），RGL组静脉注射1.5毫克/千克RG（生理盐水悬浮液），SG组静脉注射SG（6毫克/千克，生理盐水悬浮）。阳性对照组灌胃水飞蓟宾（37.8毫克/千克）。模型组和对照组均静脉注射0.9%生理盐水（10毫升/千克）。所有动物每天治疗一次，持续12周，之后大鼠禁食24小时，从肝门静脉采集血液。血样离心（3500转/分钟，4°C，15分钟）分离血清，保存于-80°C直至进行生化和代谢组学分析。从大鼠获取的肝脏样本也立即保存于-80°C备用。

组织病理学评估

取部分左叶肝组织浸泡于10%缓冲福尔马林溶液中48小时，然后脱石蜡包埋。石蜡包埋样本进行苏木精-伊红（HE）染色后，在光镜下观察各组肝细胞的变化。添加油红O溶液染色冷冻肝组织，然后在光镜下观察。评分由不知情的病理学家根据NAFLD活动评分（NAS）进行定义。NAS是脂肪变性（0-3）、肝细胞气球样变（0-2）和小叶炎症（0-3）的单独评分之和。评分大于5与NASH诊断相关，评分小于3诊断为非NASH。

生化指标测定

使用相应试剂盒和100微升血清样本测定TC、TG、ALT、AST、LDL-C和HDL-C，严格遵循试剂盒说明。将肝脏样本按9倍体积比例加入生理盐水，在冰水浴中匀浆。离心10分钟（13,000转/分钟，4°C）后，收集上清液，使用相应试剂盒测量MDA、SOD和GSH-PX水平。

血清样本制备

将冷冻血清样本在4°C解冻。取100微升血清用分析级甲醇（100%，4°C）稀释至总体积400微升，涡旋混合1分钟。混合物随后离心（13,000转/分钟，4°C，20分钟），获得的上清液通过0.22微米微滤膜过滤，加入进样瓶进行UPLC-MS分析。所有样本等体积混合（10微升）作为质量控制样本。

UPLC-Q-TOF/MS分析

使用Thermo Scientific?超高效液相色谱（UPLC）系统（Thermo，美国加州圣何塞）完成分离。色谱在Waters ACQUITY UPLC CSH C₁₈色谱柱（1.7微米，2.1毫米×100毫米；Waters，美国米尔福德）上进行，柱温35°C，样品管理器温度4°C，进样体积3微升，流速0.3毫升/分钟。流动相包含溶剂A（0.1%甲酸-水）和溶剂B（0.1%甲酸-乙腈），洗脱条件如下：0-4分钟，5%-40% B；4-7分钟，40%-55% B；7-11分钟，55%-65% B；11-15分钟，65%-100% B；15-15.1分钟，100%-5% B；15.1-16分钟，5%-5% B。UPLC系统连接至质谱仪。

质谱使用Q Exactive Orbitrap质谱仪（Thermo，美国加州圣何塞）进行。电喷雾电离（ESI）源条件如下：扫描质量范围100-1,500 Da；鞘气、辅助气和扫气流量分别为50、15和1 Arb。正离子和负离子模式下的毛细管电压分别为500 V和3,000 V，毛细管温度350°C。为确保检测系统稳定性和检测重现性，还在每10个样本间隔顺序添加QC。

多元数据分析

使用Compound Discoverer 3.1软件（Thermo Fisher，美国）提取和过滤LC-MS数据，匹配和归一化峰，从而获得每个样本的化合物分子量、峰面积和保留时间。将ESI^-和ESI⁺模式的归一化数据集合并并输入SIMCA 13.0软件（MKS Umetrics，瑞典马尔默）进行各种多元数据分析，即主成分分析（PCA）、偏最小二乘判别分析（PLS-DA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）。因此，VIP>1的变量被识别为潜在内源性代谢物的显著变量。结果以均值±标准差表示，并使用SPSS统计软件25.0（IBM SPSS，美国芝加哥）进行分析。组内差异使用单因素方差分析和Tukey检验进行分析。P<0.05表示统计学显著性。最后，结合VIP和t检验结果（P<0.05）进行生物标志物识别。

生物标志物识别与通路分析

将分子离子和预测分子式与ChemSpider（https://www.chemspider.com/）和mzCloud（https://www.mzcloud.org/）数据库中的进行比较，进行初步代谢物识别。下一步，使用Thermo的Xcalibur（版本4.3）软件将内源性化合物的分子量、MS/MS离子和保留时间与标准和文献报告进行比较。在HMDB（https://hmdb.ca/）和KEGG（https://www.kegg.jp/kegg/kegg1.html）数据库中识别代谢物结构和阐明代谢物生物学意义，以绘制综合代谢网络。最后，将识别的生物标志物导入MetaboAnalyst 5.0（https://www.metaboanalyst.ca/）以揭示富集通路。

结果

对体重和肝脏指数的影响

三种中药单体提取物连续给予大鼠12周，大鼠保持健康、活跃，研究期间无死亡。如图3A所示，与对照组相比，NAFLD模型组的体重明显增加（P<0.01），而STM、RGH、RGM和RGL治疗后体重逐渐下降。RGH组表现出最显著的改善，而SG组未见显著下降。

计算不同组的大鼠肝脏指数。如图3B所示，与对照组相比，NAFLD模型组的肝脏指数显著升高（P<0.01），表明高脂饮食导致大鼠12周后肝脏肿大。给予STM、RGH、RGM或RGL后，大鼠肝脏指数显著下降（P<0.01）。RGH组呈现最显著的改善，而SG组未见显著下降。

组织病理学观察

组织病理学结果有助于可视化三种中药单体对高脂饮食诱导的NAFLD的治疗效果。如图3C所示，对照组大鼠肝小叶正常，肝窦清晰，核正常。无肝脂肪变性或炎症细胞浸润。模型组大鼠肝小叶受损，肝窦扩张，肝脂肪变性，核缺失，这是肝损伤的典型表现。此外，炎症细胞浸润明显。这些发现与NAFLD的组织病理学观察一致，表明本研究成功建立了高脂饮食诱导的NAFLD模型。STM、RGH、RGM或RGL治疗后，炎症细胞浸润和肝细胞脂滴形成改善。不同治疗组表现出不同程度的改善，每组均显示细胞坏死率降低和肝脂肪变性减轻。值得注意的是，RGH组呈现最显著的改善效果。SG组未见改善。NAS评分结果如表1所示。如图3D所示，模型组的油红O染色面积百分比明显大于对照组，而STM、RGH、RGM和RGL组的相应百分比明显低于模型组。上述发现表明NAFLD模型成功建立，且STM、RGH、RGM和RGL对NAFLD有效。RGH组显示最显著的改善，而SG组未见显著改善。

对生化指标的影响

如图4A-I所示，模型组的水平与对照组显著不同。具体而言，MDA、AST、ALT、TC、TG和LDL-C的水平显著增加（P<0.01），而模型组的SOD、GSH-PX和HDL-C水平明显下降（P<0.01）。给予STM、RGH、RGM和RGL后，指标水平出现不同程度的改善。与其他组相比，RG组表现出更大的改善，而SG组未见改善。

代谢组学分析与生物标志物识别

如图4J,K所示，使用PLS-DA比较六组大鼠的代谢谱。对照组和模型组的样本聚集在两侧。给药后，STM、RGH、RGM和RGL组与模型组分离，并接近对照组。值得注意的是，RGH组最接近对照组，但远离模型组。SG组更接近模型组，但远离对照组。

如图4L-O所示，对照组和模型组以及RG组和模型组明显分离，进一步说明了不同组之间的显著差异。OPLS-DA模型的R²和Q²值对于对照组相对于模型组分别为0.996和0.991。对于OPLS-DA模型，RGH相对于模型组的R²和Q²值分别为0.994和0.987，RGM相对于模型组分别为0.976和0.944，RGL相对于模型组分别为0.934和0.916。相应的S-PLOT图如图4L-O所示。对每个数据模型进行了200次重复置换测试，置换后获得的Q²和R²值明显低于初始值，表明模型稳定。由于RGH组最具代表性，仅选择RGH组（RG）进行后续代谢组学分析。

代谢通路分析

共检测到21种差异丰富的代谢物。生物标志物信息和水平如表2所示。图5A,B显示了每组21种差异代谢物水平的变化以及热图。与对照组相比，12-HETE和lysoPC（15:0）等脂质代谢物水平显著增加，而二十二碳六烯酸、硬脂酸、棕榈酸、PC（36:3）、PC（16:0/18:1(11Z)）、PC（18:0/20:3(5Z,8Z,11Z)）和花生四烯酸代谢物水平显著降低。此外，花生四烯酸代谢物显著下调；L-色氨酸、天冬氨酸等氨基酸代谢物水平显著上调，而L-精氨酸、L-胱氨酸和牛磺酸显著降低；胆汁酸代谢物牛磺胆酸和甘胆酸水平显著增加；D-葡萄糖和L-肉碱水平与对照组相比显著降低。STM治疗后调节了17种差异代谢物。RG治疗后调节了21种差异代谢物。SG对异常代谢物的治疗效果收敛于模型。

每种代谢途径所涉及的代谢物及其详细信息列于表3。图5C显示了与RG治疗NAFLD机制相关的14条代谢途径。根据影响>0.1的标准，花生四烯酸代谢、色氨酸代谢、TCA循环、牛磺酸和亚牛磺酸代谢以及甘油磷脂代谢被确定为该机制的显著相关代谢途径，这些途径对NAFLD重要。从RG组和模型组获得的21种差异丰富代谢物的代谢网络图如图6所示。

讨论

NAFLD是一种代谢疾病， disrupts身体脂肪代谢，增加活性氧的产生，引起氧化应激，并引发炎症反应。近年来，中药研究从临床疗效评估转向中药活性成分研究，并在几种代谢疾病方面取得了显著进展。几项实验研究证明了STM的肝保护和抗炎治疗作用。然而，其确切机制至今尚不清楚。我们研究小组先前的研究表明，STM在体内转化为含氮代谢物，这可能是真正的活性肝保护物质。

在本研究中，通过从STM合成新型含氮代谢物RG和SG，分析了三种中药单体对NAFLD大鼠模型的影响。组织学结果显示，喂食高脂饮食12周的大鼠出现大量脂肪空泡和炎症浸润，具有典型的肝脂肪变性。此外，观察到模型大鼠的肝脏重量、体重和肝脏指数线性增加，而血清生化和抗氧化指标处于显著异常水平。上述发现表明本研究成功建立了NAFLD大鼠模型。RG治疗12周后，肝脏指数显著下降，肝脂肪变性显著减少，NAFLD症状显著改善。治疗12周后，异常代谢物水平有效逆转。SG组的差异丰富代谢物水平更接近模型组，表明SG对NAFLD largely无效。

牛磺酸具有多种生理作用，包括抑制脂肪酸介导的脂质积累、减少活性氧生成以及改善脂肪酸诱导的线粒体内膜损伤。据报道，牛磺酸对肝脏脂肪积累、心血管疾病和糖尿病具有治疗潜力。作为限速酶，半胱氨酸双加氧酶（CDO）调节牛磺酸合成，而谷氨酸-半胱氨酸连接酶（GCL）可以调节半胱氨酸向谷胱甘肽的代谢。在本研究中，与对照组相比，模型组的牛磺酸和亚牛磺酸代谢途径被 disrupt。半胱氨酸和牛磺酸水平降低，而牛磺胆酸水平升高（图7）。据此推断，CDO和GCL活性的抑制抑制了牛磺酸和谷胱甘肽合成，从而加剧了肝氧化损伤并影响了肝脂质代谢。三组治疗后，CDO和GCL活性可能增加，牛磺酸和半胱氨酸水平升高。这些结果表明，STM和RG通过调节牛磺酸和亚牛磺酸代谢途径提高抗氧化能力，从而有效预防脂质过氧化引起的生物膜损伤，最终治疗慢性肝损伤。牛磺胆酸是胆汁酸与牛磺酸结合的常见初级胆汁酸。体内牛磺胆酸浓度升高可引起一定程度的炎症反应。本研究中NAFLD模型牛磺胆酸水平升高。然而，治疗后观察到显著重新调整。

花生四烯酸通过三种重要代谢途径调节肝细胞线粒体中的氧化应激并加剧肝细胞损伤：脂氧合酶（LOX）、环加氧酶（COX）和细胞色素P450（P450）。花生四烯酸的重要代谢物是12-HETE，它促进中性粒细胞诱导的炎症反应。在本研究中，模型组花生四烯酸含量下降，而12-HETE含量相对于对照组增加，表明NAFLD大鼠花生四烯酸代谢功能障碍。治疗12周后，炎症相关代谢物水平出现显著逆转。总的来说，这些结果表明STM和RG改善了与炎症相关的代谢物水平，并减少了NAFLD患者的肝脂肪变性。根据结果推测，RG和STM对花生四烯酸代谢相关酶和代谢物抑制剂具有促进作用。本研究的发现将为使用中药单体治疗NAFLD提供理论指导。

柠檬酸、富马酸和酮戊二酸是TCA循环的关键中间体，也在葡萄糖有氧氧化、氨基酸代谢和脂质氧化中发挥重要作用。线粒体内的柠檬酸合酶（CSY）负责催化乙酰辅酶A和草酰乙酸缩合为柠檬酰CoA，然后迅速水解为柠檬酸。异柠檬酸在异柠檬酸脱氢酶（IDH）的作用下进一步转化为酮戊二酸。富马酸是L-苹果酸的前体，由琥珀酸在琥珀酸脱氢酶（SDH）的作用下氧化产生。在本研究中，与对照组相比，模型组的柠檬酸、酮戊二酸和富马酸含量明显下降，表明高脂饮食诱导的NAFLD大鼠TCA循环代谢失调。这与高脂饮食喂养后CSY、IDH和SDH的抑制有关，导致柠檬酸、酮戊二酸和富马酸合成减少。STM和RG给药后，柠檬酸、酮戊二酸和富马酸水平显著增加，逐渐增加肝线粒体产生并减少胰岛素抵抗。天冬氨酸由草酰乙酸合成。NAFLD模型组天冬氨酸水平明显增加，表明天冬氨酸从草酰乙酸过度合成，且乙酰辅酶A无法与足够的草酰乙酸结合进入三羧酸循环。治疗12周后，STM组天冬氨酸水平显著改变，并接近对照组。

作为必需氨基酸，色氨酸可通过色氨酸-2,3-双加氧酶（TDO）和吲哚胺-2,3-双加氧酶（IDO）代谢为犬尿氨酸和其他代谢物。这两种细胞内酶对病毒性肝炎、自身免疫性肝病、NAFLD和肝硬化的调节具有多种影响。当色氨酸代谢为犬尿酸时，它会减少炎症因子和肝纤维化。此外，5-羟色胺与氧化应激有关，而据报道色氨酸在肠道中促进5-羟色胺产生。异常的色氨酸代谢途径导致肝细胞脂质过氧化水平升高以及线粒体损伤增加。本研究揭示了NAFLD模型大鼠色氨酸代谢途径被 disrupt，导致色氨酸代谢能力降低和色氨酸水平显著上调。STM和RG给药后，色氨酸水平逐渐下调，这可能与促进IDO和TDO活性有关。RG组的色氨酸水平与对照组相似，表明RG可作为治疗NAFLD的新方法。

D-葡萄糖是身体的主要能量来源，参与葡萄糖代谢和胰岛素信号通路。在NAFLD中，葡萄糖代谢失调普遍存在，通常表现为胰岛素抵抗和肝脏糖异生增加。胰岛素 resistance损害葡萄糖利用，导致血糖水平升高，而增强的肝脏糖异生进一步加剧高血糖。同时，增加的糖异生促进脂肪酸合成，加剧肝脏脂质积累。硬脂酸和棕榈酸是常见的饱和脂肪酸，是膳食脂肪的主要组成部分，也参与内源性脂肪酸合成。在NAFLD中，肝脏脂肪酸合成增强导致饱和脂肪酸积累。过量的饱和脂肪酸可诱导肝细胞炎症反应和细胞死亡，加剧肝损伤。

甘油磷脂是生物膜和胆汁酸的重要组成部分，也参与细胞膜中的蛋白质识别和信号传导。甘油磷脂是多种生物活性脂质信号分子的前体，如花生四烯酸、溶血磷脂酸和血小板活化因子。这些脂质介质参与调节一系列生理和病理过程，包括炎症和细胞增殖。甘油磷脂代谢紊乱可能导致身体能量代谢紊乱，引起肝脏解毒功能障碍和脂肪积累，这是导致NAFLD的主要机制。溶血磷脂酰胆碱（LysoPC）是通过从磷脂酰胆碱（PC）中去除酰基链的水解产生的，具有很强的溶血作用，可导致红细胞坏死。与对照组相比，模型组PC水平下降，LysoPC水平上升，表明模型大鼠出现甘油磷脂代谢紊乱。STM和RG给药后，PC（36:3）、LysoPC（15:0）、PC（16:0/18:1(11Z)）和PC（18:0/20:3(5Z,8Z,11Z)）的水平被逆转。肝脏必须将合成的甘油三酯包装成VLDL并分泌到血液中，以促进脂肪从肝脏输出。PC的缺乏严重损害VLDL分泌，导致甘油三酯在肝细胞内积累，推动肝脂肪变性发展。NAFLD模型组PC水平下降导致VLDL-C合成减少，导致TG在肝细胞内积累。这可能归因于磷脂酶A对PC的广泛水解。正常水平的甘油磷脂促进体内脂蛋白生产和运输。本研究的实验结果表明，STM和RG改善了甘油磷脂的异常代谢，从而维持了大鼠细胞内脂质代谢的稳态。

使用分子对接方法初步讨论了RS和SG对靶点结合立体化学差异的可能机制（支持信息）。色氨酸代谢直接影响细胞内NAD⁺水平，而NAD⁺是sirtuin 1（SIRT1）去乙酰化酶活性的关键辅酶。研究表明，SIRT1通过调节线粒体功能和氧化应激反应维持代谢稳态。牛磺酸的肝保护作用与其改善线粒体呼吸链功能和清除活性氧（ROS）的能力有关，这一过程与SIRT1介导的抗氧化机制密切一致，表明牛磺酸可能通过调节SIRT1信号通路发挥其作用。此外，三羧酸（TCA）循环通过改变NAD⁺/NADH比率动态调节SIRT1活性。SIRT1进一步抑制固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）以减少脂肪酸合成，并激活过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）以促进脂肪酸氧化。鉴于色氨酸代谢-NAD⁺-SIRT1轴在能量代谢中的关键作用以及牛磺酸对线粒体功能的调节特性，我们选择SIRT1作为分子对接靶点。RG和SG与SIRT1的分子对接结果显示，RG比SG具有更好的亲和力。

结论

本研究利用非靶向血清代谢组学鉴定了与STM、RG和SG相关的生物标志物。此外，揭示并分析了与这些生物标志物相关的代谢途径。使用血糖水平、脂质生化指标和组织病理学数据作为辅助工具，探索了STM、RG和SG治疗NAFLD的药理机制。首次确定了21种与效应相关的差异丰富代谢物。通路富集分析显示，STM可通过调节色氨酸代谢、花生四烯酸代谢、TCA循环和甘油磷脂代谢来治疗NAFLD。RG可通过调节牛磺酸和亚牛磺酸代谢、TCA循环、花生四烯酸代谢、色氨酸代谢和甘油磷脂代谢对NAFLD发挥治疗作用。这些发现揭示了STM和RG调节NAFLD的机制，表明这两种药物是改善NAFLD的潜在有效药物。我们未来的研究将优化RG的给药剂量，以实现可能的临床应用。同时，将研究RG和SG在靶点结合上的立体化学差异，如酶亲和力的差异，以深化未来的机制研究。