慢性间歇性乙醇暴露及戒断通过μ阿片受体差异性调控基底外侧杏仁核投射神经元群的GABA能抑制

本研究发现慢性间歇性乙醇暴露及戒断（CIE/WD）通过μ阿片受体（MOR）机制，特异性抑制雄性大鼠基底外侧杏仁核（BLA）向伏隔核（NAC）投射神经元（BLANAC）的侧副囊旁细胞（LPC）GABA能输入，同时揭示雌性个体局部中间神经元具有更高的GABA释放能力。该研究首次阐明乙醇依赖对BLA不同投射通路（NAC/BNST）的抑制性调控存在性别特异性差异，为酒精使用障碍（AUD）的性别差异化治疗提供了关键神经机制依据。

　　

1 引言

酒精使用障碍（AUD）的特征性表现包括戒断焦虑和过度饮酒行为。采用慢性间歇性乙醇（CIE）范式的研究表明，基底外侧杏仁核（BLA）通过向下游核团（如终纹床核BNST和伏隔核NAC）的投射，分别调控焦虑和奖赏相关行为。BLA中约85%的神经元是谷氨酸能投射神经元（BLA^PN），其中BLA^NAC神经元调控奖赏相关行为，而BLA^BNST神经元参与焦虑样行为调控。BLA的GABA能抑制系统主要由两类中间神经元构成：分布于BLA内部的"局部"中间神经元（local interneurons）和聚集于外侧囊旁的侧副囊旁细胞（LPCs）。LPCs独特表达多巴胺D1受体和μ阿片受体（MOR），提供向前抑制（feed-forward inhibition）；而局部中间神经元高度异质化，表达小清蛋白（PV）、钙结合蛋白等标记物，主要提供反馈抑制（feedback inhibition）。前期研究发现CIE/WD可导致雄性大鼠BLA中LPCs的GABA释放减少，但对局部中间神经元无影响，且其对不同投射神经元群的调控可能存在性别差异。

2 方法

2.1 动物模型

研究使用Sprague-Dawley大鼠（雄性和雌性），通过立体定位注射将逆向运输的腺相关病毒（AAVrg）注入NAC或BNST，特异性标记BLA^NAC或BLA^BNST神经元。采用CIE蒸气吸入模型（12小时/天，持续10天）建立酒精依赖模型，对照组暴露于空气。戒断24小时后进行电生理记录或免疫组化检测。

2.2 电生理记录

在脑切片上进行全细胞膜片钳记录，通过刺激电极置于外侧囊（激活LPCs）或BLA内部（激活局部中间神经元）记录 evoked IPSCs。使用配对脉冲比率（PPR）评估GABA释放概率，PPR增高表明释放概率降低。自发IPSCs（sIPSCs）记录用于评估局部中间神经元的自发活动。药理学实验采用μ受体激动剂DAMGO（1μM）和拮抗剂CTOP（1μM）。

2.3 免疫组化与共聚焦显微镜

使用抗vGAT（囊泡GABA转运体）、抗PV和tdTomato抗体进行三重染色，通过Mander重叠系数量化vGAT⁺与PV⁺ puncta的共定位情况。

3 结果

3.1 CIE/WD特异性抑制雄性BLA^NAC神经元的LPC GABA释放

CIE/WD显著增加LPC→BLA^NAC突触的PPR（表明GABA释放减少），且该效应仅存在于雄性大鼠（**p=0.007），雌性无变化。LPC→BLA^BNST突触的PPR在两组中均无显著改变。

3.2 μ阿片受体介导LPC GABA释放抑制

在乙醇 na?ve 的雄性大鼠中，μ受体激动剂DAMGO可显著抑制LPC IPSCs幅度并增加PPR，该效应可被拮抗剂CTOP完全阻断。在CIE/WD处理的雄性BLA^NAC神经元中，CTOP处理可逆转PPR的增高（即增加GABA释放），表明CIE/WD通过增强MOR功能抑制LPC GABA能传递。

3.3 局部中间神经元的GABA释放存在基础性别差异

雌性大鼠的局部中间神经元→BLA^NAC和→BLA^BNST突触均显示更低的PPR（即更高的GABA释放概率），该现象与CIE/WD处理无关，提示雌性局部中间神经元具有更高的基础释放能力。

3.4 雌性BLA^NAC神经元周围vGAT与PV共定位较低

免疫染色显示，雌性BLA^NAC神经元周围vGAT⁺ puncta与PV⁺ puncta的共定位程度显著低于雄性（p<0.0001），表明雌性的围胞体抑制性突触可能来源于更多非PV⁺的中间神经元亚型。

3.5 CIE/WD降低BLA^BNST神经元的自发GABA释放

CIE/WD处理显著降低BLA^BNST神经元的sIPSC频率（*p=0.046），但不影响幅度，该效应无性别差异。BLA^NAC神经元的sIPSC参数则无显著变化。

4 讨论

4.1 LPCs的调控机制及行为意义

CIE/WD通过增强MOR功能特异性抑制雄性BLA^NAC神经元的LPC GABA能输入，可能与脑啡肽降解酶（neprilysin）的下调相关。该抑制解除了对BLA^NAC神经元的前馈抑制，结合既往发现的谷氨酸能传递增强和神经元兴奋性增高，可能共同促使雄性大鼠戒断后酒精摄入量增加。雌性因缺乏此类变化，故酒精摄入行为不受影响。

4.2 局部中间神经元的性别特异性特征

雌性局部中间神经元显示更高的 evoked GABA释放，但sIPSC频率无性别差异，提示其释放概率增高可能源于突触前机制（如Munc13-1表达增高）或激素调控（动情间期占比增加）。较低的vGAT/PV共定位表明雌性可能依赖更多样的中间神经元亚型实现抑制性调控。

4.3 BLA^BNST通路的自发抑制减弱

CIE/WD降低BLA^BNST神经元sIPSC频率可能与局部中间神经元兴奋性降低或突触数量减少有关。该效应可能解除对BLA^BNST神经元的抑制，增强其向BNST的输出，从而促进戒断焦虑行为。

5 结论

本研究揭示CIE/WD以输入特异性（LPC vs. local）、细胞群特异性（BLA^NAC vs. BLA^BNST）和性别特异性的方式调控BLA GABA能抑制。雄性BLA^NAC神经元的LPC输入通过MOR机制被抑制，而雌性局部中间神经元则具有更高的基础释放能力。这些发现为AUD的神经环路机制和性别差异治疗提供了重要依据。