氟尼辛葡甲胺与美洛昔康对LPS刺激马中性粒细胞TNF-α产生的差异调节作用及其治疗意义

本研究针对马全身炎症反应综合征(SIRS)治疗中非甾体抗炎药(NSAIDs)的作用机制展开探索。研究人员通过体外实验比较氟尼辛葡甲胺(FM)与美洛昔康(MX)对LPS刺激外周血单核细胞(PBMCs)和中性粒细胞TNF-α产生的抑制效应。结果显示FM能浓度依赖性地显著抑制中性粒细胞TNF-α蛋白表达，而两种药物对PBMCs的TNF-α基因表达及NF-κB通路均无显著影响。该发现为优化马SIRS/内毒素血症的抗炎治疗提供了重要的细胞特异性机制依据。

　　

在马兽医临床实践中，全身炎症反应综合征(SIRS)及其相关的内毒素血症一直是导致高发病率和高死亡率的主要因素。这种病症通常继发于结肠炎等肠道疾病，当革兰氏阴性菌的细胞壁成分脂多糖(LPS)进入血液循环后，会引发剧烈的炎症反应。非甾体抗炎药(NSAIDs)如氟尼辛葡甲胺(FM)和美洛昔康(MX)被广泛应用于改善SIRS/内毒素血症的临床症状，这些药物能够抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，但其具体作用机制尚不明确。

为了解决这一问题，日本中央竞马会防检部门的研究团队开展了一项体外研究，比较FM和MX对LPS刺激的马外周血单个核细胞(PBMCs)和中性粒细胞中TNF-α产生的抑制作用。该研究近期发表在《Veterinary and Animal Science》期刊上。

研究人员采用密度梯度离心法从三匹健康纯血马的外周血中分离PBMCs和中性粒细胞，使用0.3 ng/mL的LPS刺激细胞，并分别加入5、10、50 μM浓度的FM或MX。通过实时定量PCR分析TNF-α基因表达，ELISA检测蛋白水平，Western blotting评估NF-κB信号通路关键蛋白IκB和磷酸化IκB的表达变化。

研究结果显示，在LPS刺激的PBMCs中，FM和MX对TNF-α mRNA表达均无显著抑制作用，各浓度处理组与LPS单独刺激组相比均无统计学差异。Western blotting分析表明，LPS刺激显著提高了磷酸化IκBα/IκBα/β-actin的比值，但FM和MX处理并未显著改变这一比值，说明两种NSAIDs对NF-κB信号通路的激活没有明显影响。

ELISA检测发现，在PBMCs中，LPS刺激使TNF-α水平升高至44.5±13.5 pg/mL，而FM和MX各浓度处理组均未显示显著抑制效果，甚至在50 μM浓度时TNF-α水平反而有所升高。

然而，在中性粒细胞中的发现令人瞩目：FM处理显著抑制了LPS诱导的TNF-α蛋白表达，且呈现浓度依赖性。10 μM FM使TNF-α水平显著降低至35.9±20.3 pg/mL，而50 μM FM则在所有个体中使TNF-α水平降至检测限以下(<15.6 pg/mL)。MX也表现出类似的抑制趋势，但未达到统计学显著性。

这些发现揭示了FM和MX在马SIRS/内毒素血症治疗中发挥作用的细胞特异性机制。研究表明，NSAIDs对TNF-α产生的抑制效应主要针对中性粒细胞而非单核细胞来源的细胞。FM对中性粒细胞衍生TNF-α的显著抑制作用表明，其临床疗效可能在急性炎症阶段特别相关，此时中性粒细胞是全身炎症的主要介质。

该研究的重要意义在于提供了NSAIDs在马SIRS治疗中细胞特异性作用的机制见解，为临床药物选择和治疗策略优化提供了科学依据。FM通过抑制中性粒细胞来源的TNF-α产生，可能更有效地控制急性炎症反应，这一发现对于改善马SIRS/内毒素血症的治疗效果具有重要价值。

未来研究应进一步探讨NSAIDs细胞特异性作用的确切机制，包括前列腺素通路在中性粒细胞TNF-α调节中的作用，并通过体内研究检验中性粒细胞活化、NSAIDs给药和临床结果之间的时序关系，从而为马SIRS/内毒素血症开发更加靶向有效的抗炎治疗方案。