波动CO2条件下CP12对蓝细菌代谢组的调控机制及其生理意义

本研究通过靶向代谢组学分析，揭示蓝细菌模型聚球藻PCC 6803中调控蛋白CP12在波动CO2环境下的核心作用。CP12缺失导致卡尔文-本森-巴沙姆（CBB）循环紊乱，糖原代谢异常及氮代谢失衡，证明CP12介导的氧化还原调控是蓝细菌适应碳源波动的关键机制。

　　

引言

进行放氧光合作用的生物，如蓝细菌、藻类和植物，通过卡尔文-本森-巴沙姆（CBB）循环固定无机CO₂以合成有机碳。CBB循环中的CO₂固定由核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶（RubisCO）催化，通过将CO₂结合到核酮糖1,5-二磷酸（RuBP）上合成两个3-磷酸甘油酸（3PGA）分子。然而，包括聚球藻PCC 6803在内的蓝细菌中存在的1型RubisCO蛋白具有较低的CO₂亲和力和特异性。在环境CO₂条件下，该酶还能利用O₂进行加氧反应，生成一分子3PGA和一分子2-磷酸乙醇酸（2PG）。副产物2PG会抑制放氧光养生物初级碳代谢中的多种酶，因此需要通过光呼吸过程进行回收，该过程会释放约四分之一的有机碳作为CO₂，并消耗细胞能量和还原力。

与陆地植物不同，在水生环境中进行放氧光合作用的生物面临CO₂在水中溶解度低的问题。CO₂的溶解主要取决于水的pH值和温度，导致CO₂可用性波动。为了在低且波动的CO₂条件下茁壮成长，蓝细菌和许多藻类进化出了有效的CO₂浓缩机制（CCM），在RubisCO附近浓缩CO₂，从而促进其羧化酶活性并减少光呼吸程度。蓝细菌的CCM涉及多种无机碳（Ci）摄取系统，以碳酸氢盐和CO₂的形式，导致细胞内碳酸氢盐积累，随后在羧酶体内被碳酸酐酶重新转化为CO₂，羧酶体是容纳RubisCO的原核区室。CCM组分的表达主要在转录水平上受不同Ci量的调节。研究表明，波动的Ci条件对模型蓝细菌聚球藻PCC 6803的代谢组有显著影响。然而，中央碳代谢酶的转录物和蛋白质水平在波动Ci条件下未显示显著变化。

除了足够的Ci可用性外，光合CO₂固定也严格依赖于光照条件，因为光合复合体将光能转化为ATP和NADPH，这些是CBB循环和其他潜在汇点所需的。因此，蓝细菌等放氧光养生物仅在白天表现出自养代谢。在无光条件下，即夜间，它们通过使用储存的碳水化合物（如糖原）在分解代谢过程中进行能量生产和代谢目的，从而执行异养生活方式。光开始后光合作用和CBB循环的激活在不同层面上受到调节；其中，酶活性的氧化还原调节被认为是最重要的过程。

与植物不同，蓝细菌中CBB循环的大多数酶不直接受氧化还原调节以在昼夜光/暗循环中激活/失活CO₂固定。相反，小的氧化还原调节蛋白CP12已被证明在氧化条件下，即在从光转变为暗条件后，结合并失活CBB循环中的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GapDH）和磷酸核酮糖激酶（PRK）。CP12（12 kDa的叶绿体蛋白）最初在植物中发现。这种小的、本质上无序的蛋白质已在几乎所有蓝细菌、藻类和植物中被鉴定出来。典型的CP12蛋白质的特征是具有两个半胱氨酸（Cys）对，一个靠近N端，另一个靠近C端，可以形成二硫键，这使得CP12能够结合GapDH和PRK。生化和结构分析表明，首先两个GapDH四聚体，然后两个PRK二聚体被四个氧化的CP12分子招募。最近，我们使用Yfp标记的蛋白质在聚球藻中可视化了在氧化（关闭光）和还原（打开光）条件下CP12/GapDH/PRK复合物的出现和消失。我们之前的研究还提供了线索，表明CP12的缺失可能对蓝细菌代谢产生更广泛的影响。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）（氧化戊糖磷酸（OPP）途径的入口酶）的活性降低，这影响了Δcp12突变体在黑暗阶段对外部葡萄糖的利用。目前尚不清楚CP12在蓝细菌中是否除了GapDH和PRK之外还有其他特定靶点。然而，有报道称莱茵衣藻中的CP12可以与醛缩酶结合，醛缩酶在放氧光养生物的糖代谢中也起着至关重要的作用。此外，发现聚球藻CP12蛋白质在不同Ci条件下发生差异磷酸化，这指出了潜在的额外调控层。

在本研究中，我们提供了关于CP12介导的调控在连续光照下不同Ci条件下对蓝细菌光自养代谢影响的新数据。为此，我们比较了聚球藻野生型（WT）和突变体Δcp12在环境CO₂条件（0.04% CO₂，低CO₂，LC）和CO₂富集（5% CO₂，高CO₂，HC）条件下的代谢组。为了进行代谢物定量，我们结合了两种先进的方法，使我们能够获得中央碳和氮代谢的全面图景。所有实验均在连续光照下进行，以避免已经充分研究的昼夜条件下与氧化还原相关的CP12效应。我们的结果表明，CP12介导的调控对于聚球藻中央代谢在恒定光照条件下快速适应波动的CO₂具有高度重要性。

材料与方法

菌株与培养

所有实验均使用聚球藻PCC 6803的葡萄糖耐受野生型（WT）菌株。聚球藻Δcp12缺失突变体的构建和表征如前所述。聚球藻WT和Δcp12的细胞在玻璃管中预培养一周，通过连续通入低CO₂（环境空气，0.04% CO₂，LC，导致培养基中约0.6 mM Ci）或高CO₂（5%，HC，导致培养基中约50 mM Ci）水平的空气，在缓冲的BG11培养基中（TES pH 8.0）并添加相应的抗生素（突变体Δcp12使用50 μg ml^-1卡那霉素），连续光照为100 μmol光子m^-2 s^-1（暖光荧光管）。然后通过离心收获细胞，并重悬于新鲜的BG11培养基中，使750 nm光密度（OD₇₅₀）为1.0（约含10⁹个细胞ml^-1）。细胞悬浮液的OD₇₅₀在适当稀释后用分光光度计（Cary 50, Varian, UK）使用1 cm路径的玻璃比色杯测量。适应24小时后，用新鲜的BG11将培养物调整至OD₇₅₀为1.0。为了开始实验，这些培养物在各自的CO₂条件下维持3小时。为了将培养物从HC转移到LC，通过离心收获细胞，然后重悬于等体积的新鲜BG11培养基中，之后连接到环境空气通气。

取样与代谢物分析

在从HC向LC转移之前以及转移后1小时和3小时，从每个独立的培养容器（每个总细胞悬浮液为100 ml）中收取四份8 ml样品，并直接在干冰冷却的16 ml 70%甲醇中淬灭。淬灭的细胞通过离心沉淀（7分钟，10000 g，4°C），弃去上清液，细胞沉淀快速在液氮中冷冻并储存于-80°C长达一个月直至提取。对于代谢物提取，将淬灭的细胞沉淀重悬于-20°C冷的47%甲醇/氯仿（5:1, v/v）中，随后进行四个循环的液氮冷冻悬浮液，-80°C冰箱中储存1小时并在冰上解冻。最终提取物进行冷冻干燥（Christ Alpha 2–4冷冻干燥机，Christ，德国），重悬于250 μl MS级纯水中并过滤（MultiScreen滤板与Ultracel-10膜，Millipore）。

提取物分成两份，然后用于不同的代谢物定量方法。磷酸化中间体通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS, Thermo-Fisher-Scientific, USA）进行定量，使用反相LC和阴离子交换LC，如先前详细描述。大多数有机酸和氨基酸使用另一个LC-MS/MS系统（LCMS-8050, Shimadzu, Japan）进行定量，如前详细描述。在后一种情况下，使用LC-MS/MS方法包中给出的多反应监测（MRM）值和LabSolutions软件包（Shimadzu, Japan）对化合物进行鉴定和定量。提取过程中的损失通过将信号强度归一化到内标肉碱的强度来计算，即每个样品加入30 μg肉碱。

细胞糖原根据Gründel等人（2012）的方法测定，并采用Lucius等人（2021）描述的修改。在生长实验期间，从培养物中收取两份5 ml细胞等分试样并通过离心沉淀。将沉淀重悬于300 μl 30% KOH（w/v）中，并通过900 μl冰冷纯乙醇（Carl Roth, Germany）沉淀糖原。洗涤并干燥的沉淀重悬于200 μl乙酸钠缓冲液（100 mM, pH 4.5）中，其中含有21 U的淀粉葡萄糖苷酶（Sigma-Aldrich, Germany）。上清液中的葡萄糖使用邻甲苯胺试剂（Carl Roth, Germany）测定。

数据评估与统计分析

实验用独立培养重复两次。每次实验中，培养四个生物学重复并用于取样。LC-MS/MS的数据评估通过计算每个取样点内每个生物学重复的绝对代谢物含量的平均值来完成。绝对定量通过在同一运行中评估已知量的真实物质内标分析来完成。最终代谢物值通过计算所有生物学重复的平均值和标准偏差获得，这些值被归一化到取样体积和以750 nm光密度（OD₇₅₀）测量的总生物量（数据集在补充表S1中给出）。通过将我们测量的每生物量光密度（OD）750 nm的数据转换为单个细胞体积（mm³）来估计细胞浓度。该转换使用聚球藻悬浮液在不同OD₇₅₀值下稀释并通过库尔特计数器在每个稀释悬浮液中测量总细胞体积mm³ ml^-1以将代谢物水平归一化到细胞体积的校准曲线完成。使用以下方程：生物体积[mm³ ml^-1] = OD₇₅₀ x 0.919。

糖原数据集代表至少三个生物学重复。进行学生t检验，显著性水平为5%（p ≤ 0.05），以检测代谢物和糖原数据的特定差异（见补充表S1）。所有t检验均进行六次重复，因此数据是均匀的。突变体菌株的每个单个数据点与相应WT数据的显著偏差用星号标记。使用Metaboanalyst 6.0平台分析和显示代谢数据，作为包括聚类分析、主成分分析（PCA）和自组织映射分析（SOM）的热图。这些分析包括来自所有重复的总代谢物数据。PCA分析了样品中10种主要代谢物的分布，并相应地分离了处理/菌株。

结果

全局变化

为了研究波动Ci条件下CP12介导的CBB循环调控的影响，我们比较了在恒定光照下不同CO₂状态下聚球藻WT细胞和突变体Δcp12的代谢组，以排除光/暗相关的氧化还原变化。细胞要么长期适应HC或LC条件以确定稳态条件下的代谢物组成（分别为HCss和LCss）。此外，在从HC转移到LC 1小时或3小时后的细胞中研究了代谢物瞬变（分别为LC1h和LC3h）。通过两次靶向LC-MS/MS分析提取物，允许定量超过40种初级C和N代谢的代谢物。每OD₇₅₀和ml藻类悬浮液的测量浓度用于计算细胞代谢物浓度。这是使用不同OD₇₅₀值和总细胞体积mm³之间的校准曲线完成的，以将代谢物水平归一化到细胞体积。这些数据显示在补充表S2中，并将有助于未来的建模方法，其中已知的聚球藻酶生化特征（即k_m和v_max值）可以与代谢物量结合。

对整个数据集的首次全局分析显示，来自两个菌株的稳态HC和LC生长细胞的代谢组聚集在一起，在两个菌株LC转移后3小时的样品中也观察到这一点，尽管在 distinct 中间体上存在差异。然而，发现突变体Δcp12的代谢组在LC转移后1小时与所有其他检查的样品不同，此时许多检测到的代谢物在突变体细胞中表现出增加的值。这一发现表明，CP12介导的调控缓冲了CBB循环以及整个代谢以应对突然变化，其缺失对许多初级C和N代谢的中间体具有广泛影响。PCA和SOM分析表现出可比趋势，WT和Δcp12在稳态LC（LCss）分组在一个簇中（簇0_0），而所有其他处理，除了Δcp12 LC1h，分组在另一个簇中（簇0_1）。发现簇0_2仅包含Δcp12 LC1h，其表现出独特的代谢模式。

当Δcp12细胞从HC转移到LC时，这种趋势是预期的，考虑到CP12与CBB途径中的两个关键酶的直接的、氧化还原依赖的相互作用。CBB循环通量和碳分配的改变已被观察到对其他相关的生化途径产生相当大的影响。此外，代谢物蔗糖6-磷酸在簇之间表现出最大的显著性，这类似于烟草植物在CP12下调后显示糖积累增加的情况。有趣的是，蔗糖6-磷酸的形成始于CBB产物果糖6-磷酸和UDP-葡萄糖。该途径充当碳汇，有助于在生长或糖原储存需求有限时调节固定碳的流动，从而平衡NADPH和ATP的使用并间接支持氧化还原稳态。

CBB循环

由于CP12以氧化还原依赖的方式直接调节两种CBB酶的活性，我们预计在波动Ci条件下，即使是在连续光照下，该循环的代谢物也会出现最显著的变化。LC-MS/MS方法允许定量10种CBB循环中间体。不幸的是，甘油醛3-磷酸（Gap）由于其不稳定性和低水平而无法检测；然而，我们假设它通过磷酸丙糖异构酶（TPI）活性与检测到的二羟基丙酮磷酸（DHAP）处于平衡状态。此外，我们没有可靠的赤藓糖4-磷酸数据。第11种代谢物2PG，光呼吸的第一个中间体，也作为RubisCO的产物与CBB代谢物一起包括在内。

关于稳态条件下的一般变化，在两个菌株中一致地区分了三组CBB中间体。与HC条件相比，在LC条件下测量到2PG、3PGA、核酮糖1,5-二磷酸（RuBP）和核糖5-磷酸（R5P）的水平增加，而检测到果糖6-磷酸（F6P）、果糖1,6-二磷酸（FBP）和景天庚酮糖1,7-二磷酸（SBP）的量减少。在两个菌株中，DHAP、景天庚酮糖7-磷酸（S7P）和木酮糖5-磷酸（X5P）的稳态水平几乎没有变化。所有CBB中间体在从HC转移到LC后的过渡时间表现出更大的偏差。大多数中间体在LC转移后1小时或3小时变得升高，只有F6P值在转移期间从高HC值逐渐下降到低LC值。对于许多中间体，在突变体Δcp12中发现了与WT相似的相对变化。然而，在转移到LC后1小时，突变体细胞中RuBP、2PG和X5P发生了比WT高两倍的瞬态积累。此外，在HC条件下，突变体细胞中FBP和SBP的稳态值比WT细胞高两倍以上，而F6P和S7P的值在同一条件下似乎减少。其他CBB中间体的稳态量在长期LC适应后两个菌株中几乎相似。

糖原以及通过糖酵解和OPP途径的葡萄糖分解代谢中间体

之前已经观察到，在HC条件下过量的CO₂会刺激聚球藻中糖原的积累，而在LC条件下会被消耗。因此，在HC生长的稳态条件下检测到的糖原比LC适应的WT细胞多5倍。当WT细胞在连续光照下从HC转移到LC条件时，内部糖原池迅速下降。已经表明，当Ci限制条件且CCM未完全诱导时，来自糖原分解的葡萄糖可以补充CBB循环以合成RuBP的有机碳。在本研究中，突变体Δcp12的糖原水平与WT完全不同。如前所示，在HC和LC条件下，突变体细胞的糖原稳态水平都高出两倍以上。一个特别值得注意的发现是，当突变体细胞从HC过渡到LC时，积累的糖原下降较慢。WT细胞在HC向LC转移后糖原池下降速度快两倍，即这些细胞在转移后每小时每ml和OD₇₅₀消耗4.5至3 μg葡萄糖，分别在转移后1和3小时，而Δcp12细胞在转移后每小时仅消耗2至1.6 μg葡萄糖每ml和OD₇₅₀，分别在转移后1和3小时。这些结果表明，在缺乏CP12的情况下，增加的糖原水平更可能是糖原池周转较慢的结果，因为特别是其降解似乎更慢，正如先前在葡萄糖补充实验中提出的那样。

接下来，我们分析了在两个菌株不同Ci条件下通过OPP途径和经典糖酵解的糖分解代谢代谢物的变化。这些途径的许多代谢物，如F6P、FBP、R5P和3PGA，与CBB循环共享；因此，前一节中讨论的它们的变化也可能归因于两个菌株在不同Ci条件下糖原分解代谢的差异。

已知OPP途径是黑暗但也包括光照条件下葡萄糖分解代谢的主要路线。葡萄糖6-磷酸（G6P）的量，该途径起始化合物，当两个菌株的细胞从HC转移到LC条件时，显示出几乎相似的逐步下降。然而，在突变体Δcp12的LC生长细胞中，G6P的稳态量明显更高，葡萄糖1-磷酸（G1P）也是如此。有趣的是，当突变体细胞从HC转移到LC条件1小时后，G1P没有减少。与WT细胞相比，突变体中G1P的这种延迟反应与LC转移后糖原消耗延迟和G6PDH活性较低一致。

此外，在两个菌株不同Ci条件下观察到低糖酵解代谢物的显著改变。磷酸烯醇丙酮酸（PEP）和丙酮酸的水平在两个菌株的稳态LC条件下都升高，这与在Ci限制条件下从CBB循环向低糖酵解的有机碳输出增强一致。在这些条件下，碳较少用于糖原合成，而主要用于维持氮同化。有趣的是，在LC转移后1小时，突变体Δcp12细胞中发生了PEP的瞬态积累，这可能反映了在该时间点该菌株中向低糖酵解和开放TCA循环的有机碳输出更高。3PGA的水平在两个菌株中显示出相似的改变。

TCA循环和氮代谢的相关中间体

在蓝细菌中，由于缺乏2-酮戊二酸（2OG）脱氢酶复合物，TCA循环不是封闭的。因此，氧化分支主要用于合成2OG作为氮同化中谷氨酰胺合成酶/谷氨酰胺酮戊二酸氨基转移酶/谷氨酸合酶（GS/GOGAT）循环的碳受体。相反，还原分支产生琥珀酸，可作为呼吸作用的底物。已经描述了两种可以闭合蓝细菌TCA循环的分流，使用2-酮戊二酸脱羧酶和琥珀酸半醛脱氢酶将2OG转化为琥珀酸，或使用γ-氨基丁酸转氨酶；然而，在稳态条件下通过这些分流的通量似乎很低。

氧化分支的代谢物如柠檬酸/异柠檬酸（Cit）在两个菌株的HC和LC稳态条件下没有显示出强烈偏差，除了2OG，其在两个菌株的LC稳态条件下非显著增加。此外，我们观察到在LC转移后1小时突变体Δcp12中2OG量出现强峰。这种高积累也在谷氨酰胺中观察到，谷氨酰胺是谷氨酰胺合成酶反应使用2OG作为受体分子的氨同化产物。在该时间点突变体细胞中精氨酸和脯氨酸的水平也增加，这可能源于转氨酶反应中更可用的谷氨酰胺池。相反，在两个菌株中，谷氨酸的量在LC条件下比HC条件下增加，在WT中达到更高水平。

还原分支的苹果酸在两个菌株中基本上显示出相同的改变，在LC转移后1小时出现显著的瞬态积累，正如在低糖酵解中观察到的丙酮酸一样。然后，苹果酸下降到两个菌株LC适应细胞的较低水平。琥珀酸 rather 增加，在突变体Δcp12中趋势更高。

讨论

正如预期的那样，Ci可用性对聚球藻的初级碳代谢有显著影响。在高Ci存在下，RubisCO的加氧反应要低得多，如光呼吸中间体2PG的低稳态水平所示，比在LC下要低，尽管在从HC转移到LC条件后CCM被诱导。2PG水平对交替Ci水平的快速而强烈的反应使该中间体成为监测蓝细菌细胞碳可用性的极佳候选者，这影响了CCM调节转录因子NdhR和CmpR的活性。此外，CP12的缺失对碳分配有显著影响。在HC条件下，糖异生被刺激，导致糖原储存增加，在转移到LC后消耗以补充中央碳代谢。除了CBB，其他代谢途径的中间体在其稳态值上表现出改变，反映了在波动Ci条件下不同的碳通量。突变体Δcp12细胞中增加的糖原池很可能是CBB循环再生阶段活性增强的结果。我们之前的研究表明，即使在光下，部分GapDH2也与CP12结合；因此，缺乏抑制性CP12相互作用导致GapDH2和PRK在HC下完全活性以再生RuBP。因此，糖原的周转被延迟，最可能是因为与WT细胞相比，来自糖原池的有机碳较少用于补充CBB循环。

在暴露于不同Ci条件的WT细胞中发现的大多数主要代谢变化在突变体Δcp12细胞中仍然可见；然而，在许多情况下，改变在突变体细胞中更为明显，特别是在瞬态情况下，即在从HC转移到LC条件后1小时，当适应过程刚刚开始时。在缺乏根据氧化还原变化调整关键酶活性的调节蛋白的突变体中，这种行为是预期的。此外，突变体Δcp12中广泛的代谢改变支持了这样的观点，即在不同Ci条件下生长对蓝细菌细胞中的氧化还原条件有显著影响，这被不同的氧化还原调节电路感知，包括氧化还原依赖的调节蛋白CP12。最近一项分析聚球藻适应30%（v/v）极高CO₂条件的研究得出了类似的结论。作者证明，极高的CO₂水平对聚球藻的生长有负面影响，由于代谢池失衡，在cp12表达减少的细胞中加剧。先前一项使用 elongatus 聚球藻Δcp12的研究提供证据表明，CP12的缺失在高光条件下有负面影响，这与突变体细胞中有害活性氧（ROS）积累比WT更高有关。

正如预期的那样，我们发现CBB循环中间体DHAP作为Gap的代理和RuBP的变化，它们是CP12相互作用伙伴GapDH2和PRK的产物。当转移到LC 1小时后，RuBP在突变体中的量比WT细胞更高，对应于在缺乏CP12的情况下PRK活性抑制较少，而DHAP仅在LC稳态条件下显著升高。整体代谢物池变化表明，碳代谢物再生部分在LC下停滞，可能是由于RuBP利用率低，这与在低Ci条件下Rubisco限制CBB一致。这将导致包括RuBP、DHAP、3PGA在内的固定和还原两侧代谢物的更高积累。

有趣的是，通过双功能果糖-1,6-二磷酸/景天庚酮糖-1,7-二磷酸磷酸酶（F/SBPase）活性连接的代谢物，FBP或SBP和F6P或S7P，分别在突变体和WT之间在稳态条件下表现出相反的行为。在HC稳态条件下，单磷酸F6P和S7P的量在突变体中低于WT细胞，而双磷酸FBP和SBP的量在突变体中HC稳态条件下显著升高。FBP和SBP向F6P和S7P的转化由聚球藻中的双功能F/SBPase催化，这可能代表CBB循环再生阶段的限速步骤。这些代谢物相反的相对变化与这一观点一致，并表明双功能F/SBPase的活性可能在不同Ci条件下直接或间接受CP12在聚球藻中的调节。

除了CBB循环，糖酵解、OPP途径、TCA循环的中间体以及相关的氨基酸在不同Ci下显示出显著变化，这些变化在WT和突变体Δcp12之间常常不同。在OPP途径中，尤其是G1P的量在突变体中明显高于WT细胞。考虑到突变体中糖原消耗比WT细胞慢，这种增加表明G1P消耗较慢而不是其从糖原分解合成增加。然而，我们不能排除磷酸葡萄糖变位酶将G1P转化为G6P也可能在缺乏CP12的菌株中受到影响。在葡萄糖存在下的混合营养生长刺激了WT和突变体Δcp12中的糖原积累，而当葡萄糖被消耗时，突变体细胞中的糖原降解要慢得多。此外，先前的研究表明，当在光/暗循环下生长时，突变体Δcp12对外部葡萄糖敏感。CP12及相关GapDH2和PRK酶对葡萄糖利用的重要性也在最近的CRISPRi筛选中观察到，其中这三种蛋白质的抑制对聚球藻在混合营养条件下生长有明显的负面适应度得分。有趣的是，Miao等人（2023）的研究还显示GapDH2和CP12下调对低Ci条件下的适应度有负面影响，而我们未检测到突变体Δcp12与WT相比在HC或LC条件下生长较慢。整体代谢的全局变化，包括初级碳和氮代谢代谢物的改变，也有报道在具有叶绿体CP12量强烈反义介导抑制的烟草植物中。

总的来说，我们的结果表明氧化还原控制的CP12蛋白质对许多初级碳和氮代谢的中间体具有更广泛的影响。问题出现了，这些变化是直接还是间接与CP12的缺失相关。先前，我们证明了突变体Δcp12的葡萄糖敏感性主要是由于缺乏GapDH2的氧化还原依赖调节而不是PRK。最近，Nishiguchi等人（2025）分析了