催乳素（PRL）与DNA损伤协同触发抗乳腺癌免疫反应：揭示NK细胞介导的新型肿瘤抑制机制

本研究深入探讨了催乳素（PRL）在DNA损伤背景下通过调控自然杀伤（NK）细胞活性抑制乳腺癌发生的新机制。作者利用免疫缺陷（SCID）小鼠模型及体外实验证明，PRL分泌型乳腺癌细胞经多柔比星（Doxorubicin）处理后，通过上调NK细胞活化配体（CD155/MICA/B）和HLA分子，显著增强NK细胞介导的细胞毒性作用，从而延迟肿瘤发生。该发现为PRL受体（PRLR）靶向治疗与化疗联合策略提供了重要理论依据。

　　

引言

催乳素（PRL）作为一种多肽激素，通过与催乳素受体（PRLR）结合调控乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞的增殖、分化、存活及运动能力。尽管PRL已被确认为促乳激素，其与PRLR的相互作用在乳腺癌进展和转移过程中扮演关键角色。既往研究表明，PRL信号通路可增强乳腺癌细胞对DNA损伤类化疗药物的耐药性，其中ATM-DNA损伤应答通路与PRL-JAK2-STAT5-HSP90通路存在交叉对话。本研究旨在探索PRL在DNA损伤背景下对乳腺癌起始的影响及其与免疫细胞的相互作用机制。

材料与方法

研究采用人乳腺癌细胞系（MCF7、SKBR3）及NK92MI自然杀伤细胞系。通过稳定转染构建人PRL分泌型MCF7细胞系（MCF7hPRL），并利用CRISPR/Cas9技术构建PRLR敲除（KO）的SKBR3细胞系。体内实验使用严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠模型，将经多柔比星（1 μM）预处理后的乳腺癌细胞注射至小鼠乳腺脂肪垫，并通过抗唾液酸GM1抗体（anti-asialo GM1）耗竭特定免疫细胞群。体外实验包括细胞活力检测（Alamar blue）、核蛋白免疫印迹（检测p-STAT5/STAT5）、衰老相关β-半乳糖苷酶活性测定以及Calcein-AM细胞毒性试验。流式细胞术用于分析NK细胞标志物（CD45/DX5/NKp46）和NK活化配体（HLA/CD155/MICA/B）的表达。

结果

3.1 PRL分泌型细胞系的构建与验证

成功构建可持续分泌人PRL的MCF7hPRL细胞系，其每日PRL分泌量达24 ng/mL，并能有效激活PRLR下游的STAT5磷酸化信号。

3.2 自分泌PRL增强化疗耐药性

MCF7hPRL细胞对多柔比星（3-6 μM）的敏感性显著降低，证实自分泌PRL可促进乳腺癌细胞在DNA损伤条件下的存活。

3.3 PRL与DNA损伤协同延迟肿瘤发生

在SCID小鼠模型中，多柔比星预处理的MCF7hPRL细胞表现出显著延长的肿瘤潜伏期（P<0.05）和较小的肿瘤体积，且该效应与注射细胞数量无关。

3.4 抗唾液酸GM1阳性免疫细胞介导抗肿瘤效应

使用抗唾液酸GM1抗体耗免免疫细胞后，多柔比星处理的MCF7hPRL细胞成瘤速度显著加快（P=0.008），证实asialo-GM1⁺细胞（含NK细胞/巨噬细胞）是关键效应细胞。

3.5 NK与巨噬细胞招募变化

流式分析显示，多柔比星处理的MCF7hPRL细胞注射后10天，小鼠乳腺中CD45⁺DX5⁺ NK细胞和F4/80⁺巨噬细胞招募增加，而抗唾液酸GM1处理25天后巨噬细胞数量下降。

3.6 NK细胞活化配体表达调控

多柔比星和PRL联合处理显著上调MCF7细胞表面HLA I类分子、CD155（DNAM-1配体）和MICA/B（NKG2D配体）表达（P<0.001），提示NK细胞活化机制。

3.7 DNA损伤诱导细胞衰老

多柔比星处理诱导MCF7细胞发生p53依赖性衰老（P<0.001），但PRL处理未显著改变衰老水平。

3.8 NK细胞毒性增强

Calcein-AM试验表明，多柔比星与PRL联合处理使MCF7hPRL细胞对NK92MI细胞的敏感性提高133倍（P<0.001），且该效应在PRLR敲除细胞中消失。

3.9 PRLR依赖性NK细胞杀伤

在SKBR3PRLR-KO细胞中，PRL增强NK细胞毒性的效应被消除，证实PRLR是介导该过程的关键分子。

讨论

本研究首次揭示PRL与DNA损伤响应协同激活抗乳腺癌免疫的新机制。在化疗诱导DNA损伤背景下，自分泌PRL通过上调NK细胞活化配体（CD155/MICA/B）和HLA分子，增强NK细胞识别与杀伤效能，从而延迟肿瘤发生。该发现不仅澄清了PRL在肿瘤微环境中的双重角色（促瘤vs抑瘤），更为PRLR靶向疗法与DNA损伤类化疗的联合应用提供了理论依据。未来研究需进一步解析PRL调控免疫细胞招募的分子通路，并探索其在乳腺癌休眠调控中的潜在价值。