模拟小鼠术后病理性肠梗阻：一种简化且具转化价值的新型建模方法

本综述推荐一种创新且高度模拟临床的小鼠术后肠梗阻（POI）建模方法。该方法通过简单肠道外置与轻柔操作（10分钟），成功复制了人类术后胃肠动力障碍与炎症特征（如中性粒细胞/单核细胞浸润肌层），无需复杂设备或吻合术，为POI机制研究和药物开发提供了可靠、可重复的平台。

　　

ABSTRACT

Background

术后肠梗阻（Postoperative Ileus, POI）是一种医源性并发症，其特征是胃肠道转运暂时性麻痹，导致食物不耐受、恶心、呕吐，从而延长住院时间。POI的严重程度受到手术创伤的影响，尤其是在肠道手术中，其并发症发生率很高。迄今为止，还没有动物模型能在消化缝合或吻合术（人类消化切除手术中常见的操作）的背景下精确复制POI。

Methods

为诱导POI，小鼠接受了不同的手术。手术过程包括中线剖腹术，用湿润棉签进行外部操作后外置小肠，以模拟外科医生在寻找肠道病变时的动作。同时还进行了回肠-回肠吻合术以确保与人类手术干预的相关性。通过评估胃排空、胃肠道转运时间（灌服炭末、粪便输出）和肠道蠕动（等张收缩）来测量肠道转运。术后炎症在不同组织层和肠道区域进行评估。

Key Results

将小肠与盲肠外置并操作10分钟可诱导病理性术后肠梗阻。这个简单的操作引起的肠道转运减少与外科手术干预（回肠-回肠吻合术）相当。该模型显示胃排空减少和回肠肌肉收缩减弱，并伴有外肌层的中性粒细胞和单核细胞/巨噬细胞浸润。

Conclusions and Inferences

所开发的操作方法能够以非常简单且可重复的方式诱导小鼠术后肠梗阻，不需要任何特定设备，模拟了临床实践，并再现了人类病理学的特征。

Summary

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  一种模拟外科医生动作的简单肠道操作会导致胃肠动力障碍，持续至术后4天，从而引起病理性术后肠梗阻。

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  该模型的严重程度与临床相关的人类肠道吻合术中所观察到的相当。

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  这种简单操作会诱导肌肉层炎症，这是术后肠梗阻的一个标志。

1 Introduction

术后肠梗阻（POI）是一种与腹部手术相关的常见医源性疾病，其特征是手术干预后胃肠道（GI）转运长时间缺失。临床上，POI患者表现为不耐受口服摄入、腹部胀气和GI推进功能受损，且无机械性梗阻的证据。普遍认为，一种短暂的、自限性的POI形式是对腹部手术的正常生理反应，通常会在没有显著并发症的情况下自行缓解。然而，当POI变得病理性且 prolonged时，它会增加患者发病率、不适感和不满情绪，导致住院时间延长和医疗成本增加。

POI的严重程度和持续时间很大程度上取决于手术创伤的程度，其中肠道手术尤其与高并发症发生率相关。值得注意的是，经历POI的患者并发症发生率高达60%，其中20%需要入住重症监护室。即使实施了加速康复外科（ERAS）方案，POI仍然构成重大的临床挑战，特别是在结直肠手术中，其发生率可达20%。

经济分析强调了POI带来的巨大财务负担，美国用于其管理的医疗支出从2001年的71亿美元上升到2011年的123亿美元。每位患者的直接成本增加了约8233欧元，相当于每次住院费用增加了60%以上。因此，术后肠道功能的早期恢复对于改善临床结果和生活质量（特别是在胃肠道手术中）以及减少住院时间、增加医院床位周转率和节约医疗资源都至关重要。尽管已经提出了各种策略来缩短POI的持续时间，但其疗效仍然有限，并且没有单一治疗方法被证明绝对优越。

POI的确切机制尚未完全明了。手术打开腹膜腔和操作消化道会引发一个双相反应。最初的“神经源性阶段”由交感神经系统激活介导，发生在术后几小时内。随后是一个较晚的、由炎症驱动的阶段，始于术后3-4小时，并持续数天，这被认为是最具临床相关性的阶段。迄今为止，还没有动物模型能在消化缝合或吻合术（人类消化切除术后常规进行的操作）的背景下精确复制POI。这种由腹腔内手术引发的发展旨在密切复制腹部手术对消化系统的影响，并支持研究小鼠POI的标准化方法。这个精确的模型将使我们能够研究POI的潜在机制并评估新的治疗策略。

2 Materials and Methods

2.1 Animals

使用8-12周龄的雄性野生型（C57BL/6J）小鼠。所有动物维持12小时光暗周期，自由获取水和食物，但在灌服炭末以测量胃功能和小肠转运以及粪便输出前禁食18小时。所有实验程序均经US006/CREFRE动物护理与伦理委员会批准（APAFIS #202011201302875），并按照欧洲委员会的实验室动物护理和使用指南进行。

本研究还使用了CX3CR1-Cre^ERT2YFP^+/?小鼠（该小鼠在CX3CR1启动子下表达Cre-ERT2融合蛋白和黄色荧光蛋白（YFP））以可视化肠道组织中的巨噬细胞和单核细胞。

2.2 Operative Procedure

手术前，动物通过腹腔注射氯胺酮/甲苯噻嗪（100/10 mg/kg）溶液麻醉，并皮下注射丁丙诺啡（0.01 mg/kg）用于镇痛。小鼠接受不同类型的手术以诱导术后肠梗阻：

手术过程包括中线剖腹术，随后外置小肠（SI Ext.）、外置盲肠（SI + 盲肠 Ext.）、操作小肠2分钟（SI + 盲肠 Ext. + IM2′），或使用湿润棉签操作小肠10分钟，模拟外科医生在寻找肠道病变时的动作（SI + 盲肠 Ext. + IM10′）。仅接受剖腹术的小鼠（Sham）作为对照组。最后，稳态小鼠代表未接受任何麻醉和手术的小鼠。所有手术程序的总结见表S1。需要注意的是，肠道没有被压缩，而是进行操作以展开并保护肠系膜，尽可能接近人类外科实践。

手术过程中定期用NaCl湿润小肠以防止脱水。之后，将其重新放回腹腔，并通过在腹膜和皮肤层进行两个X形独立缝合来关闭切口。小鼠在手术期间及苏醒前与加热垫保持接触（维持在37°C）。

进行了回肠-回肠吻合术。在肠道外置后，进行5分钟的肠道操作。然后，在距回盲瓣近端1厘米处完全横切末端回肠，同时保护肠系膜。随后，在两个回肠段之间精心执行包含四个简单等距点的缝合，确保结打在四个关键点上。

所有手术程序均未导致死亡或重大手术并发症（包括出血、腹膜炎或穿孔）。所有动物均表现健康，术后早期有液体摄入且行为正常。

2.3 Measurement of Gastrointestinal Transit

在测量胃和小肠运动功能前，小鼠禁食18小时。术后通过口服灌胃500 μL黑色溶液（5% w/v炭末和10% w/v阿拉伯树胶（均购自Sigma））评估胃排空、小肠转运和十二指肠直径。灌胃20分钟后，处死小鼠并取出消化道。通过测量从幽门到炭末迁移起始处的距离来确定胃排空，结果以厘米表示。当距离 > 0 cm时定义为完全胃排空。因此，小肠转运通过炭末迁移的距离 normalized by 小肠的长度（从幽门到回盲瓣）来确定。为了尽可能接近人类病理生理学，在术后24、48、72和96小时测量胃排空和肠道转运。粪便输出每24小时记录一次，从手术后立即开始，持续96小时。粪便计数通过将此期间产生的粪便总数除以同一笼中饲养的小鼠数量来确定。使用卡尺测量十二指肠直径。进行这些测量是为了尽可能接近2018年提出的POI定义以及由IFEED评分定义的POI。

所有回肠-回肠吻合术的完整性在处死后第二天进行评估，仔细检查是否有任何瘘管迹象并确保吻合口通畅。

2.4 Measurement of Intestinal Contractions

解剖后，十二指肠、空肠、回肠和结肠段在Krebs-Ringer碳酸氢盐/葡萄糖缓冲液（pH 7.4，95% O₂和5% CO₂）中清洗。然后将肠道段在氧合的Krebs-Ringer溶液中于37°C孵育30分钟，连接到等张传感器（MLT7006 Isotonic Transducer, Hugo Basile），并浸没在相同介质、维持在37°C的器官浴槽中。施加到杠杆的负荷为1 g（10 mN）。等张收缩记录在Labchart软件（AD Instruments）上，跟随传感器位移。连接肠道段后，记录基础收缩15分钟。肌肉收缩的幅度以相对于基础反应的百分比表示，而收缩频率以每分钟收缩次数表示。

2.5 Reverse Transcription—Quantitative Real Time PCR (RT-qPCR)

清空回肠和结肠内容物，然后纵向打开。使用精细镊子在双目放大镜下分离纵肌肌间神经丛（LMMP）。粘膜和肌层保存在-80°C直至处理。使用RNeasy Kit（Qiagen）从回肠和结肠的粘膜或外肌层分离RNA。使用Maxima第一链cDNA合成试剂盒（Invitrogen），使用3微克RNA进行cDNA合成。cDNA合成物稀释1/10后，在LightCycler 480（Roche Diagnostics）上使用Takyon（Eurogentec）进行定量PCR（qPCR）。

研究中使用的引物列于表1。靶基因的相对表达 normalized to 参考基因Hprt和Tbp。随后，经受肠道操作（IM10′）的小鼠的肌层和粘膜数据 normalized with 假手术小鼠的数据。

2.6 Histochemistry and Immunohistochemistry

2.6.1 Histological Analysis

回肠和结肠的瑞士卷用4%甲醛（VWR）固定24小时。然后，样品包埋在石蜡中。横截面（5 μm）用苏木精和伊红染色。使用Pannoramic 250（3Dhistech）扫描整个回肠和结肠瑞士卷的图像。损伤评分侧重于上皮/粘膜改变、粘膜下层水肿和炎性细胞浸润的存在。

2.6.2 Immunohistochemistry and Quantification

横截面的抗原修复在柠檬酸盐缓冲液中于95°C进行20分钟。使用封闭缓冲液（PBS 1× [Sigma]，1% BSA [Dutcher]和0.5% Triton X-100 [Sigma]）进行封闭和透化3小时。随后，样品在封闭缓冲液中与抗小鼠CD45抗体（1:1000; 14-0451-85; Thermo Fisher）孵育过夜。一抗用封闭缓冲液中的Alexa Fluor 555标记的山羊抗大鼠IgG（1:1000; A-21434; Thermo Fisher）检测。样品使用ProLong Gold Antifade Mountant with DAPI（Invitrogen）封片。共聚焦显微镜图像使用Zeiss LSM710（Carl Zeiss）采集。

使用ImageJ对回肠外肌层中的CD45染色进行定量。使用2到4张图像的平均荧光强度来评估外肌层中的平均荧光强度。平均强度以假手术组为基线进行归一化。

2.6.3 Wholemount Staining of LMMP

分离的LMMP组织在4%多聚甲醛（VWR）中固定1小时。使用封闭缓冲液（PBS，5% BSA [Dutcher]和0.5% Triton X-100 [Sigma]）进行封闭和透化1小时。然后，样品在封闭缓冲液中稀释的抗鸡GFP抗体（1:200; ab13970; Abcam）中孵育48小时。一抗使用封闭缓冲液中稀释的Alexa Fluor 633标记的山羊抗鸡IgY二抗（1:1000; A-21103; Thermo Fisher）检测。细胞核用DAPI（1 μg/mL in PBS; Sigma）染色20分钟。最后，样品使用ProLong Gold Antifade（Thermo Fisher Scientific）封片。共聚焦图像在Opera Phenix（Revvity）高内涵筛选系统上采集。图像在整个样品厚度上以2 μm间隔采集。使用Harmony软件进行3D分析，允许检测细胞核和YFP⁺细胞。YFP⁺细胞的数量报告为单位表面积。

2.7 Quantification of CCL2 Chemokine

回肠外肌层组织在Precellys管中以5000 rpm均质30秒，两次。通过以4500 rpm离心5分钟分离所得上清液中的蛋白质。使用Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA Protein Assay（Thermo Fisher）测定总蛋白量。使用Mouse CCL2/JE/MCP-1 Quantikine ELISA Kit（Bio-Techne）按照制造商说明测量回肠外肌层中CCL2趋化因子的浓度。

2.8 Cytofluorometric Analysis

2.8.1 Cell Preparation From Ileal Muscularis Externa

如前所述，分离回肠肌层的免疫细胞，并作了一些修改。回肠肌层在含有2 mg/mL Dispase II（Roche）、0.4 mg/mL Collagenase D（Sigma）、5%胎牛血清（Sigma）的RPMI（Thermo Fisher）消化溶液中于37°C缓慢搅拌孵育30分钟。消化后，将细胞通过70 μm细胞筛以去除未消化的碎片。使用血细胞计数器计数细胞，并全部用于流式细胞术。

2.8.2 Cell Staining and Flow Cytometry Analysis

细胞在PBS中与Live Dead Fixable Aqua（Thermofisher）在4°C孵育15分钟。然后，细胞在含有2%胎牛血清和0.01%叠氮化钠（Sigma）的FACS缓冲液中与以下抗体（来自Miltenyi Biotech或Becton, Dickinson）染色：FITC标记的抗CD45（REA737）、PE-Cy7标记的抗CD11b（REA592）、PE标记的抗F4/80（REA126）、APC-Cy7标记的抗Siglec-F（REA798）、vioblue标记的抗Ly6C（REA796）、Percpvio700标记的抗Ly6G（REA526）和AF647标记的抗CX3CR1（Z8-50）。细胞在分析前用FACS缓冲液洗涤。单核细胞为CD45⁺ CD11b⁺ F4/80^? Siglec-F^? Ly6G^? Ly6C⁺。中性粒细胞为CD45⁺ CD11b⁺ F4/80^? Siglec-F^? Ly6G⁺ Ly6C^low。嗜酸性粒细胞为CD45⁺ CD11b⁺ F4/80^low Siglec-F⁺。总巨噬细胞为CD45⁺ CD11b⁺ F4/80⁺ Siglec-F^?。正在分化的未成熟巨噬细胞表达低水平的CX3CR1，而成熟巨噬细胞表达高水平的CX3CR1。流式细胞术分析使用的门控策略如图S1所示。使用Fortessa X20流式细胞仪（BD Biosciences）进行流式细胞术。然后使用FlowJo v10软件（BD Biosciences）分析数据。

2.9 Data and Statistical Analysis

数据以个体值和平均值±SEM呈现。使用GraphPad Prism 10.00 [GraphPad software]进行统计分析。多组比较采用Kruskal-Wallis检验，随后进行Dun多重检验校正。两组比较采用Mann-Whitney检验。使用Spearman相关系数评估十二指肠直径和小肠转运之间的相关性。p值 < 0.05被认为具有统计学意义（p < 0.05, p < 0.01, p < 0.001 and p < 0.0001）。

3 Results

3.1 Intestinal Manipulation Induces Postoperative Ileus in Mice

采用各种手术程序在小鼠中建立诱导肠道转运停止的模型。麻醉后，我们进行了从单纯剖腹术（假手术）到外置小肠（带或不带盲肠），随后进行或不进行3次来回肠道操作（IM2′），或涉及10分钟肠道操作（IM10′）的手术。在灌服炭末溶液后24小时评估胃排空功能和小肠转运。然而，外置肠道（带或不带盲肠），以及使用湿润棉签操作小肠进行或不进行3次来回操作，在不到50%的小鼠中诱导了胃排空缺失，在某些情况下小肠转运也缺失。但是，基于10分钟肠道操作（IM10′）的程序（模拟外科医生在寻找肠道病变时的动作）导致所有接受此肠道操作的小鼠出现胃排空缺失和肠道转运急剧减慢。炭末在MI后仅覆盖了小肠的36%，而在单纯剖腹术后覆盖了小肠的67%；所有小鼠的肠道转运减半。此外，正如在表现为肠管扩张的肠梗阻患者中所观察到的，10分钟肠道操作后观察到十二指肠扩张。分析显示十二指肠直径与炭末推进之间存在显著的负相关。这些发现共同表明，10分钟的肠道操作可可靠地诱导术后肠梗阻。

在几天内研究了整个胃肠道的转运。IM10′程序后96小时，消化转运部分恢复。在接受肠道操作的小鼠笼子中观察到更多的粪便积累，并且炭末沿着小肠移动了更长的距离。然而，胃排空尚未恢复。这一观察结果证实，10分钟的肠道操作诱导了病理性肠梗阻。

3.2 Anastomosis Is Not Required to Induce Postoperative Ileus in Mice

为了尽可能接近人类消化外科的当前实践，我们进行了带吻合术的操作。在肠段切除后，需要进行吻合术以维持消化连续性。因此，为了评估我们的模型与临床实践的相关性，我们执行了回肠-回肠吻合术模型，并将其与先前描述的IM10′程序进行了比较。回肠吻合术后，在大多数小鼠中未观察到胃排空，并且肠道转运也急剧减少。在术后24小时，回肠-回肠吻合组小鼠的炭末沿小肠覆盖的距离与IM10′组相同。这些数据表明，吻合术对于诱导术后肠梗阻不是必需的。此外，它们表明，简单地轻轻操作小肠10分钟就足以停止肠道转运，正如在切除病变的肠道手术后观察到的肠梗阻一样。

3.3 Intestinal Manipulation to Induce Ileus: Ex Vivo Functional Characterization

为了评估小肠不同段和结肠的肠道运动力，使用等张传感器测量了小肠三个部分（十二指肠、空肠和回肠）和结肠的自发收缩。这是在术后24小时对接受假手术或10分钟肠道操作的小鼠的肠道部分进行分析，以评估收缩幅度和频率。关于被操作的肠段（空肠和回肠），与假手术组相比，IM10′组的收缩幅度降低，但不影响频率。相反，与假手术组相比，10分钟肠道操作后24小时，十二指肠的收缩幅度增加，但频率没有差异。在结肠水平，与假手术小鼠相比，IM10′组中未观察到收缩幅度或频率的差异。这些数据表明，肠道操作后的运动力改变局限于胃和小肠，而不影响结肠运动力。

3.4 Cellular and Molecular Characterization of the Inflammatory Status in POI Mice Model

术后肠梗阻涉及一个显著的炎症阶段，主要位于人类肠道的肌层。为了描述接受肠道操作的小鼠的炎症情况，我们在术后2.5小时对回肠肌层进行了炎症介质qPCR分析。我们的结果显示，与假手术组相比，IM10′组中促炎介质显著增加（Mcp1, IL6, IL1b, TNFa, Icam1），而KC分析显示无显著差异。为了验证回肠肌层中促炎介质的升高，通过ELISA测定法评估了MCP-1/CCL2水平。术后24小时，IM10′小鼠回肠肌层中的MCP-1/CCL2水平与假手术小鼠相比有所升高。相反，在结肠肌层水平，肠道操作后与假手术小鼠相比，未观察到促炎介质（Mcp1, IL6, IL1b, TNFa, Icam1）的显著增加。

这些发现表明，炎症确实存在于被操作部位的肌层，而结肠水平似乎未受影响。

此外，在IM10′组小鼠回肠粘膜层进行的促炎介质比较分析显示，与假手术组的粘膜相比，促炎介质的转录水平没有变化。这些数据表明，肠道操作后炎症优先定位于回肠的肌层，正如在POI患者中观察到的那样。

进行组织学分析以观察组织改变，如先前在大鼠术后肠梗阻模型中所描述的那样。使用苏木精和伊红（HE）染色的组织学分析显示，肠道操作24小时后，肠绒毛结构没有改变。假手术小鼠和操作肠道小鼠的肠道结构相似。肠道操作和相关的局限于肌层的炎症与主要的组织学改变无关。

然而，POI先前以免疫细胞涌入肠道肌层为特征。为了评估我们小鼠模型中的这种涌入，在术后24小时通过免疫荧光在回肠水平进行了全白细胞（CD45）染色。与假手术组相比，在IM10′组小鼠的回肠肌层中观察到更高的CD45信号，表明存在免疫细胞的涌入。在结肠中，未检测到炎症标志物的上调，也未观察到CD45⁺细胞的涌入。此外，为了表征肠道操作24小时后的白细胞涌入，通过流式细胞术对回肠肌层内的髓系亚群进行了分析。我们观察到免疫细胞增加，其中大部分是髓系细胞。此外，中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞涌入外肌层，而总巨噬细胞没有显著变化。然而，单核细胞来源的巨噬细胞（表达低水平CX3CR1）增加，而常驻巨噬细胞（表达高水平CX3CR1）减少。总体而言，这些结果表明，肠道操作10分钟后24小时，炎症是由中性粒细胞、单核细胞和单核细胞来源的巨噬细胞的涌入所维持的。

4 Discussion

术后肠梗阻是腹部手术后发生的一种医源性并发症。与炎症相关的肠道转运停止是POI的特征。如今，尚无药理学分子在预防或治疗病理性POI方面显示出疗效。因此，开发小鼠模型对于理解其机制或测试治疗术后肠梗阻的药理学分子至关重要。文献中描述了两种POI小鼠模型。第一种由Vilz等人描述，包括外置小肠并使用两个棉签同时滚动动作排空从幽门到盲肠的所有管腔内容物。该模型存在一些局限性， notably 诱导了显著的粘膜组织学损伤。此外，棉签的压缩动作与消化外科期间外科医生执行的动作截然不同。因此，它可能导致人类病理学中未涉及的机制激活。

第二种小鼠POI模型由Van Bree等人描述。该协议是在小鼠中诱导POI的可靠程序。然而，它需要一个特制的仪器，可以在短时间内对小肠施加恒定压力。这种特定设备是内部制造的，并且该程序与外科医生的动作相去甚远。在这种情况下，有必要开发一种易于操作且更接近人类腹部手术的小鼠术后肠梗阻模型。

结肠吻合术，特别是在结直肠手术中，是最常与严重术后肠梗阻相关的手术之一。在小鼠中，由于小鼠结肠的脆弱性，该程序被证明具有技术挑战性。缝合无法维持组织完整性，导致所有动物迅速死亡。因此，我们对小鼠进行了肠道操作和回肠吻合术。该程序停止了肠道转运并阻止了胃排空。考虑到该程序漫长且精细，我们开发了一种在肠道转运缺陷方面与之相似的小鼠肠梗阻模型。理解POI的病理生理学途径需要基于一个简单而稳健的小鼠模型。外置和操作小肠10分钟，例如当外科医生寻找病变或切除严重受损区域时，诱导了胃肠道转运延迟和胃排空缺失。此外，尽管至少有三人执行了IM10′程序，但与其他实验组相比，接受10分钟操作的小鼠组中，食物团移动速度和胃排空的数据围绕平均值的离散度显著 smaller。该程序后，所有小鼠均表现出完全胃排空缺失；胃蠕动停止，正如吻合术后所观察到的那样。20分钟内，食物团覆盖了小肠总长度的 < 40%。与假手术组相比，推进力减半。与患者中观察到的一致，肠道转运延迟与十二指肠扩张相关。精确分析显示，肠道操作24小时后，小肠的蠕动运动受到该程序的影响。有趣的是，小肠的两个部分表现出相反的表型，被操作肠段的收缩幅度降低，而与十二指肠的收缩幅度增加形成对比，由于小鼠十二指肠和结肠之间的肠系膜褶皱，十二指肠未被操作。已有研究表明，十二指肠扩张与胃收缩松弛之间存在相关性，表明十二指肠扩张可能是导致胃轻瘫的原因，从而导致食物内容物停滞。此外，一些作者显示十二指肠活动与胃排空之间存在负相关关系，高十二指肠收缩活动导致胃排空减慢。

10分钟的肠道操作足以诱导严重的肠梗阻。事实上，首次粪便仅在肠道操作后3天多才观察到，并且胃排空仍然无效。这一观察结果与猪模型中观察到的以及患有病理性POI的患者一致。

多项研究表明，免疫细胞招募是肠道转运受损的原因。在本模型中，肠道操作24小时后，在外肌层中表征了大量单核细胞、中性粒细胞和未成熟巨噬细胞的涌入。正如Farro等人在另一个POI模型中非常 well described 的那样，10分钟的操作导致促炎细胞因子上调，作为从血流中招募免疫细胞到肌层的第一个事件。这种炎症反应仅限于肠组织的这一层，因为在粘膜中未观察到转录变化。此外，除了肌层中的这种免疫浸润外，未观察到组织学异常。

总之，这些数据使我们能够表明，IM10′程序能够以非常简单且可重复的方式诱导小鼠术后肠梗阻，模拟了人类实践中外科医生的动作。该程序引起的肠道转运缺陷与吻合术引起的缺陷相同。这个IM10′模型呈现了先前描述的所有术后肠梗阻特征，即胃排空和小肠转运受损，外肠肌层局部炎症，其特征是促炎介质增加和免疫细胞涌入。

因此，‘IM10’模型是一个非常 simple robust 的程序，不需要任何特定设备，模拟了临床实践，使得表征潜在机制或测试治疗术后肠梗阻的药理学分子成为可能。

Author Contributions

C.D., E.B., and N.V. conceived the study. C.D. and E.B. supervised the project. R.G., J.T., T.P., T.B., P.R., and S.W. performed the experiments and collected the data. A.C. carried out the imaging analyses. C.K. contributed to the isolated organ analyses. R.G., E.B., and C.D. drafted the first version of the manuscript. C.D. performed the review and editing. All authors read and approved the final version of the manuscript.

Acknowledgments

作者感谢US006动物饲养设施成员和INSERM/UPS/ENVT US006 CREFRE-Anexplo, Toulouse Purpan的组织病理学核心设施成员。我们也感谢INSERM UMR1291的细胞成像设施和流式细胞术平台成员。我们感谢N. Blanchard, N. Gaudenzio, and N. Abdullah (INSERM UMR 1291, Toulouse—France) 提供CX