尼日利亚东南部恶性疟原虫对哌喹耐药性分子标记物的首次调查：现状与警示

为解决尼日利亚缺乏哌喹(PPQ)耐药性分子监测数据的问题，研究人员开展了一项回顾性研究，通过检测pfcrt基因T93S、H97Y、F145I突变和pfpm2/3拷贝数变异，发现所有268份样本均未出现已知耐药标记，表明PPQ在DHA-PPQ(双氢青蒿素-哌喹)组合中仍有效，但需持续监测以防耐药性出现。

　　

在全球抗击疟疾的战场上，青蒿素联合疗法(ACT)一直是治疗无并发症恶性疟疾的一线方案。然而，这个强有力的武器正面临严峻挑战——疟原虫对青蒿素衍生物及其配对药物的耐药性正在全球蔓延。特别是在东南亚地区，双氢青蒿素-哌喹(DHA-PPQ)组合的治疗失败率显著上升，这与恶性疟原虫对哌喹(PPQ)产生耐药性密切相关。

科学家们已经发现，哌喹耐药性与pfcrt基因(恶性疟原虫氯喹耐药转运蛋白基因)的特定突变(T93S、H97Y、F145I)以及 plasmepsin 2/3(pfpm2/3)基因的拷贝数增加有关。这些分子标记物在东南亚地区广泛存在，但在非洲地区的流行情况尚不清楚。尼日利亚作为全球疟疾负担最重的国家之一，占非洲疟疾病例的26%，却缺乏相关的耐药性监测数据。

正是在这样的背景下，研究人员开展了这项开创性的研究，旨在评估尼日利亚东南部地区是否存在这些哌喹耐药性分子标记物，为当地抗疟政策的制定提供科学依据。这项研究结果发表在《Malaria Journal》上，为非洲地区的抗疟工作提供了重要参考。

研究人员主要采用了三种关键技术方法：使用299份2018-2019年采集自尼日利亚阿南布拉州Awka和Onitsha的存档患者样本；通过巢式PCR和桑格测序分析pfcrt基因外显子2和3的突变状态；采用实时定量PCR检测pfpm2和pfpm3基因的拷贝数变异，以β-tubulin作为单拷贝参考基因。

Pfcrt T93S、H97Y、F145I SNPs在阿南布拉州临床分离株中缺失

研究人员成功对268份患者样本进行了扩增和测序分析。结果显示，这些样本中均未发现与哌喹耐药性相关的三种单核苷酸多态性(SNP)，即外显子2中的T93S和H97Y突变，以及外显子3中的F145I突变。在外显子2中，研究人员发现了两个新的变异：K115I(第115位密码子AAA→ATA，导致赖氨酸变为异亮氨酸)和同义突变L111L(第111位密码子TTA→TTG)，每个变异仅在单个分离株中出现(0.4%)，被认为是中性多态性，没有已知的表型影响。

Pfpm2和pfpm3的拷贝数变异

研究人员还分析了pfpm2和pfpm3基因的拷贝数变异作为哌喹耐药性的潜在标记物。验证实验显示，RF7菌株(哌喹耐药性阳性对照)的pfpm2中位拷贝数为2.02，pfpm3为2.27。然而，所有临床样本中这两个基因的拷贝数均低于1.5(定义为基因扩增的阈值)，pfpm2的中位拷贝数为0.94，pfpm3为0.84。这表明在所研究的尼日利亚东南部地区，不存在pfpm2/3基因扩增现象。

研究结论与讨论部分指出，这项研究首次对尼日利亚的哌喹耐药性分子标记物进行了系统调查，结果显示在2018-2019年期间，尼日利亚东南部地区完全不存在经过验证的哌喹耐药性标记物(pfcrt T93S、H97Y、F145I突变和pfpm2/3基因扩增)。这一发现表明哌喹在DHA-PPQ组合中仍然是一个可行的配对药物。

然而，研究人员也强调需要保持警惕。尽管在非洲多个国家(包括坦桑尼亚、马里、乌干达、莫桑比克、布基纳法索、加蓬和刚果民主共和国)已经报道了pfpm2基因扩增现象，但这些扩增与DHA-PPQ治疗失败之间的关联在非洲地区尚未得到明确证实。这提出了一个重要问题：非洲菌株的哌喹耐药性是否可能涉及不同于东南亚主要模式的其他突变？

研究的局限性包括其回顾性性质、缺乏表型数据验证、仅筛查了部分已知耐药性标记物，以及样本来源相对局限等。尽管如此，这项研究为尼日利亚乃至西非地区的抗疟工作提供了宝贵的基线数据。

研究人员最后强调，虽然当前研究没有发现哌喹耐药性标记物，但这并不能消除耐药性出现的风险。随着DHA-PPQ在尼日利亚私人市场上的可获得性不断增加，持续的药物疗效和分子监测对于早期检测耐药性、确保疟疾治疗方法的长期有效性至关重要。这项研究为未来的监测工作奠定了基础，并突出了在非洲背景下扩大抗疟药耐药性分子标记物研究的重要性。