基于诱导神经干细胞外泌体（iNSC-Exo）的临床启发式多模式治疗通过调控小胶质细胞促进创伤性脑损伤恢复

《Advanced Science》：Clinically Inspired Multimodal Treatment Using Induced Neural Stem Cells-Derived Exosomes Promotes Recovery of Traumatic Brain Injury through Microglial Modulation

本文推荐了一项针对创伤性脑损伤（TBI）的创新性治疗研究。该研究开发了源自诱导神经干细胞（iNSC）的外泌体（iNSC-Exo）作为一种多功能治疗剂，并在临床启发下建立了两种给药模式：通过新型可注射水凝胶进行局部给药，以及通过狂犬病毒糖蛋白（RVG）靶向修饰进行全身给药。研究通过单细胞RNA测序（scRNA-seq）等先进技术，首次揭示iNSC-Exo主要通过影响小胶质细胞（Microglia）亚群（如Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb），并激活NRXN信号通路来调控神经元与小胶质细胞的突触连接，从而发挥其抗神经炎症和神经保护作用，最终促进TBI小鼠的功能和认知恢复。这项工作为TBI的临床管理提供了一个极具潜力的新型治疗平台。

　　

1 引言

创伤性脑损伤（Traumatic Brain Injury, TBI）是全球性的重大健康问题，每年导致数百万人伤亡，是青壮年死亡和残疾的主要原因。其严重程度根据格拉斯哥昏迷评分（Glasgow Coma Scale, GCS）可分为轻度、中度和重度。病理上，TBI可分为原发性损伤（如轴突死亡、神经炎症、神经化学变化和代谢功能障碍）和继发性损伤（如缺血缺氧性损伤、脑水肿、颅内压升高、脑积水和感染）。目前的治疗选择主要基于损伤严重程度，包括药物、手术和康复治疗，但尚无一种通用的治疗剂能同时适用于手术和药物治疗场景。

近年来，干细胞疗法，特别是神经干细胞（Neural Stem Cells, NSCs）和间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells, MSCs）疗法，在缓解TBI后遗症方面展现出潜力。然而，外泌体（Exosomes）——一种纳米级、脂质双层的细胞外囊泡，作为干细胞疗法的有效替代方案脱颖而出。它们继承了母细胞的治疗效应（如抗炎、免疫调节和组织再生），同时避免了细胞疗法相关的局限性。源自干细胞的外泌体（SC-Exo），例如神经干细胞外泌体（NSC-Exo），在治疗包括TBI在内的多种神经外科疾病中显示出巨大的临床前潜力。

然而，由于来源限制、培养中有限的扩增能力以及伦理考虑，NSCs可能并非大规模生产临床级外泌体的理想来源。近期研究通过体细胞重编程获得了小鼠成纤维细胞来源的诱导神经干细胞（induced Neural Stem Cells, iNSCs），为获取类NSC细胞的外泌体打开了新窗口。iNSC衍生的外泌体（iNSC-Exo）已在阿尔茨海默病和缺血性中风等神经系统疾病的管理中展现出潜力，但其在TBI等其他神经外科疾病中的疗效尚不清楚。

大多数关于SC-Exo治疗TBI的临床前研究采用过度简化的全身给药方式（如尾静脉注射），这可能无法反映临床实践的多样性。尽管约90%的TBI患者表现为轻度症状（GCS 13-15），但其余10%表现为中重度症状，通常需要手术干预。利用去骨瓣减压术等手术程序进行治疗剂的局部递送，相较于全身给药可减少外泌体在肝脏和脾脏的积累，同时提高脑部特异性富集。无论采用何种递送方式，都可以通过外泌体修饰或工程化来进一步增强其疗效，例如为静脉输注的外泌体添加靶向中枢神经系统（CNS）的狂犬病毒糖蛋白（Rabies Viral Glycoprotein, RVG）肽，或在颅骨切除术后通过局部应用的生物材料实现外泌体的持续释放。

本研究首次在临床前模型中开发了基于iNSC-Exo的“一体适用”治疗平台用于管理TBI。主要目的是确定iNSC-Exo是否能促进TBI恢复，并揭示其相对于NSC-Exo的治疗效果。次要目的是通过在临床前小鼠模型中模拟iNSC-Exo的全身给药和局部递送两种临床治疗选择，并分别通过RVG修饰和可注射水凝胶进行优化。最后，利用全转录组扩增单细胞RNA测序探索了iNSC-Exo治疗TBI的细胞和分子机制，重点揭示了小胶质细胞不同亚群与神经元之间的相互作用。

2 结果

2.1 神经球和外泌体的表征证明iNSC-Exo与NSC-Exo高度相似

为评估外泌体对TBI恢复的治疗效果，研究分离了NSC-Exo和iNSC-Exo用于临床前研究。在悬浮培养中，NSC和iNSC生成的神经球均呈现球形形态，且均呈神经干细胞标志物Nestin（红色）和SOX2（绿色）阳性。透射电子显微镜（TEM）显示外泌体呈杯状或椭圆形形态，直径小于200 nm。纯化外泌体的粒径分别为NSC-Exo 102 nm和iNSC-Exo 150 nm，证实了外泌体的纯化。流式细胞术显示，收集的NSC-Exo和iNSC-Exo样品中三种外泌体特异性蛋白标志物CD81、CD63和CD9均强表达。PKH26阳性表明NSC-Exo和iNSC-Exo均可被BV2小胶质细胞和PC12细胞吞噬，荧光斑点广泛分布于几乎所有细胞的细胞质中。结果表明iNSC-Exo和NSC-Exo在形态、分布和细胞内化方面高度相似。此外，剂量依赖性效应研究表明，外泌体剂量与细胞摄取量呈显著正相关。

2.2 iNSC-Exo与NSC-Exo在体外均能抑制神经炎症并改善轴突生长

为研究外泌体对小胶质细胞极化的潜在影响，将脂多糖（LPS）处理的BV2细胞与NSC-Exo和iNSC-Exo共培养。通过Q-PCR分析测定M1（如CD86、TNF-α和INOS）和M2（如CD206、TGF-β和IL4）极化标志物的mRNA水平。LPS处理上调了BV2细胞中M1标志物并下调了M2标志物。经NSC-Exo或iNSC-Exo治疗后，LPS诱导的BV2细胞M1标志物表达减少，M2标志物表达增加。此外，与仅LPS处理组相比，流式细胞术检测显示两个外泌体处理组的促炎细胞因子（如TNF-α）水平较低，而抗炎细胞因子（如IL4）水平较高。为模拟小鼠中枢神经系统的机械创伤，对PC12细胞进行划痕损伤并与NSC-Exo和iNSC-Exo共培养。使用Nestin（一种与中枢和周围神经系统发育早期阶段相关的中间丝蛋白）、神经丝蛋白200（Neurofilament protein 200, NF-200，一种对轴突运输和在生理条件下维持细胞形态至关重要的神经元特异性结构蛋白）和GAP-43（通常与轴突过程相关）来评估神经突生长能力。Q-PCR结果表明，用NSC-Exo或iNSC-Exo处理的PC12细胞显示Nestin、NF-200和GAP-43表达增加，提示轴突再生。同样，iNSC-Exo和NSC-Exo处理组中神经突长度显著增加，表明iNSC-Exo产生了与NSC-Exo相当的神经保护作用。

2.3 通过颅骨切除术和使用可注射水凝胶可实现外泌体对TBI损伤部位的局部递送

本研究制备并表征了一种新型可注射水凝胶，用作外泌体的递送载体。该水凝胶由羧甲基壳聚糖（Carboxymethyl Chitosan, CMCS）、海藻酸钠（Sodium Alginate, SA）并辅以D-葡萄糖酸δ-内酯（D-gluconic acid δ-lactone, GDL）组成，在生理条件下表现出优异的可注射性并形成凝胶。形态学分析显示，水凝胶具有相互连接且分布均匀的多孔结构，这是冻干过程中H₂O升华所致。傅里叶变换红外（Fourier-transform infrared, FTIR）光谱用于CMCS、SA和冻干水凝胶的化学表征。热重分析（TG）图谱显示，CMCS、SA和冻干水凝胶样品的第一阶段约60–200°C、第二阶段约200–300°C、第三阶段约300–800°C分别对应于吸附水和结合水的蒸发、大分子链断裂的分解以及分解产物的进一步分解。此外，SA、CMCS和水凝胶的初始热分解温度分别为222、237和175°C，其热分解速率呈下降顺序。最后，通过测量储能模量（G′）和损耗模量（G″）随时间的变化研究了水凝胶溶液的凝胶行为。CMCS/SA (1:1) 溶液在20°C孵育时的凝胶时间为547 ± 98秒，证实了其可注射的可行性。

为分析外泌体的体外保留和释放，使用BCA蛋白测定法评估了外泌体（Milk-Exo）从可注射水凝胶中的释放行为。大多数外泌体遵循缓释曲线，在28天内约有91.45 ± 16.27%释放到PBS中。这种外泌体从水凝胶中的持续释放主要归因于两种机制，即水凝胶溶胀促进的扩散和聚合物的逐渐侵蚀。通过使用IVIS Spectrum系统获取小鼠的荧光图像分析了外泌体的体内保留情况。到第14天，注射组残留的Milk-Exo显著少于植入组。此外，从第21天起，注射组中的Milk-Exo几乎被清除，而在植入组中持续存在。总的来说，水凝胶介导的保护和控制释放协同延长了外泌体在体内的保留时间并增强了长期疗效。因此，水凝胶植入组从第0天到第14天显示出持续且逐渐增加的DiR荧光信号。这些发现表明水凝胶有效防止了外泌体的清除并延长了其体内保留时间。最后，体内降解分析显示，水凝胶在原位注射到C57BL/6小鼠手术区域后4周内降解。与植入水凝胶接触的脑组织在不同时间点的组织学显微照片显示周围组织没有炎症反应迹象，表明水凝胶具有优异的生物相容性和生物可降解性。

2.4 局部递送iNSC-Exo可保护血脑屏障、减轻脑水肿并促进TBI小鼠的功能恢复

为全面验证使用可注射水凝胶（iNSC-Exo@Gel）局部递送iNSC-Exo的治疗效果，进行了一系列神经学实验。TBI常导致血脑屏障（Blood-Brain Barrier, BBB）严重破坏，引起脑水肿和其他严重并发症。首先，为评估TBI后BBB通透性，进行了伊文思蓝（Evans Blue, EB）外渗试验。在TBI后第7天，NSC-Exo@Gel或iNSC-Exo@Gel治疗均可降低损伤区域的BBB通透性，表明两种水凝胶负载的NSC-Exo和iNSC-Exo都能以同等效力保护BBB完整性。类似地，NSC-Exo@Gel或iNSC-Exo@Gel治疗显著降低了脑水含量，表明其具有潜在的抗水肿作用。最后，H&E染色显示两个外泌体治疗组均显著减轻了TBI诱导的组织损伤。

接下来，进行行为学评估以确认经NSC-Exo@Gel或iNSC-Exo@Gel治疗的TBI小鼠的功能恢复。使用平衡木试验和旋转棒试验评估运动平衡和协调性。结果表明，iNSC-Exo@Gel和NSC-Exo@Gel治疗均能 progressively 降低在所有测量时间点（第7、14、21和28天）的错步率，表明运动功能恢复增强。类似地，两个外泌体治疗组均表现出增强的旋转棒性能，与TBI组相比增加了1.5倍。

最后，获得组织学证据以进一步表征治疗效果。对TBI的神经炎症反应在继发性损伤的预后中起着关键作用。虽然TBI增加了小胶质细胞特异性表达的离子钙结合适配器分子1（Ionized calcium-binding adapter molecule 1, Iba-1）和星形胶质细胞特异性表达的胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein, GFAP）的水平，但NSC-Exo@Gel或iNSC-Exo@Gel治疗均能通过减少这两种标志物的表达来抑制神经炎症。同时，用局部递送外泌体治疗的小鼠显示与轴突过程相关的GAP-43和与神经元迁移相关的双皮质素（Doublecortin, DCX）显著上调，表明NSC-Exo@Gel和iNSC-Exo@Gel治疗在TBI后均能 comparable 地促进神经再生。

总的来说，行为测试和组织学研究证明了使用可注射水凝胶局部递送iNSC-Exo在治疗TBI过程中具有优异的治疗潜力，其疗效与NSC-Exo@Gel相当。这些结果得到了系统性生物安全性评估的进一步支持。H&E染色显示应用NSC-Exo@Gel或iNSC-Exo@Gel未发现明显的器官损伤证据。类似地，肝功能指标（如天冬氨酸氨基转移酶 [AST] 和丙氨酸氨基转移酶 [ALT]）和肾功能标志物（如肌酐 [CREA] 和尿素 [UREA]）保持不变，证实NSC-Exo@Gel和iNSC-Exo@Gel均未对肝肾功能产生不利影响。

2.5 RVG修饰策略通过全身给药增强iNSC-Exo在TBI小鼠脑中的体内富集

如前所述，只有10%表现为中重度疾病的TBI患者需要手术干预；大多数通过保守或药物方式进行管理。因此，通过静脉注射全身给药构成了一种主要的治疗方式。尽管外泌体主要由于其纳米级尺寸可以穿过BBB，但全身给药后在大脑中检测到的积累很少，大部分给药的外泌体存在于脾脏和肝脏。为克服这一障碍并改善外泌体在中枢神经系统的积累，通过用RVG肽修饰iNSC-Exos生成了脑靶向外泌体，该肽与乙酰胆碱受体特异性相互作用，促进病毒进入中枢神经系统的神经元细胞。在本研究中，使用生物正交点击化学技术以约50%的制备产率获得了RVG修饰的诱导神经干细胞衍生外泌体（RVG-iNSC-Exo）。尾静脉注射后，不同时间点的全身活体荧光成像显示基于DiD标记的脑荧光信号，与未修饰的iNSC-Exo相比，RVG-iNSC-Exo组在大脑中表现出显著更强的信号。此外，定量分析与这些发现一致，表明RVG-iNSC-Exo在体内对大脑具有优异的靶向能力。类似地，离体脑的荧光成像和定量进一步表明，在注射后24和48小时，RVG-iNSC-Exo的积累高于未修饰的外泌体。此外，定性和定量均显示这些外泌体主要积累在肝脏和脾脏，肺部有少量积累。最后，DiD和FITC信号与Iba-1免疫反应性的共定位表明RVG-iNSC-Exo被小鼠脑中的小胶质细胞摄取。

2.6 全身施用RVG修饰的iNSC-Exo可改善TBI小鼠的运动功能、提高认知能力并增强认知恢复

为研究RVG-iNSC-Exo在TBI小鼠中的治疗潜力，根据呈现的时间线进行了治疗协议和评估。首先，在旋转棒试验中，RVG-iNSC-Exo治疗的TBI小鼠与其他组相比表现出 superior 的运动恢复。钢丝悬挂试验（采用0到5的评分系统）进一步证实了这些发现，RVG-iNSC-Exo治疗的小鼠表现出增强的肌肉力量和减少的运动不对称性。

接下来，进行莫里斯水迷宫试验（Morris water maze test）以评估TBI后小鼠的学习和记忆能力等认知功能。结果显示，逃避潜伏期在5天训练期内逐渐减少。与未治疗的TBI小鼠相比，iNSC-Exo和RVG-iNSC-Exo治疗的TBI小鼠需要更短的时间找到隐藏平台。有趣的是，在5天训练中，RVG-iNSC-Exo组在逃避潜伏期方面表现出相对于iNSC-Exo组显著改善的性能。这些发现表明RVG-iNSC-Exo能有效增强TBI后的认知恢复。此外，空间搜索策略的选择是空间学习过程中对逃生位置构建异中心图（allocentric map）发展的关键指标。这些策略可分为非空间策略、空间策略和重复搜索策略。TBI后，小鼠学习这些策略的能力降低，这反映在重复搜索策略的百分比更高。RVG-iNSC-Exo组空间策略的比例高于TBI组，表明RVG-iNSC-Exo治疗的TBI小鼠表现出更高的认知能力。在莫里斯水迷宫试验的第6天，进行了无平台的探查试验以评估记忆巩固。此外，结果显示RVG-iNSC-Exo组的小鼠能够记住平台的位置，这通过它们的游泳路径证明，与未治疗TBI组的混乱路径相比，它们的路径更直接。与TBI组相比，RVG-iNSC-Exo组在目标象限花费了更多时间并增加了平台穿越次数。

局部场电位（Local Field Potential, LFP）代表了神经组织内的综合电活动。TBI可导致神经元结构（如细胞体和轴突）的显著破坏，这可能阻碍电信号的正常传输并改变神经元的内部环境。因此，这些变化可以影响LFP的频率、振幅和其他电特性。LFP可根据频率分为不同的波段，包括delta（δ, 0.5–4 Hz）、theta（θ, 4–8 Hz）、alpha（α, 8–13 Hz）、beta（β, 13–30 Hz）和gamma（γ, 30–45 Hz），不同频率波段反映了大脑的不同状态。在TBI组中，与对照组相比，0–45 Hz范围内的振荡功率显著降低。值得注意的是，RVG-iNSC-Exo治疗部分恢复了该频率范围内减弱的振荡功率。海马体与学习和记忆过程密不可分，θ和γ振荡与这些过程的认知功能相关。我们的研究结果表明，全身施用RVG-iNSC-Exo可以挽救TBI诱导的在认知任务期间θ和γ活动的破坏。

最后，脑组织照片检查显示TBI组有显著的结构缺陷。然而，RVG-iNSC-Exo组显示出显著保留的组织结构。为了进一步验证这些发现，我们使用H&E染色切片对病变区域进行了定量分析。结果一致表明，与TBI组相比，RVG-iNSC-Exo组和iNSC-Exo组的组织损伤显著减少，证实了我们先前的观察。进一步的H&E染色图像和血清生物标志物检测证实了RVG-iNSC-Exo的安全性，没有发现对主要器官的毒性证据。

2.7 单细胞测序揭示小胶质细胞是iNSC-Exo治疗TBI小鼠脑中受影响的主要细胞类型

为阐明iNSC-Exo在TBI后治疗效果的基本机制，对损伤后第30天来自对照组、TBI组和iNSC-Exo组小鼠的皮质和海马组织进行了单细胞核RNA测序（single-nucleus RNA sequencing, snRNA-seq）。共分析了113,802个细胞，其中对照组37,767个，TBI组42,240个，iNSC-Exo组33,795个。分析确定了11种不同的细胞类型，每种都具有独特的表达特征，例如小胶质细胞、未成熟神经元、少突胶质细胞、纤毛细胞、周细胞、GABA能神经元、谷氨酸能神经元、星形胶质细胞、室管膜细胞、内皮细胞和少突胶质前体细胞。此外，在这些细胞类型中观察到已知标记基因转录本的差异富集。

单细胞转录本被组织成簇，并根据已知标记和既定证据识别细胞类型。基因集变异分析（Gene Set Variation Analysis, GSVA）显示，与TBI组相比，iNSC-Exo治疗组在三种神经元亚型中表现出与神经再生、胚胎大脑发育、学习和记忆相关的通路显著增强富集。此外，与TBI组相比，这些通路在iNSC-Exo治疗组中更为突出。

利用细胞比例分析，发现经TBI及随后iNSC-Exo治疗的小鼠大脑中小胶质细胞、少突胶质细胞和星形胶质细胞的比例增加，治疗组表现出 notably 更高的比例。为确定iNSC-Exo治疗后脑损伤部位受影响最显著的细胞群体，进行了Augur分析，揭示与TBI组相比，小胶质细胞是iNSC-Exo治疗组中最突出的细胞类型，同时在TBI组与治疗组相比显示出显著变化。因此，我们随后的研究重点放在小胶质细胞上。亚群分析显示小胶质细胞可分离为五个不同的亚群，通过UMAP图可视化。这些亚群根据其特征基因命名，即Microglia_Nrg3、Microglia_Mbp、Microglia_Rarb、Microglia_Atp1a2和Microglia_Trem2，每个亚群的特异性基因在UMAP图中描绘。

2.8 具有低分化状态的Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb亚群通过iNSC-Exo治疗介导神经修复功能

为进一步阐明这些小胶质细胞亚群之间的区别，进行了伪时间分析，揭示了五种小胶质细胞亚型之间独特的分化轨迹。值得注意的是，Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb主要位于轨迹左侧的初始发育阶段，而其余三个亚群主要集中在发育轨迹的中间和终末阶段。小胶质细胞亚群的密度分布和发育轨迹特征分析显示，iNSC-Exo治疗组和对照组表现出相似的细胞密度模式和发育轨迹。具体来说，两组在Microglia_Trem2位置均表现出较高的细胞密度，且在轨迹右下支有更丰富的细胞。相反，TBI组在Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb位置显示细胞密度增加，而在右下支的细胞数量减少。沿伪时间轨迹的基因表达模式综合分析显示，Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb在伪时间初始阶段表现出 elevated 的基因表达水平。此外，热图分析根据时间变化确定了四个不同的基因表达簇。

为证实Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb的低分化状态，进行了CytoTRACE分析，这些亚群获得了更高的分数。这些小胶质细胞亚群在iNSC-Exo组和TBI组之间上调和下调基因的比较分析显示，Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb在五个亚群中表现出最显著的基因表达差异，表明已识别DEGs的潜在功能重要性。

基于这些发现，对图7G中簇1的基因进行了基因本体（Gene Ontology, GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG）富集分析。这些基因在Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb亚群中表达水平升高。分析显示，参与突触和轴突信号通路的基因显著富集。此外，几个典型突触相关基因的伪时间分布分析表明它们在伪时间早期阶段表达显著。这表明这两个小胶质细胞亚群可能具有与突触和轴突过程相关的功能作用。

2.9 iNSC-Exo治疗可通过激活NRXN信号通路改善小胶质细胞与神经元之间的突触连接

随后，进行了CellChat分析以检查对照组、TBI组和iNSC-Exo组之间细胞-细胞通讯的变化。观察表明，TBI组和iNSC-Exo组中细胞相互作用的数量均增加，且在iNSC-Exo组中观察到更 substantial 的增强。进一步分析确定Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb是作为信号发送者到作为信号接收者的神经元的重要信号发送者，在所有三组中均如此。值得注意的是，这些相互作用在TBI组和iNSC-Exo组中更为 pronounced。这一发现通过说明信号发送和接收强度的权重图得到进一步证实，该图表明Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb在iNSC-Exo组中表现出与神经元增强的信号传输和接收。

为进一步证实Microglia_Nrg3/Microglia_Rarb与神经元之间的相互作用，我们对三个实验组的脑切片进行了免疫荧光染色，并量化了Nrg3+/Rarb+非神经元细胞与NeuN+神经元之间的距离。定量分析显示，与对照组相比，TBI组和iNSC-Exo组中位于NeuN+神经元0–20 μm和0–40 μm范围内的Nrg3+/Rarb+非神经元细胞比例更高。值得注意的是，iNSC-Exo组在这些相互作用距离内的细胞比例甚至更大，进一步证实了先前识别的细胞通讯模式。

为进一步研究潜在的重要信号，我们分析了TBI组和iNSC-Exo组的信号比例。值得注意的是，与TBI组相比，iNSC-Exo组中NRXN和NRG信号增加。对小胶质细胞与神经元相互作用中NRXN和NRG信号传导的更全面检查也阐明了这一现象。随后，对三组之间小胶质细胞与神经元相互作用的信号流差异进行了比较分析。这进一步证实了NRXN和NRG信号通路在TBI组和iNSC-Exo组之间表现出显著差异。

相应地，使用示意图检查了每个小胶质细胞亚群与神经元之间细胞间配体-受体相互作用的强度。我们的调查显示，源自Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb的Nrxn1-3与神经元中的各种突触蛋白（包括Nlgn1）相互作用。此外，这些受体-配体相互作用在TBI后减弱，并在iNSC-Exo治疗后得到加强。此外，Nrg1-3与Erbb44之间的受体-配体相互作用在三组中表现出与Nrxn1-3-Nlgn1观察到的相互作用强度相似的变化。GSVA进一步证实，iNSC-Exo治疗后，Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb亚群表现出与神经再生、发育和自噬相关的功能 enhanced 调节。转录因子调控分析确定了两个可能调控NRXN和NRG表达的转录因子，包括Bclaf1和Foxp2。这些TFs在iNSC-Exo组的Microglia_Nrg3和Microglia_Rarb亚群中共享更高的调节子（regulon）活性。这一发现可能阐明了这些转录因子在iNSC-Exo治疗后调节NRXN和NRG信号传导中的积极影响。

3 讨论

在全球范围内，TBI每年导致数百万人死亡，并且仍然是青壮年死亡和残疾的主要原因。鉴于原发性损伤的不可逆性，预防继发性损伤在临床实践中至关重要。治疗方案根据TBI的严重程度而有显著差异，主要包括手术（例如，急性期对严重病例进行开颅手术）和药物（例如，急性期后对轻度病例使用选择性血清素再摄取抑制剂）。目前尚无适用于TBI手术和药物两种管理背景的通用治疗剂。据我们所知，本研究首次将iNSC-Exo应用于TBI治疗。我们的综合性工作旨在使用小鼠模型模拟临床实践，主要关注三个方面。首先，我们证实iNSC-Exo可以促进TBI恢复，并揭示了其