肥胖通过损害皮肤屏障功能促进小鼠过敏性致敏的机制研究

本综述系统阐述了肥胖如何通过损害皮肤屏障功能（如下调紧密连接蛋白Claudin-1和丝聚蛋白Filaggrin表达）促进过敏性致敏的新机制。研究发现高脂饮食（HFD）诱导的肥胖会显著增加经皮水分流失（TEWL），并引发Th17偏向的免疫反应，从而加剧MC903诱导的特应性皮炎（AD）样炎症和卵清蛋白（OVA）介导的食物过敏。该研究为肥胖相关过敏性疾病提供了重要的病理生理学见解和治疗靶点。

　　

1 Introduction

肥胖已成为重大公共卫生问题，其与特应性皮炎（AD）等并发症的关联日益受到关注。AD是一种以瘙痒和湿疹性病变为特征的慢性炎症性皮肤疾病，通常由环境因素和免疫失调加剧。肥胖与AD之间的关系复杂，有证据表明肥胖可能增加AD发生风险并加重其严重程度。这种关联在全球肥胖率上升的背景下尤为令人担忧。AD主要由功能失调的皮肤屏障驱动，该屏障允许过敏原和刺激物穿透皮肤，引发炎症反应。皮肤屏障受损的特征是经皮水分流失（TEWL）增加，导致干燥和刺激。这种屏障功能障碍通常与各种免疫细胞的激活相关，包括2型辅助T细胞（Th2）、Th17细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和2型先天淋巴样细胞（ILC2s）。这些细胞通过产生白介素（IL）-4、IL-5和IL-13等促炎细胞因子，进一步加剧皮肤炎症并促进屏障损伤。肥胖与系统性炎症和菌群失调相关，可能损害皮肤屏障功能。肥胖个体的脂肪组织产生瘦素和TNF-α等促炎介质，不仅局部而且系统性加剧炎症。这种炎症环境可导致皮肤免疫细胞（如树突状细胞或γδ T细胞）功能障碍，这些细胞对维持角质形成细胞稳态至关重要。在肥胖条件下，这些γδ T细胞功能受损，导致皮肤屏障功能障碍和对银屑病和湿疹等炎症性皮肤病的易感性增加。类似地，皮肤中的T细胞在小鼠模型中更倾向于通过混合Th1/Th17反应而非对MC903治疗的“经典”Th2反应来促进AD样炎症。因此，研究假设肥胖损害皮肤屏障完整性，导致过敏性致敏 facilitated，部分由改变的皮肤免疫反应介导。研究旨在（1）表征高脂饮食（HFD）与对照饮食（CD）相比小鼠皮肤屏障的结构和功能变化；（2）评估肥胖小鼠在MC903诱导的AD样炎症模型中的免疫反应；（3）使用卵清蛋白（OVA）表皮致敏模型评估皮肤屏障破坏的功能后果。此外，研究还调查了观察到的效应是否依赖于皮肤微生物组。

2 Methods

研究采用饮食诱导的肥胖小鼠模型，起始使用6-8周龄雄性C57BL/6J小鼠，将其维持在高脂饮食（HFD）或对照饮食（CD）2-14周。在整个研究过程中，不同时间点进行了各种测量：每周记录体重；每两周评估TEWL以监测皮肤屏障功能。对于基因表达分析，在HFD喂养前及2、6、10和14周后分析小鼠。为了诱导过敏反应，小鼠在HFD或CD喂养8周后接受处理，并维持相应饮食。在MC903诱导的皮炎阶段，每天测量耳厚度7天。流式细胞术在MC903处理结束（第7天）和OVA攻击后（第17天）对耳和耳引流淋巴结样本进行；ELISA用于检测再刺激淋巴结细胞72小时后的细胞因子，OVA特异性抗体在最终OVA攻击后3天测量血清样本。

小鼠从Charles River（德国Sulzfeld）购买。动物饲养在无特定病原体设施中。小鼠自由获取食物和水，每天检查福利。所有动物实验均符合德国动物保护法，并得到下弗兰肯联邦政府批准。

年龄匹配的小鼠从6-8周龄开始维持高脂饮食（60%千卡脂肪，D12492；ssniff Spezialdi?ten，Soest，德国）或对照饮食（10%千卡脂肪）2-14周。每周记录体重。为了评估微生物组对饮食诱导肥胖的影响，通过口服灌胃给予广谱抗生素（氨苄青霉素、庆大霉素、甲硝唑、新霉素、万古霉素）每周两次。

使用TEWAmeter（Courage+Khazaka electronic GmbH，科隆，德国）测量TEWL，通过量化皮肤表面水分蒸发（g/h/m²）评估皮肤屏障功能。纳米探针放置在异氟烷麻醉动物的耳背侧至少60秒以稳定读数。使用MPA CT Plus软件记录TEWL。

MC903是一种合成维生素D3类似物，已有效用于小鼠模型诱导AD样皮肤病变，其特征是耳厚度增加、红斑、干燥和显著抓挠行为。这些病变与增强的2型细胞因子反应和先天淋巴样细胞激活相关，反映了与人类AD相当的免疫学和组织病理学特征。在HFD喂养8周后（皮肤屏障已受损的时间点），小鼠每天接受4 nmol MC903（Cayman Chemical，Ann Arbor，MI）在乙醇中局部应用于耳背侧，持续7天。在异氟烷轻麻醉下，每天使用数字厚度规（INSIZE，Siegen，德国）测量耳厚度。第7天，解剖耳和耳引流淋巴结用于组织学、RNA或流式细胞术制备。

小鼠维持CD或HFD 12周。然后在第0、3、5、8、10和12天将卵清蛋白（10 mg/mL；Sigma）在10 μL油中应用于耳背侧。作为阳性对照，我们对CD小鼠进行胶带剥离以破坏皮肤屏障。因此，用异氟烷麻醉小鼠，使用胶带剥离耳背侧皮肤六次，每隔一天持续2周，然后表皮应用OVA到耳。最终OVA挑战后3天从面静脉采血测量血清中OVA特异性IgG1和IgE。最终OVA挑战后四天，小鼠通过口服灌胃接受100 mg OVA在200 μL PBS中。在OVA挑战前和每10分钟后测量直肠温度。

小鼠通过颈椎脱位处死。耳在毛线上方基部切断，皮肤（4×4 cm²）在用脱毛膏去除毛发后从胁腹获取。收集耳和腹股沟淋巴结。耳分为背侧和腹侧两半。皮肤和耳然后在HBSS培养基中剪成细片以促进组织消化。用剪刀剪碎后，皮肤和耳样本在37°C热摇床中与胶原酶D（0.5 mg/mL）、DNase I（0.2 μg/mL）和liberase（0.25 mg/mL）在HBSS中孵育90分钟。消化后，组织通过100 μm细胞筛过滤，使用注射器 plunger。淋巴结通过70 μm筛网过滤，使用注射器背面。

单细胞悬液计数并用Zombie aqua可固定染料（Biolegend）在PBS中4°C染色30分钟，Fc受体用10 μg/mL纯化抗-CD16/32抗体（克隆93；eBioscience）在FACS缓冲液（PBS，2% FBS和Na₃N）中室温阻断5分钟。用FACS缓冲液洗涤后，细胞用表中列出的抗体4°C染色20分钟。

嗜碱性粒细胞定义为CD45⁺CD49b⁺CD200R3⁺，嗜酸性粒细胞为CD45⁺Siglec-F⁺CD11b⁺SSC^hi，中性粒细胞为CD45⁺Ly6G⁺，经典激活巨噬细胞（CAM）为CD45⁺CD64⁺Ly6C^hi，替代激活巨噬细胞（AAM）为CD45⁺CD64⁺CD206⁺/PD-L2⁺。对于转录因子细胞内染色，使用FoxP3染色缓冲液试剂盒（eBioscience）按照制造商说明进行。Th1细胞鉴定为CD45⁺CD4⁺Tbet⁺，Th2细胞为CD45⁺CD4⁺GATA3⁺，Th17细胞为CD45⁺CD4⁺Rorγt⁺，调节性T细胞（Treg）为CD45⁺CD4⁺Foxp3⁺，ILC2为CD45⁺lin^?Thy1⁺GATA3⁺。

样本在Northern Lights光谱流式细胞仪（Cytek Biosciences，Fremont，CA）上获取。使用荧光减一对照（FMO）确保正确设门。数据通过FlowJo软件（版本10.10）分析。

淋巴结（2×10⁵细胞）用1 μg/mL包被抗-CD3（克隆：145-2C11）和0.5 μg/mL抗-CD28在RPMI 1640（+10% FCS，L-谷氨酰胺，青霉素/链霉素）中添加20 ng/mL IL-2再刺激。细胞在37°C，5% CO₂孵育72小时。IL-17A和IL-13 ELISA（Peprotech）按照制造商说明进行。

为了检测OVA特异性抗体，板用50 μL鸡OVA（Sigma）在PBS（20 μg/mL）中包被，并在4°C湿 chamber 中 overnight 孵育。板用洗涤缓冲液（0.05% Tween-20在PBS中）洗涤，随后用3% BSA在PBS中阻断2小时。洗涤后，应用血清样本并在室温孵育2小时。碱性磷酸酶偶联抗-IgG1（Southern Biotech）在1% BSA在PBS中添加到样本中，孵育1小时。使用pNPP作为底物，在405 nm测量吸光度。

用于RNA分离的器官在液氮中速冻，并存储在-80°C直至RNA分离。对于RNA分离，使用Trizol和不锈钢珠（5 mm）在 screw cap 微量离心管中。使用Bead Ruptor 24（Omni International，Kennesaw，GA）破裂组织。样本转移到1.5 mL Eppendorf管中，RNA使用氯仿法分离。RNA浓度在ND-100分光光度计（Nanodrop）上测量。RNA使用高容量cDNA逆转录试剂盒（Applied Biosystems）逆转录为cDNA。使用SYBR select master mix（Life Technologies）在ViiA7实时PCR系统上进行RT-PCR。靶基因（Il13、Il33、Il17a、Il17f、Flg、Cldn1、Lep、Adipoq、Dsg3、Dsg1、Ivl、S100a9、Ocln）和管家基因（Hprt1）的引物列于表中。

圆形皮肤 punch 活检（约1 cm²从胁腹获取）在明胶海绵（Cutanplast，Henry Schein Dental，德国）上在24孔板中37°C培养3-5天。皮肤活检的真皮侧放置在手术海绵上，海绵浸泡在EpiLife培养基（Gibco）中。外植体维持在气液界面，不直接接触培养基。每2-3天更换培养基，每三天更换海绵。

从成年小鼠尾巴获取角质形成细胞。简要地，成年小鼠尾巴皮肤用4 mg/mL dispase（Gibco）在KC基础培养基（Thermo）中4°C消化 overnight。表皮从真皮分离，并用TrypLE（Thermo）在水平摇床上处理20分钟。然后从皮肤物理释放表皮细胞，并在胶原（5 μg/cm²）预包被的24孔板上以10×10⁴ cells/cm²密度在角质形成细胞生长培养基（KC基础培养基，HKGS，青霉素/链霉素，250 μg/mL两性霉素B）中培养5天。在第1天和第3天更新培养基。第5天，通过调整CaCl₂至0.2 nM 48小时将细胞终末分化为角质形成细胞。

耳和皮肤在4% PFA固定后嵌入Tissue Tek。皮肤在固定前放置在小纸板上以维持结构。使用CryoStar NX70冷冻切片机切片。收集7-9 μm厚切片在玻璃片上用于常规苏木精和伊红（H&E）染色。对于免疫荧光染色，组织切片在用兔抗-ZO-1（Abcam）和小鼠抗-Claudin-1抗体（Invitrogen）染色前用大鼠血清和1% BSA阻断，随后用AlexaFlour488偶联驴抗-兔IgG（Jackson）和AlexaFlour647偶联驴抗-小鼠IgG（Jackson）二抗。染色切片然后用含DAPI的Fluoroshield封片。图像在Keyence BZ-X810上获取。使用ImageJ（1.54p；Fiji）软件分析图像，通过分析每组四只小鼠至少三个染色切片，来自两个独立实验。

为了分析微生物组成，从WT小鼠的皮肤拭子和粪便 pellets 中分离DNA，使用Quick-DNA Fecal/Soil Microbe Miniprep Kit或Quick-DNA/RNA Miniprep Plus Kit（Zymo Research）按照制造商说明进行。16S rRNA基因扩增、文库制备和测序如他处描述，但使用靶向16S V3–V4区域的引物27Fmod 5′ AGRGTTTGATCMTGGCTCAG 3′和519R 5′ GWATTACCGCGGCKGCTG 3′。零半径操作分类单元（zOTUs）使用USEARCH v11通过IMNGS服务器确定。鉴定zOTUs的分类使用SINA与SILVA数据库发布138.2和NCBI核苷酸BLAST进行。所有进一步分析使用自定义脚本利用phyloseq包在R v4.5.1内进行。测序数据 deposited under BioProject accession number PRJNA1299357。

小鼠随机分配到处理和对照组。流式细胞术数据使用FlowJo软件（Treestar，v10.10）分析。使用GraphPad Prism Software（v10）进行统计分析。数据集中异常值通过Rout方法识别，正态分布通过Shapiro–Wilk检验确定。从重复实验计算均值和SEM。为了确定统计显著性，进行单因素ANOVA与Tukey多重比较检验、Student t检验或Mann–Whitney U检验。统计显著性定义为p < 0.05。仅相关统计显示在图中。

3 Results

3.1 Obesity Disrupts Skin Barrier Integrity

肥胖与银屑病和特应性皮炎等皮肤炎症发展相关。这里，皮肤屏障通常受损，构成过敏发展的风险因素。为了解决肥胖是否影响小鼠皮肤屏障完整性的问题，我们将小鼠维持在高脂饮食12周。HFD小鼠皮肤的H&E染色显示，除了预期的脂肪组织层扩张外，表皮显著改变，其特征是厚度增加和明显细胞浸润。因此，我们使用经皮水分流失（TEWL）作为泄漏皮肤屏障的指标，每两周测量皮肤屏障完整性。确实，从开始肥胖饮食12周后，TEWL从CD的7 g/m²/h显著（p = 0.0018）增加到17 g/m²/h。此外，我们评估了与完整皮肤屏障功能相关的基因表达。丝聚蛋白是维持完整皮肤屏障的关键蛋白。这里，我们观察到Flg显著减少，表明皮肤完整性丧失。类似地，提供角化细胞结构支持的外皮蛋白、紧密连接组分claudin-1和 desmosomes 跨膜糖蛋白组分 desmoglein-3 的转录本在HFD小鼠中均显著下调，而我们未观察到 altered Dsg1表达。使用claudin-1和紧密连接蛋白Zonula occludens-1（ZO-1）的免疫荧光染色，我们观察到HFD小鼠皮肤中表达减少。这些结果表明HFD喂养导致皮肤屏障功能显著损害。

3.2 Skin Barrier Proteins Are Downregulated Early During Diet-Induced Obesity

我们有兴趣探索当小鼠变得肥胖时皮肤屏障多快被破坏。随时间测量显示，TEWL在HFD开始后2周已经增加，从4周开始显著增加。HFD处理小鼠TEWL的这些变化反映在皮肤屏障基因表达的快速下调中。紧密连接在HFD上2周早期受损，皮肤中丝聚蛋白表达也在2周后下降。有趣的是，随着HFD时间增加，抗菌肽S100a9上调，表明持续的抗菌反应—可能由皮肤微生物组转变诱导，细菌现在能够渗透到肥胖期间受损皮肤的更深层。瘦素表达仅在HFD上14周后开始增加，这可能表明在皮肤早期免疫调节中作用有限。

我们进一步调查了肥胖中缺陷皮肤屏障是否影响皮肤和皮肤引流淋巴结中的免疫细胞群体。确实，我们可以观察到向促炎中性粒细胞和Ly6C^hi巨噬细胞的转变，而2型相关细胞如嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞以及抗炎替代激活巨噬细胞（AAMs）减少。这种促炎转变也反映在Th2细胞（CD上4.6%对HFD上1.6%；p < 0.05）和Tregs（CD上16.5%对HFD上12.8%；p < 0.05）频率减少，而Th17细胞在HFD喂养小鼠皮肤中增加（CD上1.1%对HFD上1.9%；p < 0.05）。然而，没有进一步刺激，引流淋巴结中的T细胞在IL-13和IL-17A细胞因子产生上没有差异，而IL-4和IFNγ产生在HFD期间减少。

3.3 Obesity Changes the Skin Microbiome

为了确定微生物组对肥胖诱导皮肤屏障损伤的影响，用广谱抗生素 cocktail 处理 respective 饮食的小鼠。有趣的是，用口服抗生素处理的HFD小鼠比HFD小鼠体重增加 slower。口服抗生素方案的有效性得到确认，因为抗生素成功减少了CD和HFD小鼠的肠道微生物组。皮肤微生物组成也响应口服抗生素治疗而改变，尽管程度小于肠道变化。有趣的是，抗生素治疗影响HFD小鼠比CD小鼠更显著，这也反映在beta多样性分析中。重要的是，饮食对微生物组成的影响比抗生素治疗更强。然而，肥胖小鼠的皮肤屏障 breakdown 独立于微生物组变化发生。

3.4 Obesity Facilitates Allergen Entry

先前研究观察到HFD小鼠在AD样炎症模型中发展出更Th17-和Th1驱动的免疫反应。因此，我们利用MC903诱导的AD样炎症模型，该模型与人类AD共享许多特征，如湿疹、发红、肿胀以及细胞群体招募，对HFD或CD喂养8周后的小鼠。我们每天将MC903（维生素D3类似物；calcipotriol）在乙醇中应用于耳背侧，并在7天过程中测量耳厚度。显著地，MC903处理的肥胖动物在处理后耳厚度增加68.8%，高度显著（p < 0.0001），与瘦对照动物（29.2%增加）相比。这表明肥胖小鼠中受损的皮肤屏障导致MC903相对于瘦动物更深渗透。确实，在MC903治疗第7天，我们观察到肥胖动物中浸润细胞增加以及真皮和表皮层增厚，而瘦动物中的增加在此时点仅 moderate。如上所示，虽然肥胖小鼠在MC903应用前有显著升高的TEWL，反映受损皮肤屏障，然而治疗后两组显示相似TEWL表明HFD诱导的皮肤屏障破坏与用炎症化合物处理的瘦小鼠皮肤屏障 breakdown 相当。当我们识别炎症皮肤中的细胞群体时，我们观察到肥胖动物中性粒细胞（CD上16.7%对HFD上34.4%；p < 0.05）流入增加以及促炎Th1（CD上0.05%对HFD上2.4%；p < 0.05）和Th17（CD上2.9%对HFD上9.3%）细胞在耳皮肤中加剧。AAM仅在HFD期间非显著减少。细胞因子分析支持向混合Th1/2/17反应转变，反映在HFD期间IFNγ和IL-17水平增加，而Th2相关细胞因子IL-4和IL-13在CD和HFD小鼠之间相当。

3.5 Increased Skin IL-17 Further Dysregulates Skin Barrier Proteins In Vitro

我们和其他人先前强调了IL-17及其受体作为AD和 atopic march 期间皮肤炎症中的重要细胞因子的作用。虽然我们在稳态条件下未观察到皮肤引流淋巴结中T细胞衍生的IL-17重大变化，但我们可以观察到用MC903处理的肥胖小鼠皮肤中Il17a和Il17f以及Il13和Leptin转录本增加，而Il33转录本相当。有趣的是，我们观察到Claudin-1转录本上调，表明在炎症条件下尝试恢复屏障功能。用MC903体外处理3天的皮肤外植体显示MC903自身可以降低皮肤屏障功能，但未导致IL-17表达增加。因此，MC903应用可能导致重要皮肤屏障蛋白 breakdown，这在具有IL-17偏向环境的肥胖小鼠中甚至更显著。观察到的Il17a和Il17f表达增加使我们推测皮肤中IL-17的存在可能通过直接作用于角质形成细胞来调节皮肤屏障功能。因此，我们分析了来自成年尾巴皮肤的角质形成细胞。我们可以确认IL-17处理角质形成细胞导致皮肤屏障蛋白转录本下调，包括丝聚蛋白、occludin和claudin-1。因此，我们得出结论，在肥胖小鼠的17型偏向皮肤环境中，响应炎症刺激有增加的IL-17A产生，通过直接作用于角质形成细胞进一步加剧皮肤屏障 breakdown。

3.6 Increased Allergic Sensitization in Mice on High-Fat Diet Promotes Food Allergy

为了确定肥胖小鼠受损的皮肤屏障是否导致皮肤和系统性过敏性致敏，我们将模型抗原卵清蛋白（OVA）—无额外佐剂—应用于CD或HFD小鼠的耳皮肤。肥胖小鼠皮肤增加的通透性足以使OVA局部应用引发OVA特异性免疫反应，因为我们能够在肥胖动物中检测到OVA特异性IgG1，但在具有完整皮肤屏障的瘦对照小鼠中不能。确实，在肥胖小鼠中检测到的OVA特异性IgG1水平与通过胶带剥离机械损伤皮肤屏障的瘦小鼠相当。为了进一步测试皮肤上过敏原处理的肥胖小鼠中 elevated 抗体反应是否导致功能性系统性致敏，我们用单次口服剂量OVA攻击小鼠并测量体温变化。虽然CD小鼠体温保持恒定，但我们观察到HFD小鼠温度显著下降，表明由于系统性OVA特异性致敏而出现过敏反应 signs。此外，在HFD小鼠的皮肤引流淋巴结中，有 elevated T细胞反应，包括Th2和Th17细胞。与Th17环境一致，OVA攻击的肥胖小鼠中IL-17产生增加。

总之，我们的结果表明肥胖损害皮肤屏障，导致皮肤中3型偏向免疫环境， upon 过敏性致敏，导致AD样炎症和随后食物过敏。

4 Discussion

肥胖与皮肤屏障功能障碍之间的关系近年来引起显著关注，肥胖与各种皮肤炎症 conditions 如银屑病和特应性皮炎相关，其中皮肤屏障通常受损并构成过敏发展的风险因素。

先前研究观察到肥胖个体（PWO）比非肥胖个体有显著更高的TEWL。在最近研究中，作者证明了体重指数与TEWL和皮肤pH的强关联，并建议肥胖与TEWL之间的因果关系，这可能扩展到AD以外的炎症性皮肤 conditions。在小鼠中，研究发现饮食诱导的肥胖可以损害角质形成细胞皮肤屏障蛋白表达，这些蛋白对维持皮肤完整性和预防过敏性致敏至关重要。我们现在显示肥胖诱导失调的皮肤屏障，通过皮肤增加过敏性致敏风险。我们肥胖小鼠中观察到的受损皮肤屏障可能导致增强的过敏原渗透，从而引发更强的炎症反应。这与肥胖小鼠显示与皮肤完整性和功能相关的蛋白改变表达特别相关，包括claudin-1、丝聚蛋白、desmoglein-3和外皮蛋白。

Claudin表达功能障碍与皮肤屏障增加通透性相关，允许过敏原更容易渗透并导致过敏性致敏。在小肠中，HFD导致紧密连接重组 with claudin-1下调，而claudin-2上调—表明claudin-1下调是响应膳食脂肪摄入的 claudin 转换 broader 机制的一部分。由于这种机制直接导致肥胖相关增加肠道通透性，这也可能影响皮肤通透性。确实，claudin-1先前显示有助于皮肤屏障完整性，claudin-1改变导致增加TEWL。Claudin-1缺陷小鼠出现严重脱水和受损皮肤屏障功能，claudin-1下调是特应性皮炎发病机制中的重要因素。这在肥胖背景下特别相关，其中系统性炎症可能加剧皮肤屏障功能障碍。Gutowska-Owsiak等人强调了炎症细胞因子（如IL-17）在下调角质形成细胞claudin-1表达中的作用，进一步加剧已经受损的皮肤屏障，我们可以在角质形成细胞培养中观察到。Claudin-1表达与皮肤屏障完整性之间的相关性强调了维持紧密连接蛋白水平以优化皮肤健康的重要性。类似地，desmosomes breakdown 损害皮肤结构完整性，促进过敏原 entry，如研究所示，其中受损皮肤屏障功能与增加过敏原致敏和随后过敏反应相关。Desmoglein-3在维持角质形成细胞凝聚力和调节细胞粘附的信号通路中发挥重要作用，从而影响角质形成细胞行为，包括迁移和伤口愈合。有趣的是，Desmoglein-1似乎不受肥胖影响。不同的转录调控网络是否 actively 维持Dsg1表达，从而防止完全脱屑或表皮 breakdown，将是进一步研究的主题。

丝聚蛋白突变已广泛研究与皮肤屏障功能障碍和过敏性疾病相关。丝聚蛋白基因功能丧失突变导致皮肤屏障功能破坏， predisposing 个体 to 湿疹并增强过敏性致敏和维持食物过敏的风险。我们实验室的先前结果显示Filaggrin和Tmem79突变均可有助于AD发展以及 atopic march。皮肤中过敏原的存在可触发免疫反应，导致系统性过敏反应，如致敏个体中免疫球蛋白E（IgE）和炎症细胞因子水平增加所证明。

肥胖以慢性低度炎症状态为特征，虽然本身不引起明显皮肤炎症，但 predisposes one to a type 3-prone immune response， which， upon 过敏性致敏，导致混合Th1/2/17反应。支持我们的发现，先前报道HFD小鼠在MC903 AD样炎症模型中发展出更Th17-和Th1驱动的免疫反应。在Bapat等人研究中，作者显示HFD将MC903应用的经典皮肤Th2反应转变为Th17偏向促炎反应。重要的是，然而，我们的时间分析显示皮肤屏障缺陷先于3型偏向免疫状态，因为皮肤屏障蛋白下调在HFD initiation后2周早期观察到，而 elevated IL-17水平仅在MC903治疗期间发生，并且T细胞在稳态条件下再刺激后不产生IL-17。我们和其他人先前强调了IL-17及其受体作为AD和 atopic march 期间皮肤炎症中的重要细胞因子的作用。我们的数据现在通过显示在肥胖小鼠的3型偏向