基于稳定同位素稀释与LC-MS/MS联用技术同步定量DNA中鸟嘌呤及其N7/O6-甲基化修饰的一锅法分析策略

本研究针对亚硝胺类化合物（如NDMA）诱导DNA烷基化损伤的检测难题，开发了一种基于稳定同位素稀释-LC-MS/MS的一锅法同步定量技术，可精准检测DNA酸水解产物中的鸟嘌呤（Gua）、O6-甲基鸟嘌呤（6MGua）和N7-甲基鸟嘌呤（7MGua）。该方法通过三重同位素内标（6-CD3-Gua、7-CD3-Gua、Gua-13C2,15N）实现了高选择性、高精度与高灵敏度检测，成功应用于人及大鼠原代肝细胞NDMA暴露模型的DNA甲基化分析，为致癌物DNA损伤机制研究提供了可靠工具。

　　

亚硝胺类化合物（NAs）被国际癌症研究机构（IARC）列为潜在人类致癌物，其通过烷基化作用攻击DNA分子中鸟嘌呤的N⁷位和O⁶位（尤以N-亚硝基二甲胺NDMA为典型代表），引发基因突变。本研究建立了一种基于液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）的创新分析方法，能够同步检测DNA酸水解产物中的天然鸟嘌呤（Gua）、O⁶-甲基鸟嘌呤（6MGua）及N⁷-甲基鸟嘌呤（7MGua）。该方法采用三种稳定同位素内标（6-CD₃-Gua、7-CD₃-Gua和Gua-¹³C₂,¹⁵N）进行精准定量，系统验证了方法的选择性、精密度、准确度、提取回收率、基质效应、稳定性及实际应用可行性。利用该技术，研究人员成功分析了经NDMA处理的人和大鼠原代肝细胞样本中DNA甲基化损伤水平。该稳定同位素稀释法展现出卓越的选择性、灵敏度与便捷性，为体外定量分析DNA甲基化修饰（如6MGua和7MGua相对于Gua的比率）提供了高效可靠的实验平台。