超声波辅助提取地中海特有植物Daphne gnidium叶片酚类成分及其体外抗氧化与抗菌活性研究

本研究针对地中海特有植物Daphne gnidium叶片的生物活性成分开展系统分析，通过超声波辅助提取技术比较水相和有机溶剂提取物的酚类含量、抗氧化（DPPH、ABTS、FRAP法）及抗菌活性。结果表明乙醇提取物总酚含量最高（93.24 mg GAE/g），氯仿提取物富含黄酮（60.94 mg QE/g）和缩合单宁（91.52 mg CE/g），水提取物在DPPH和FRAP实验中抗氧化活性最强，甲醇提取物对ABTS自由基清除效果最佳。所有提取物对革兰氏阳性/阴性菌及白色念珠菌均具抑制效果（抑菌圈8.67–19.33 mm），乙醇提取物对变形杆菌抑制最强。相关性分析显示抗氧化活性与黄酮及单宁含量显著正相关（p<0.01）。本研究为开发天然抗氧化和抗菌剂提供了理论依据。

　　

地中海盆地特有的药用植物Daphne gnidium L.（瑞香科）在传统医学中广泛应用于护发、皮肤病治疗及糖尿病管理，其生物活性潜力尚未被充分挖掘。尽管该植物在民间应用历史悠久，但针对其叶片提取物的系统性 phytochemical（植物化学）成分分析及其抗氧化、抗菌活性的综合研究仍较为缺乏，尤其在摩洛哥等地中海区域国家的相关药理研究更为有限。现有文献表明，该植物富含黄酮、香豆素、萜类及酚类化合物，但其提取工艺优化及活性机制仍需深入探索。

为此，研究团队通过超声波辅助提取技术（Ultrasound-Assisted Extraction），分别采用水、甲醇、乙醇、氯仿和乙酸乙酯溶剂对D. gnidium叶片进行提取，系统评估了各提取物的总酚含量（Total Phenolic Content, TPC）、总黄酮（Total Flavonoids, TF）、缩合单宁（Condensed Tannins Content, CTC），并通过DPPH（二苯基苦基苯肼自由基清除）、ABTS（2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸自由基清除）和FRAP（铁离子还原能力）三种方法测定抗氧化活性。此外，研究还针对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）和白色念珠菌（Candida albicans）测试了提取物的抗菌效力，采用琼脂扩散法测定抑菌圈直径，并通过微孔板法确定最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。

主要技术方法概述

研究使用超声波辅助提取法处理采自摩洛哥Tazekka国家公园的D. gnidium叶片样本，溶剂涵盖水相和四种有机溶剂。酚类含量通过Folin-Ciocalteu法（TPC）、AlCl₃比色法（TF）和香草醛法（TTC）定量；抗氧化活性采用DPPH、ABTS和FRAP三种标准方法测定；抗菌实验使用琼脂扩散法和96孔板微稀释法，以革兰氏阳性/阴性菌和真菌为测试菌株，阳性对照为抗生素（Colistin和Amikacin）。数据通过IBM SPSS进行方差分析（ANOVA）和Pearson相关性检验。

研究结果

Phytochemical composition

乙醇提取物的TPC最高（93.24 ± 0.07 mg GAE/g），显著高于其他溶剂；氯仿提取物在TF（60.94 ± 0.18 mg QE/g）和CTC（91.52 ± 2.23 mg CE/g）含量上领先，水提取物则最低。该结果优于既往研究，表明超声波提取能高效释放胞内活性成分。

Antioxidant activity

水提取物在DPPH实验中活性最强（IC₅₀ = 37.99 μg/mL），甲醇提取物对ABTS自由基清除效果最佳（IC₅₀ = 190 μg/mL），而水提取物在FRAP实验中铁还原能力最高（9.1 mg AAE/g）。抗坏血酸（Ascorbic Acid）作为对照均显著优于所有提取物。不同方法间的活性差异反映了抗氧化机制的多样性（电子转移 vs. 氢原子供给）。

Correlation matrix

Pearson分析显示，TF和CTC与DPPH、ABTS、FRAP活性均呈显著正相关（r² > 0.6, p<0.01），而TPC与抗氧化活性无显著关联，表明黄酮和单宁是该植物抗氧化作用的主要贡献者。主成分分析（PCA）进一步将提取物按活性特征分为三类：乙醇/甲醇组（高酚及FRAP活性）、氯仿组（高单宁及ABTS活性）和水/乙酸乙酯组。

Antimicrobial activity

所有提取物（50 mg/mL）对测试菌株均具抑制效果，抑菌圈直径范围为8.67–19.33 mm。乙醇提取物对P. mirabilis抑制最强（19.33 mm），氯仿提取物对C. albicans效果最佳（15.33 mm）。MIC值显示甲醇提取物对B. subtilis活性最高（6.25 mg/mL），MBC/MIC比值表明水提取物对革兰氏阴性菌具杀菌效应（比值≤4）。革兰氏阴性菌总体更敏感，可能与疏水性成分（如Daphnetin）穿透外膜能力有关。

结论与意义

本研究证实D. gnidium叶片提取物具有显著的抗氧化和抗菌潜力，其活性与黄酮及缩合单宁含量密切相关。超声波辅助提取能高效富集这些成分，为开发天然抗氧化剂和抗菌剂提供了优化方案。此外，该植物对多重病原菌的抑制效果（尤其对革兰氏阴性菌和真菌）支持了其在传统医学中的应用价值，并为化妆品和 Pharmaceuticals（制药）领域的天然产品开发提供了依据。后续研究应聚焦于活性成分的分离纯化（如Daphnetin）、作用机制解析及体内实验验证，以进一步推动其临床应用。

本研究成果发表于《Scientific African》，由摩洛哥伊本·托法尔大学（Ibn Tofail University）的研究团队完成，体现了地中海区域植物资源在生物医学研究中的重要性。