从啮齿类到非人灵长类：靶向PTK7的适体-药物偶联物Sgc8c-M在癌症治疗中的全面临床前评估

本刊推荐：为解决传统癌症治疗缺乏肿瘤特异性导致的严重副作用问题，研究人员开展了靶向蛋白酪氨酸激酶7（PTK7）的适体-药物偶联物（ApDC）Sgc8c-M的系统研究。该研究通过将经典PTK7适体Sgc8c与强效抗有丝分裂剂单甲基澳瑞他汀E（MMAE）偶联，在多种PTK7过表达癌症模型中诱导了持续肿瘤消退，并首次完成了从啮齿类到食蟹猴的全面药代动力学/毒代动力学评价，为ApDCs的临床转化提供了关键研究基础。

　　

癌症作为全球疾病相关死亡的首要原因之一，在2022年记录了近2000万新发病例和970万死亡病例。传统化疗和放疗由于缺乏肿瘤特异性，不可避免地对正常组织造成损伤，导致严重不良反应。为解决靶向性差的问题，靶向药物递送策略应运而生，其中抗体-药物偶联物（ADCs）已成为肿瘤学领域增长最快的治疗药物类别，目前已有15种ADCs获得美国FDA批准，超过100种处于临床试验阶段。

在这一背景下，适体作为独特的靶向配体逐渐受到关注。适体是通过指数富集的配体系统进化（SELEX）技术筛选出的短链单链DNA或RNA分子，能像抗体一样以高特异性和亲和力结合特定靶标。与传统抗体相比，适体具有合成修饰简便、免疫原性低、化学稳定性好和组织渗透迅速等优势，使其成为靶向癌症治疗中理想的药物递送载体。

蛋白酪氨酸激酶7（PTK7）在多种恶性肿瘤中过度表达，包括三阴性乳腺癌（TNBC）、非小细胞肺癌（NSCLC）、卵巢癌（OVCA）、结直肠癌（CRC）、胰腺癌和急性淋巴细胞白血病。PTK7过表达通常与预后不良、肿瘤转移和总生存期不足相关。由于PTK7缺乏催化活性，开发靶向PTK7的小分子抑制剂面临巨大挑战。目前，一系列靶向PTK7的ADCs（如cofetuzumab pelidotin和MTX-13）已显示出良好的抗肿瘤效果并进入临床阶段，这表明基于PTK7靶点开发ApDC药物具有临床转化潜力。

然而，先前报道的PTK7靶向ApDCs由于抗肿瘤效力中等，且大多数研究主要集中于证明疗效而往往忽视系统临床前药代动力学（PK）和毒代动力学（TK）研究，最近并未出现临床开发进展。2023年，研究团队使用全身正电子发射断层扫描（PET）首次对放射性标记的PTK7适体68Ga-NOTA-Sgc8c在人体内进行了系统药代动力学研究，为适体的临床转化提供了初步的人体生物安全性和代谢模式数据。但ApDCs的命运受到多种因素影响，包括适当剂量和不同偶联药物的多样性，因此需要推进开发具有更强效力的PTK7靶向ApDC并进行全面的临床前药学评价。

研究人员开发了靶向PTK7的ApDC Sgc8c-M，选择经典适体Sgc8c，通过组织蛋白酶B（CTSB）可切割的缬氨酸-瓜氨酸（VC） linker将其与强效的auristatin微管抑制剂单甲基澳瑞他汀E（MMAE）偶联。MMAE是ADCs中最广泛使用的毒性载荷。研究验证了Sgc8c-M在体外和体内的强大靶向能力，并在多种细胞系来源异种移植（CDX）和患者来源异种移植（PDX）模型中证明了其优异的抗肿瘤功效，包括三阴性乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、结直肠癌和非小细胞肺癌。此外，研究还在啮齿类动物和非人灵长类食蟹猴中对Sgc8c-M进行了全面的临床前PK和TK评价，为了解ApDCs的特性提供了重要研究基础。

研究采用的主要技术方法包括：通过一步迈克尔加成反应合成Sgc8c-M，使用高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）进行纯化和表征；通过流式细胞术和共聚焦显微镜进行细胞结合和内化研究；建立多种CDX和PDX模型进行体内疗效评价；采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法定量血浆和组织中的游离和总MMAE水平；在SD大鼠和食蟹猴中进行重复给药的毒代动力学和毒性研究。

Sgc8c-M的合成与表征

为构建ApDC Sgc8c-M，研究采用3'-硫醇修饰的适体Sgc8c-SH与马来酰亚胺修饰的药物MC-VC-PAB-MMAE（VcMMAE）之间的一步迈克尔加成反应。成功合成和纯化的Sgc8c-M经HPLC和MS确认纯度超过99%，分子量与目标质量14,147 Da精确对应。阴性对照Ctrl-M（使用Sgc8c的反向序列与MMAE偶联构建）、Cy5标记的Sgc8c-M和Cy5标记的Ctrl-M均在相同条件下合成。该方法显示出高效率，在3小时反应时间内产率超过90%，适用于各种序列的药物偶联，为ApDCs的转化开发提供了一般且简单的合成方法学。

Sgc8c-M的体外靶向、内化和细胞毒性

研究首先在蛋白质和细胞水平上考察了Sgc8c-M的靶向性。在蛋白质水平上，Sgc8c能有效结合小鼠、大鼠、食蟹猴和人的PTK7重组蛋白，这些物种间的平衡解离常数（K_d）相当。MMAE偶联后，Sgc8c-M对不同物种PTK7蛋白保持强大结合亲和力，K_d值与未偶联适体Sgc8c相似，而Ctrl-M不结合人PTK7重组蛋白。PTK7靶向ADC h6M24-vc0101先前显示不与小鼠和大鼠PTK7发生交叉反应，这些发现表明Sgc8c-M可能在不同物种间具有一致的治疗效果，这是ApDCs相对于某些ADCs的独特优势。

在细胞水平上，通过Cy5染料标记适体，利用流式细胞术研究其与细胞的结合。聚焦于PTK7阳性TNBC细胞系SUM159和MDA-MB-468，观察到Cy5-Sgc8c和Cy5-Sgc8c-M对这些细胞的结合亲和力显著高于对照Cy5-Ctrl和Cy5-Ctrl-M，且Cy5-Sgc8c和Cy5-Sgc8c-M不与PTK7阴性Ramos细胞结合，表明Sgc8c的亲和力和特异性不受MMAE偶联的干扰。

随后研究通过流式细胞术检测了Cy5-Sgc8c-M在细胞中的内化和内吞途径。使用三种经典内吞途径抑制剂：盐酸阿米洛利（AMI）用于巨胞饮途径，盐酸氯丙嗪（CPZ）用于网格蛋白介导途径，甲基-β-环糊精（M-β-CD）用于小窝介导途径。在SUM159细胞中，Cy5-Sgc8c-M的内化被AMI和CPZ显著抑制，AMI显示出更明显的抑制效果，表明Cy5-Sgc8c-M通过巨胞饮和网格蛋白介导的内吞作用进入SUM159细胞。网格蛋白介导的内吞是受体介导内吞的一种类型，表明Cy5-Sgc8c-M特异性识别并结合细胞膜上的PTK7，随后通过该途径内化到SUM159细胞中。关于巨胞饮，先前研究证明其可被受体酪氨酸激酶EGFR刺激，且PTK7已显示通过EGFR/Akt信号通路促进TNBC转移和进展，表明PTK7与巨胞饮之间存在合理联系。在MDA-MB-468细胞中，Cy5-Sgc8c-M的内化仅被巨胞饮抑制剂AMI抑制。通过共聚焦显微镜观察内化过程，发现Cy5-Sgc8c-M能快速进入SUM159细胞的溶酶体，0.5小时后主要定位于细胞膜，而2小时后大部分与溶酶体共定位。最后评估了Sgc8c-M在SUM159和MDA-MB-468细胞中的细胞毒性，显示Sgc8c-M比未偶联VcMMAE毒性更大。适体偶联后推测：（1）VcMMAE能更好地结合靶细胞并内化到溶酶体中；（2）MMAE的释放通过特定linker分子实现，该linker在偶联物到达靶细胞后分解，使药物在细胞内释放。还在人正常卵巢上皮细胞IOSE80和PTK7阴性癌细胞A549中评估了Sgc8c-M细胞毒性，IC₅₀值比PTK7阳性SUM159癌细胞高约6倍，证明Sgc8c-M能以高特异性杀死PTK7阳性肿瘤细胞。

在TNBC模型中的强大抗肿瘤效果

PTK7在TNBC中高表达且与预后不良相关。一些研究通过研究PTK7 ADC治疗TNBC来解决这一不良结局。为扩展这些研究，首先测试了Sgc8c-M对TNBC的治疗潜力。为验证Sgc8c-M的体内靶向能力，在TNBC MDA-MB-468肿瘤携带小鼠中进行Cy5-Sgc8c-M的体内荧光成像，结果显示Cy5-Sgc8c-M在注射后90和120分钟肿瘤部位荧光显著强于Cy5-Ctrl-M。2小时处死后离体成像显示Cy5-Sgc8c-M在肿瘤中的积累比Cy5-Ctrl-M增加，定量荧光分析表明Cy5-Sgc8c-M在肿瘤中的浓度是Cy5-Ctrl-M的2倍以上，但两种治疗组在正常器官中无显著差异。这些发现突显了Sgc8c-M优异的体内靶向性，证明其在PTK7过表达肿瘤中的特异性富集。为阐明Sgc8c-M的靶向机制，通过免疫荧光成像在另一个TNBC SUM159模型中研究了Sgc8c-M与PTK7蛋白的共定位，Cy5-Sgc8c-M在细胞和异种移植肿瘤切片中与PTK7蛋白明显共定位，为Sgc8c-M能特异性靶向PTK7过表达癌细胞提供直接视觉证据。

为优化Sgc8c-M的给药方案，在TNBC SUM159异种移植模型中评估了各种给药剂量和频率。肿瘤生长曲线表明，3.5 mg/kg每四天一次共五个周期（q4dx5）的方案不足以抑制该模型中的肿瘤生长，但将剂量增加至5.25 mg/kg q4dx5和7 mg/kg每周一次共五个周期（q7dx5）显著阻碍肿瘤进展。值得注意的是，7 mg/kg q4dx5和10.5 mg/kg q7dx5方案表现出强大的抗肿瘤效果，诱导了持续肿瘤消退。体重测量表明小鼠对所有五种给药方案耐受良好，无明显体重减轻。基于这些发现，选择7 mg/kg q4dx5作为后续抗肿瘤评价的最佳方案。进一步比较了Sgc8c-M与紫杉醇的疗效，在SUM159异种移植模型中，10 mg/kg紫杉醇相对于盐水对照组部分减少肿瘤生长，但7 mg/kg Sgc8c-M治疗导致几乎完全的肿瘤消退。在同样以高PTK7表达为特征的TNBC MDA-MB-468异种移植模型中进一步评估了Sgc8c-M的抗肿瘤功效，未偶联游离MMAE在体外效力强，但在等效剂量下，Sgc8c-M表现出优于游离MMAE的肿瘤生长抑制（TGI）（TGI：MMAE 76% vs. Sgc8c-M q4dx3 100%），表明与适体偶联显著增强MMAE的体内抗肿瘤效力。令人惊讶的是，7 mg/kg q7dx3（TGI 95%）和7 mg/kg q4dx3方案在MDA-MB-468模型中也表现出相当的抗肿瘤效果，均实现持续肿瘤消退，这可能表明MDA-MB-468模型对Sgc8c-M比SUM159模型更敏感。

PDX模型保留原发肿瘤的组织病理学、分子和遗传特征，为预测临床药物疗效提供更准确平台。因此，除上述细胞系来源异种移植（CDX）模型外，还使用TNBC PDX模型进一步评估了Sgc8c-M的抗肿瘤功效。紫杉醇治疗未能显著抑制TNBC PDX模型中的肿瘤生长，而Sgc8c-M表现出 substantial 抗肿瘤功效，有一段完全肿瘤消退期，尽管晚期出现复发。令人鼓舞的是，Sgc8c-M在抑制较大肿瘤生长方面也显示出疗效，即使肿瘤体积达到约500 mm³，施用2-3剂Sgc8c-M后观察到显著肿瘤生长抑制。为进一步阐明Sgc8c-M的肿瘤杀伤效应，在肿瘤体积减小到初始大小约一半后，进行细胞角蛋白19（CK19，上皮细胞骨架标志物）、Ki67（增殖标志物）和磷酸组蛋白H3（pHH3，有丝分裂标志物）的免疫组织化学（IHC）表征。与盐水组相比，Sgc8c-M处理的肿瘤显示CK19表达减少、Ki67水平降低和pHH3染色增加，表明经Sgc8c-M治疗后肿瘤上皮癌细胞和细胞增殖显著减少，同时有丝分裂抑制增加，与微管蛋白抑制剂MMAE的效果一致。所有治疗组体重在整个给药和后续观察期间保持稳定。

在胰腺癌模型中的强大抗肿瘤效果

胰腺癌是目前最具挑战性的恶性肿瘤之一，迫切需要开发更有效的治疗选择。据报道PTK7在胰腺癌中过表达，特别是在转移性肿瘤中，其阳性率（60%）高于原发肿瘤（40%）。此外，PTK7表达见于胰腺肿瘤的基质细胞，使其成为胰腺癌治疗中有吸引力的药物递送靶点。在研究Sgc8c-M用于胰腺癌治疗时，首先评估了其与MIA PaCa-2细胞系的结合，Cy5标记的Sgc8c-M和Sgc8c对MIA PaCa-2细胞显示出高特异性结合。与TNBC细胞中的观察相似，Sgc8c-M比未偶联VcMMAE细胞毒性更大。体外细胞毒性显示MMAE对MIA PaCa-2细胞的IC₅₀值比Sgc8c-M低约48倍，这可能归因于MMAE能够自由扩散到肿瘤细胞中而无需linker切割。有趣的是，体内研究表明在等效剂量下，Sgc8c-M在MIA PaCa-2异种移植中实现优于MMAE组的肿瘤抑制。肿瘤中MMAE定量显示，与MMAE组相比，Sgc8c-M在2小时选择性递送更多MMAE到MIA PaCa-2肿瘤，阐明了观察到的体内功效差异。在该CDX模型中进一步研究Sgc8c-M的肿瘤杀伤效应，发现肿瘤切片中Ki67水平降低和pHH3染色增加，表明Sgc8c-M通过诱导有丝分裂抑制的细胞死亡发挥抗肿瘤活性，与游离MMAE的抑制相似。随后在两个额外PDX模型PDX F4和PDX F5中评估了Sgc8c-M的疗效，在两个模型中均展示出 impressive 肿瘤抑制，TGI值分别为91%和79%。上述胰腺癌模型中的体重变化显示，任何组在整个治疗和后续观察期间均未发生体重减轻。

在其他癌症模型中的显著抗肿瘤效果

除上述两种癌症类型外，PTK7过表达还见于多种其他恶性肿瘤，包括CRC、NSCLC和OVCA。因此，还研究了Sgc8c-M在这些特定癌症类型中的抗肿瘤功效。

在PTK7过表达的HT-29 CRC模型中，首先通过流式细胞术分析评估了Sgc8c-M对细胞的特异性识别能力，结果显示Cy5标记的Sgc8c和Sgc8c-M荧光强度显著高于对照Cy5-Ctrl和Cy5-Ctrl-M。为研究适体偶联对细胞毒性的影响，比较了VcMMAE（无非适体）和Sgc8c-M的72小时细胞毒性，Sgc8c-M对HT-29细胞的毒性比VcMMAE大约9.14倍，IC₅₀值分别为22.23 nM对203.2 nM。这种增强的细胞毒性可能是由于适体Sgc8c的存在增加偶联物的识别和内化，促进MMAE在溶酶体内快速释放以发挥细胞毒性。体内评估显示，7 mg/kg每七天一次共五个周期（q7dx5）治疗导致治疗28天后肿瘤大小比盐水对照组显著减少68%。值得注意的是，7 mg/kg每四天一次共七个周期（q4dx7）给药几乎诱导HT-29肿瘤完全消退，达到94% TGI，进一步证明Sgc8c-M在CRC模型中的满意疗效。

在NSCLC中，使用PTK7过表达的NCI-H1975异种移植模型评估了Sgc8c-M的抗肿瘤活性。体外分析获得与HT-29细胞中一致的结果，特别是Cy5标记的Sgc8c-M以高特异性和选择性结合NCI-H1975细胞，与Sgc8c相似。此外，在72小时细胞毒性测定中，Sgc8c-M对NCI-H1975细胞表现出比VcMMAE更强大的细胞毒性。体内7 mg/kg（q4dx5）治疗导致完全肿瘤消退，停药40天后未观察到肿瘤复发。为确定疗效与靶点表达的相关性，在PTK7阴性A549 NSCLC模型中评估了Sgc8c-M的抗肿瘤活性，结合测定证实Cy5-Sgc8c-M与A549细胞结合极少。体外72小时细胞毒性测定显示对A549细胞效力降低约16倍（IC₅₀=331.2 nM）对PTK7阳性NCI-H1975细胞（IC₅₀=20.45 nM）。体内7 mg/kg Sgc8c-M（q4dx5）显示适度的A549肿瘤生长抑制，但无法诱导持续肿瘤消退，与在PTK7阳性NCI-H1975模型中的观察相比，Sgc8c-M在PTK7过表达NCI-H1975模型中显示出更强的肿瘤抑制。

对于OVCA，使用以PTK7过表达为特征并常用于评估PTK7靶向ADCs（包括h6M24-vc0101和MTX-13）治疗功效的OVCAR3 CDX模型。72小时细胞毒性测定结果反映在HT-29和NCI-H1975细胞中的观察，IC₅₀值Sgc8c-M为27.94 nM对VcMMAE为105.3 nM。7 mg/kg每四天一次共五个周期（q4dx5）和7 mg/kg每周一次共五个周期（q7dx5）治疗导致体内OVCAR3肿瘤持续消退，优于紫杉醇实现的消退。这些发现表明Sgc8c-M比h6M24-vc0101（3 mg/kg，q4dx4）在治疗OVCAR3肿瘤中表现出更大的治疗功效，文献中观察到快速肿瘤复发。这一结果鼓励使用h6M24-vc0101中的抗体与Sgc8c-M中相同的MMAE载荷偶联构建一类ADC h6M24-VcMMAE用于进一步比较。h6M24-VcMMAE对人PTK7蛋白的K_d值测定为3.18 nM，与文献中h6M24-vc0101的结合亲和力相当。令人印象深刻的是，Sgc8c-M（3.5 mg/kg，q4d x 4）治疗实现比h6M24-VcMMAE（5 mg/kg，q4dx4）显著更强的肿瘤抑制。

总的来说，这些发现说明Sgc8c-M在解决CRC、NSCLC和OVCA方面的巨大治疗潜力。Sgc8c-M在这些模型中表现出强大的抗肿瘤效果，小鼠体重在整个治疗和后续观察期间保持稳定。在研究Sgc8c-M的抗肿瘤功效后，通过Ki67和pHH3的IHC表征进一步研究其肿瘤杀伤效应。当肿瘤体积达到约500 mm³时开始Sgc8c-M治疗，施用3至4剂ApDC后，肿瘤体积平均减少约35-50%。在评估的HT-29、NCI-H1975和OVCAR3模型中，IHC表征显示经Sgc8c-M处理的肿瘤组织表现出Ki67表达显著减少和pHH3染色增加，表明Sgc8c-M有效减少肿瘤细胞增殖并促进有丝分裂停滞增加。

为研究Sgc8c-M比h6M24-VcMMAE功效更大的原因，对单次给药后两种药物在OVCAR3肿瘤携带小鼠中的肿瘤MMAE水平进行了比较分析。定量分析显示，在给药后2小时和6小时，Sgc8c-M肿瘤中MMAE水平（标准化为注射剂量每克百分比，%ID/g）显著高于h6M24-VcMMAE，证明Sgc8c-M比h6M24-VcMMAE实现更快速和更高的肿瘤积累，从而产生更好的功效。

Sgc8c-M在小鼠、大鼠和食蟹猴中的药代动力学特征

基于Sgc8c-M在多种肿瘤模型中 promising 治疗功效，进一步研究了Sgc8c-M的药代动力学（PK）和毒代动力学（TK）特征，注意到先前报道的ApDCs大多忽略这些测定。本研究分析PK和TK结果以了解Sgc8c-M的吸收、分布、代谢和消除，此类研究最终有助于优化治疗方案和评估潜在临床应用的安全性。首先通过定量血浆中游离和总MMAE，以及各种组织中的总MMAE水平，使用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）在不同物种（包括小鼠、大鼠和食蟹猴）中进行了PK特征的系统评价。为有效测量游离MMAE，使用冰乙腈（ACN）提取方案直接提取裂解的MMAE到有机相。相反， conjugated MMAE的测量需要额外使用CTSB或肝 homogenate 进行linker切割步骤。因此，总MMAE（conjugated MMAE + 游离MMAE）可通过首先切割linker，然后用ACN萃取来测量。

在小鼠中，在三个剂量水平（3.5、7和14 mg/kg）下观察到游离和总MMAE在血浆中的显著剂量相关性，使得%ID/mL值显示密切一致性。特别令人感兴趣的是，虽然肿瘤中初始MMAE浓度相对于正常器官较低，但肿瘤中MMAE水平在48小时内保持稳定。相反，正常器官中MMAE水平在给药后24小时低于定量限（LOQ）。总体而言，PK特征表明Sgc8c-M导致血浆中短暂MMAE水平，同时维持肿瘤中平台样MMAE水平。

在大鼠中，3.5和7 mg/kg Sgc8c-M剂量的PK特征也是剂量依赖性的，血浆中总MMAE的半衰期（t_1/2）分别为8.84±4.78小时和11.65±8.02小时。游离MMAE与总MMAE的浓度-时间曲线下面积（AUC）比率发现小于3%（AUC游离MMAE/AUC总MMAE<3%），表明Sgc8c-M在大鼠血浆中保持稳定性，MMAE泄漏极少。比较分析显示肾脏、脾脏和膀胱是24小时内大鼠组织中MMAE暴露最高的前三种组织。除大肠外，其他大鼠组织中的MMAE水平在24小时后快速代谢和清除，与小鼠模型中的观察平行。随后对大鼠中Sgc8c-M的排泄特征研究涉及定量尿液和粪便中的MMAE水平，结果表明MMAE主要通过尿液排泄，在8至24小时之间显著。累积地，约20.05% MMAE通过尿液排泄，约54.66%在24小时内通过粪便消除。这些发现表明发生了胆汁排泄，从而证明肝脏代谢在Sgc8c-M的清除中起重要作用。

在食蟹猴中，观察到1.8 mg/kg和3.6 mg/kg剂量Sgc8c-M的MMAE PK类似线性相关，总MMAE的t_1/2相当，分别为11.34±0.93小时和12.85±1.77小时。1.8 mg/kg和3.6 mg/kg Sgc8c-M组的AUC游离MMAE/AUC总MMAE比率分别测定为2.1%和3.1%。食蟹猴血浆中游离MMAE的低暴露水平进一步表明Sgc8c-M在该灵长类模型中的高linker稳定性。

在大鼠和食蟹猴中的毒代动力学和毒性研究

随后的研究聚焦于大鼠和食蟹猴中Sgc8c-M在重复剂量研究（每4天一次共四个周期，q4d x 4）中的毒代动力学和毒性，剂量高达大鼠18 mg/kg和猴子5.4 mg/kg。大鼠和食蟹猴的总MMAE毒代动力学特征分别描绘。主要毒代动力学参数从静脉推注输入后获得的样品进行非房室分析（PK solver 2.0，Microsoft Excel中的加载项程序）计算。TK数据的全面细节概述。

给大鼠施用3.5、10.5和18 mg/kg剂量Sgc8c-M后，单剂量（第1天）和多剂量（第13天，第四周期）均导致系统MMAE暴露，随剂量依赖性增加 alongside 线性毒代动力学特征。值得注意的是，第一次和第四次给药后MMAE暴露水平相当，表明多次给药后无显著药物积累。

在重复剂量毒性研究中，Sgc8c-M的血液学变化是剂量依赖性的，血液毒性在大鼠最高剂量18 mg/kg时显现。观察到18 mg/kg Sgc8c-M组中性粒细胞（Neut）和血小板（PLT）水平显著降低。3.5 mg/kg Sgc8c-M组相对于相应性别盐水对照无显著血液学参数改变，表明在小鼠模型中显示有效的剂量（小鼠7 mg/kg，相当于大鼠3.5 mg/kg）在大鼠中不诱导血液毒性。此外，在10.5 mg/kg和18 mg/kg Sgc8c-M组中观察到白细胞（WBC）亚群（包括Neut、淋巴细胞（Lymph）、单核细胞（Mono）和嗜酸性粒细胞（Eos））和红细胞（RBC）亚群（包括血红蛋白（HGB）、血细胞比容（HCT）和网织红细胞（Retic））的改变，显示与总体WBC和RBC变化一致的剂量依赖性减少。3.5 mg/kg Sgc8c-M处理的雄性和雌性大鼠维持正常肝功能，主要肝功能生物标志物无显著差异。在10.5 mg/kg，雄性大鼠显示总蛋白（TP）显著降低，而雌性大鼠表现出血清天冬氨酸转氨酶（AST）升高。施用18 mg/kg Sgc8c-M后，雄性大鼠证明AST、丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）和球蛋白（GLB）水平显著升高， alongside 白蛋白（ALB）和ALB/GLB（A/G）降低。相反，雌性大鼠显示AST、ALT和γ-谷氨酰转移酶（GGT）显著增加。这些发现表明重复施用3.5 mg/kg Sgc8c-M（相当于小鼠中高效治疗剂量7 mg/kg）不影响肝功能。肝功能影响仅在较高剂量10.5 mg/kg和18 mg/kg时观察到，与MMAE已建立的肝毒性特征一致。这一结论进一步被10.5 mg/kg和18 mg/kg组相对肝脏重量显著增加证实。经18 mg/kg Sgc8c-M处理的雄性大鼠苏木精和伊红（HE）染色肝切片组织病理学检查显示轻度肝毒性，特征为轻微肝细胞坏死和炎症细胞浸润。此外，该治疗组雄性大鼠心脏组织HE染色显示心肌纤维部分萎缩伴随间隙变宽和轻度炎症。

在体重监测背景下