基于高斯荧光素酶免疫沉淀技术的猪盖塔病毒抗体检测新方法研究及其应用价值

本研究开发了一种基于高斯荧光素酶（GLuc）标记E2蛋白的免疫沉淀系统（LIPS），用于快速、高灵敏检测猪血清中的盖塔病毒（GETV）抗体。该方法在优化条件下表现出100%灵敏度与99.69%特异性，且无交叉反应，为GETV的实验室诊断和现场监测提供了可靠工具。

　　

¹亮点

²病毒、细胞、抗体与试剂

猪睾丸细胞（ST）和人胚胎肾细胞（HEK-293T）购自美国典型培养物保藏中心（ATCC），使用添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的DMEM培养基培养。表达红色荧光蛋白的重组GETV（GETV-RFP）在ST细胞中增殖并测定滴度。

³GLuc-E2的构建与表达

为生成LIPS检测所需重组蛋白，成功构建真核质粒pCAGGS-Gluc-E2-Strep II（图1A），转染HEK-293T细胞后产生C端带Strep-tag II的GLuc-E2融合蛋白。转染48小时（hpt）后通过猪GETV阳性血清进行免疫荧光 assay（IFA）验证蛋白成功表达（图1B）。Western blot分析（图1C）进一步证实了该蛋白的特异性。

⁴讨论

自2017年首次爆发以来，GETV在中国迅速传播，给养猪业造成重大损失并对公共卫生安全构成威胁。目前尚无有效疫苗或治疗药物，因此早期诊断和严格生物安全措施对防控至关重要。准确简便的血清学抗体检测方法对大规模流行病学监测和疫情控制具有重要意义。

⁵结论

我们成功建立了一种基于GLuc-E2的LIPS检测方法，该技术具备快速、灵敏、可靠的特点，适用于猪GETV感染的实验室诊断和现场血清流行病学研究，为疫情防控提供了强有力的技术支撑。